拮抗微生物对灰葡萄孢菌的生物防治作用及其应用前景

阐述了木霉菌、酵母菌、粘帚霉菌、芽孢杆菌等拮抗微生物对灰葡萄孢菌的拮抗机制、工业生产与商业应用的现状 ,并展望了今后的研究趋势与发展前景     

木霉菌对灰葡萄孢菌的拮抗作用

对采自宁夏14个市县的170份土样及其它材料进行分离,得到96个木霉菌株,采用形态分类方法鉴定出9种木霉菌以及2种未知名菌种．它们分别为哈茨木霉（Trichoderma harzianum）、绿色木霉（T．viride）、长枝木霉（T．longibrachiatum）、康氏木霉（T．koningii）、拟康氏木霉（T．pseudokoningii）、项孢木霉（T．fertile）、黄绿木霉（T．aureoviride）、深绿木霉（T．atroviride）、钩状木霉（T．hamatum）以及T．sp1和T．sp2。拮抗作用和抑菌活性测定结果表明：11种木霉菌对葡萄、番茄和黄瓜灰霉病的致病菌——灰葡萄孢菌（Botrytis cinema Petssp．）均有不同程度的拮抗作用,其中哈茨木霉、绿色木霉、黄绿木霉、钩状木霉和T．sp1对病原菌的拮抗作用及抑菌活性显著,其生长速度比病原菌平均快1．1～3．0倍：在对峙培养中拮抗系数达Ⅰ级或Ⅱ级．其抑菌率高迭98．78％。     

拮抗细菌R26发酵滤液对灰葡萄孢菌的抑菌活性研究

在离体条件下,测定了拮抗细菌R26对灰葡萄孢菌的抑制作用,结果表明,R26发酵滤液能抑制灰葡萄孢菌丝生长,EC50值为10.63μL/mL;经R26发酵滤液(40μL/mL)处理后,灰葡萄孢菌体形态发生明显变化;R26发酵滤液能抑制灰葡萄孢菌孢子萌发,并能抑制芽管伸长,当浓度达80μL/mL时,对灰葡萄孢菌产孢量的抑制率达57.51%。     

草莓灰葡萄孢菌生物防治的研究现状及发展前景

草莓灰霉病的生物防治目前研究较为广泛的是拮抗菌的筛选、抗菌素的纯化、抗菌机理的研究。一方面,在果蔬生长阶段采取生物防治,有效抑制灰霉菌的侵染;另一方面,在储存运输过程中,采取保险防腐手段,抑制灰霉菌感染所致的腐烂变质。     

重寄生放线菌F46和PR对灰葡萄孢的抑制作用

测定了2株重寄生放线菌对灰葡萄孢的作用效果。结果表明,重寄生放线菌F46(Streptomycessp.)和PR(Streptomycessp.)对灰葡萄孢分生孢子萌发和芽管伸长都有一定的抑制作用,镜检可以观察到F46和PR在灰葡萄孢菌丝上产生附着胞、缠绕靶标菌丝,使靶标菌丝畸形等现象;诱发接种后2株重寄生放线菌对苹果、草莓、番茄采后灰霉病均有不同程度的控制作用,在低温下的防效优于高温,提前诱发接种的防效优于