替米考星纳米乳的制备及其质量评价

【目的】制备替米考星纳米乳,并进行质量评价。【方法】通过伪三元相图法优选处方,以吐温-80为表面活性剂、无水乙醇为助表面活性剂、IPM为油相制备替米考星纳米乳,并对其形态特征、稳定性和体外药效进行评价。【结果】替米考星纳米乳的最佳处方是:替米考星5.5%,无水乙醇18.5%,吐温-80 27.5%,IPM 5%,蒸馏水43.5%(各组分含量均为质量分数)。替米考星纳米乳在透射电镜下呈圆形,激光粒度分析仪测定其粒径为10~25nm。经高速离心和在-4℃、室温、60℃条件下留样观察,外观均未见发生变化。替米考星纳米乳对巴氏杆菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、致病性大肠杆菌、沙门氏菌的最小抑菌浓度分别是1.95,3.9,7.81,3.9和1.95μg/mL。【结论】替米考星纳米乳为澄清透明的淡黄色液体,稳定性良好,对巴氏杆菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、致病性大肠杆菌、沙门氏菌均有较强的抑菌和杀菌作用。     

复方替米考星纳米乳的体外联合抑菌试验

通过单药最小抑菌质量浓度(MIC)测定、联合药敏试验、Kirby-Baueer等,研究复方替米考星纳米乳(TMS-TMPL-NE)对3种临床菌株的体外联合抑菌效应。结果表明,替米考星(TMS)和乳酸甲氧苄啶(TM-PL)联用时表现协同抑菌作用;联用时对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的MIC分别是单用时的1/4和1/8倍,对无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)的MIC均是单用时的1/4倍,对大肠杆菌(Escherichiaco-li)的MIC分别是单用1/4和1/16倍;二者联用对3种病原菌的部分抑菌质量浓度(FIC)指数均不大于0.5;TMS-TMPL-NE对3种病原菌的抑菌直径与对照组相比,差异显著(P0.05),与其他组相比差异极显著(P0.01)。结果表明,TMS-TMPL-NE对3种病原菌的体外联合抑菌性强.     

替米考星长效注射液体外抑菌试验及对人工感染巴氏杆菌雏鸡的保护作用

研究替米考星长效注射液的体外抗菌活性及对仔鸡感染多杀性巴氏杆菌的保护作用.采用试管二倍稀释法,以红霉素、磷酸替米考星、泰乐菌素为对照,测定替米考星长效注射液对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、无乳链球菌、多杀性巴氏杆菌的最小抑菌浓度(MIC).将替米考星长效注射液以20、40、50 mg/kg 3个剂量,磷酸替米考星10 mg/kg,泰乐菌素10 mg/kg,红霉素5 mg/kg皮下注射,治疗人工感染多杀性巴氏杆菌的雏鸡.体外抑菌试验结果显示:替米考星长效注射液对革兰氏阳性菌抑菌效果与磷酸替米考星相当,强于泰乐菌素和红霉素.体内治疗试验结果表明,替米考星高、中、低剂量组疗效明显,均优于磷酸替米考星治疗组和泰乐菌素治疗组(P<0.01).     

复方替米考星纳米乳的制备及其品质评价

制备复方替米考星纳米乳并对其品质进行评价。通过绘制伪三元相图优选处方,以替米考星、氟苯尼考、吐温-80、肉豆蔻异丙酯(IPM)、无水乙醇、1,2-丙二醇(PG)和柠檬酸为原料,制备复方替米考星纳米乳,并考察其结构类型、形态及粒径、稳定性。结果表明,复方替米考星纳米乳透射电镜下呈球形,平均粒径为15.4 nm,多分散系数(PDI)为0.08,粒径分布均匀,稳定性试验显示其未分层,仍为澄清透明纳米乳状液。由试验结果可知,复方替米考星纳米乳稳定性好,制备工艺简单,有望应用于兽医临床。     

替米考星明胶微囊含量测定方法研究

为了建立起科学、准确的替米考星明胶微囊含量测定方法,试验分别建立了紫外分光光度法(UV)及高效液相色谱法(HPLC)2种方法,同时对2种分析方法的专属性、线性、准确度、精密度进行比较验证。结果表明,UV测得替米考星对照品与替米考星微囊均在(291±1)nm波长处有最大吸收峰,且HPLC测得二者的顺反异构体的保留时间基本一致,2种方法辅料均无干扰;线性关系试验中,替米考星对照品溶液在质量浓度为30.0~90.0μg/m L范围内,2种方法均表现出良好的线性关系,且R2紫外=0.999 4R2液相=0.999 5;准确度试验中,2种方法的平均回收率均在98.0%~102.0%,RSD均小于2%,但紫外法测得质量浓度45μg/m L的供试品平均回收率为97.98%,没有达到规定要求;精密度试验中,2种方法的RSD均小于2%。因此,UV法与HPLC法都基本满足测定替米考星明胶微囊含量的要求,而采用HPLC法测定则更为准确,其可以用作对替米考星明胶微囊进行质量控制的测定方法。     

耐药猪链球菌膜蛋白图谱分析及能量抑制剂对其敏感性的影响

为证实国内临床分离的动物源链球菌菌株中是否存在与红霉素耐药性相关的主动外排机制,选取含有mefA基因和ermB基因和不含mefA/ermB基因的链球菌耐药菌株和青霉素、红霉素均敏感菌株,在能量抑制剂氰氯苯腙(CCCP)存在时,采用棋盘法分析红霉素、阿齐霉素、替米考星、青霉素对分离菌MIC的影响,并采用SDS-PAGE电泳分析分离株的膜蛋白图谱.结果显示:CCCP可对含有mefA基因的耐药菌株产生影响,可增强其对红霉素、阿齐霉素的敏感性,但不影响其对替米考星和青霉素的敏感性.含有ermB基因、不含mefA/ermB基因的耐药菌,对红霉素、阿齐霉素、替米考星和青霉素的敏感性不受CCCP的影响.菌株膜蛋白的SDS-PAGE电泳图谱显示,含有mefA基因的耐药菌株与其他菌株的膜蛋白图谱差异较大,其膜蛋白条带多而深浓,在45 000处有明显的条带,其他菌株无该条带,推测该蛋白可能是膜主动外排的相关蛋白.本试验结果佐证了在链球菌内存在与红霉素耐药相关的主动外排机制.     

耐药猪链球菌膜蛋白图谱分析及能量抑制剂对其敏感性的影响

为证实国内临床分离的动物源链球菌菌株中是否存在与红霉素耐药性相关的主动外排机制,选取含有mefA基因和ermB基因和不含mefA/ermB基因的链球菌耐药菌株和青霉素、红霉素均敏感菌株,在能量抑制剂氰氯苯腙(CCCP)存在时,采用棋盘法分析红霉素、阿齐霉素、替米考星、青霉素对分离菌MIC的影响,并采用SDS-PAGE电泳分析分离株的膜蛋白图谱.结果显示:CCCP可对含有mefA基因的耐药菌株产生影响,可增强其对红霉素、阿齐霉素的敏感性,但不影响其对替米考星和青霉素的敏感性.含有ermB基因、不含mefA/ermB基因的耐药菌,对红霉素、阿齐霉素、替米考星和青霉素的敏感性不受CCCP的影响.菌株膜蛋白的SDS-PAGE电泳图谱显示,含有mefA基因的耐药菌株与其他菌株的膜蛋白图谱差异较大,其膜蛋白条带多而深浓,在45 000处有明显的条带,其他菌株无该条带,推测该蛋白可能是膜主动外排的相关蛋白.本试验结果佐证了在链球菌内存在与红霉素耐药相关的主动外排机制.     

猪源彭氏变形杆菌分离鉴定及药敏试验

以患子宫炎的后备母猪的脓性分泌物为样本,进行病原菌分离,通过培养特性试验、生化试验、16S r RNA同源性比对和小鼠致病性试验,鉴定其中的一株优势菌为具有一定致病力的彭氏变形杆菌。24种常用抗菌药物体外药敏试验结果显示,该菌对头孢曲松、头孢噻呋、氧氟沙星、恩诺沙星、氟苯尼考敏感,对阿莫西林、诺氟沙星、环丙沙星、阿米卡星、卡那霉素、林可霉素、大观霉素、替米考星等药物耐药。     

罗非鱼海豚链球菌的分离鉴定及药敏试验

为明确广东佛山某罗非鱼鱼场暴发疑似链球菌病的病原情况,应用脑心浸液培养基、胰蛋白大豆琼脂 培养基对患病罗非鱼的肝、胆组织进行细菌分离,对获得的革兰氏阳性链球菌应用16S rDNA 引物进行基因序列鉴 定,并对被确定的链球菌进行基因进化分析,同时进行阿奇霉素、链霉素、阿米卡星等10 种抗生素的药敏试验。结果 表明,分离获得革兰氏阳性链球菌1 株,经16S rDNA 基因扩增鉴定为海豚链球菌;基因进化分析显示,该菌与海豚 链球菌和禽的副乳链球菌亲缘关系最近;药敏试验结果显示,该菌对阿奇霉素和头孢噻肟中度敏感,对其他抗生素 不敏感。     

替米考星新剂型的运用研究进展

替米考星是有效治疗动物感染性疾病的畜禽专用抗生素,但由于其味苦、流动性差、分散性低等缺点影响了应用。本文主要从纳米乳、微丸、脂质体、微囊、微球等5个方面对替米考星的新剂型进行跟踪,结果表明,替米考星新剂型有利于改善药物的口感,减少对胃肠道的刺激性,延缓作用时间,提高生物利用度。     

环丙沙星与粘菌素联合对猪大肠杆菌的体外抗菌研究

测定了环丙沙星与粘菌素对分离的猪大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)及两药联用对猪大肠杆菌的部分抑菌浓度(FIC)指数。实验结果表明:环丙沙星对5株大肠杆菌的MIC≥32μg/mL,粘菌素的MIC≥16μg/mL;环丙沙星与粘菌素联用时,FIC指数介于0.09375~0.125,并可同时显著降低两药的MIC值,表现为显著的协同作用。     

5种中草药和9种抗生素对养殖鳗鲡主要致病菌的抑制作用

[目的]探讨5种中草药和9种抗生素对养殖鳗鲡主要致病菌的抑制作用及最低抑菌浓度。[方法]采用琼脂稀释法测定了5种中草药(五倍子、石榴皮、大黄、虎杖、黄芩)和9种抗生素类药物(盐酸林可霉素、硫酸庆大霉素、硫酸阿米卡星、硫酸链霉素、青霉素钠、阿莫西林、诺氟沙星、土霉素、磺胺甲噁唑)对12株养殖鳗鲡致病菌的体外抑菌效果。[结果]5种中草药对12株主要致病菌均有较好的抑菌作用,平均最低抑菌浓度(MIC)范围为0.063～6.000 mg/ml。9种抗生素类药物中有3种抗生素对12株致病菌有较好的抑制效果,分别是硫酸庆大霉素、硫酸阿米卡星和诺氟沙星,其MIC≤10 mg/L。12株致病菌对硫酸庆大霉素敏感(MIC≤8 mg/L)的有10株,占83.3%;对硫酸阿米卡星敏感(MIC≤8 mg/L)的有4株,占33.3%;对诺氟沙星敏感(MIC≤8 mg/L)的有7株,占58.3%。[结论]五倍子、石榴皮、大黄、虎杖、黄芩5种中草药以及硫酸庆大霉素、硫酸阿米卡星、诺氟沙星3种抗生素类药物对12株养殖鳗鲡致病菌有较好的抑制效果。     

中药双联用复方对养殖鳗鲡主要致病菌的抑制作用研究

筛选单用抑菌作用较强的6种中药药材,依据棋盘法设计15种双联用复方,采用超微药粉琼脂稀释法测定各系列浓度组合的复方对养殖鳗鲡18株常见致病菌的抑制作用．实验结果表明,15种双联用复方对18株致病菌中绝大多数菌株的抑制作用比6种中药单用的抑菌作用强,呈现协同效应（FIE≤1）的比例占85．7％,其中显著协同（FIC≤0．5）占20．4％;复方抑菌作用未发生变化（1〈FIC〈2）的占11．1％;仅3．2％出现拮抗作用（FIE≥2）．说明,合理的中药联用可提高中药单用对致病菌的抑制作用,降低复方中单个中药的抑菌浓度．     

双黄连口服液联合青霉素G对金黄色葡萄球菌的体外抗菌作用研究

用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)介绍的方法,分别测得双黄连口服液和青霉素G对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC);使用棋盘联合药敏试验法,以部分抑菌浓度(Fractional inhibitory concentration,FIC)指数为指标,观察双黄连口服液和青霉素G联用对金黄色葡萄球菌的抗菌作用.结果表明,双黄连口服液对金黄色葡萄球菌的MIC是46.88 mg/mL(稀释度1:32);青霉素G对金黄色葡萄球菌的MIC是0.25 U/mL;双黄连口服液和青霉素G联用对金黄色葡萄球菌的FIC指数是0.125.双黄连口服液联用青霉素G对金黄色葡萄球菌联合药敏结果呈协同作用.     

氟苯尼考与黏菌素联用对猪大肠杆菌与链球菌的体外抗菌作用

采用棋盘法,测定了氟苯尼考与黏菌素联用对猪大肠杆菌、链球菌分离株的体外抗菌活性。结果表明:猪大肠杆菌、链球菌分离株均对氟苯尼考呈现出耐药性,其最小抑菌浓度(MIC)为0.64~5.12 mg/L,大部分大肠杆菌分离株对黏菌素耐药,仅对其中一株有明显效果。棋盘法测得氟苯尼考与黏菌素联合对猪大肠杆菌、猪链球菌分离株的部分抑菌浓度(FIC)指数为0.031 26~0.140 63,均为协同作用。当浓度大于或等于0.16 mg/L时即呈现出协同作用。     

赶黄草提取液与抗菌药联用对金黄色葡萄球菌的体外抑菌研究

[目的]测定赶黄草水煎液与碱提液分别与阿米卡星、环丙沙星、四环素、阿莫西林联合用药时对离体金黄色葡萄球菌的分级抑菌浓度指数(FIC),比较分析联合用药效果。[方法]分别用水煎和碱提法提取赶黄草的有效成分,然后通过微量肉汤稀释法测取各种药物单独用药与联合用药时的最低抑菌浓度(MIC),并计算出FIC。[结果]赶黄草水煎液与四环素联合用药对鸭源金黄色葡萄球菌及赶黄草碱提液与阿米卡星联合用药后对金黄色葡萄球菌标准菌株表现为相加作用外,其余赶黄草碱提液与水煎液分别与四种抗菌药联合用药对金葡标`准菌株及鸭源菌株均表现为无关作用。[结论]结果为临床使用赶黄草中西联合用药防治鸭葡萄球菌病提供了理论依据。     

油樟油抑制细菌生长的活性试验

为检测抑菌效果,对6种细菌的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)和生长量进行了测定。实验结果表明,油樟油的MIC在12.5～3.13μL/mL,MBC在25～3.13μL/mL,生长量在72h内细菌生长仍受到抑制。抑制大肠杆菌效果最强,抑制金黄色葡萄球菌效果最弱。     

日本鳗鲡肝肾病原菌及其防治中药的研究

从发病日本鳗鲡（Anguilla japonica）的肝脏和肾脏分离到优势菌并命名为AJL01,经人工感染试验证实该菌为引起日本鳗鲡肝肾病的病原菌,其半数致死量为2.6×103 cfu/g;通过菌体、菌落形态特征、GYZ-15EV鉴定系统和16S rDNA同源性等综合鉴定分析,确认AJL01为迟钝爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）;采用五倍子、大黄、石榴皮、虎杖、黄芩5种中药单用及其两两配伍组成的10种复方对该菌进行抑菌试验,结果显示：单用时均可抑（杀）该菌,抑菌浓度（MIC）和杀菌浓度（MBC）相同,均为0.5～3.0 mg/mL;10种复方中6种呈现显著协同或协同作用,其中大黄＋石榴皮、石榴皮＋虎杖、五倍子＋大黄3种复方可显著协同抑制该菌生长,FIC〈0.5,MIC和MBC均不大于0.47 mg/mL.     

牛心朴子生物碱对奶牛乳房炎病原菌的体外抑菌试验

对4例临床型奶牛乳房炎的乳汁进行病原分离及鉴定,分离出了金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和大肠杆菌。选择牛心朴子生物碱,采用试管2倍稀释法进行体外抑菌试验,测其最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。结果显示：牛心朴子生物碱对3种菌都有不同程度的抑制作用,对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、大肠杆菌分离株的MIC及MBC分别是12.5mg/mL、1.561 25mg/mL、6.25mg/mL和6.25mg/mL、1.561 25mg/mL、3.125mg/mL。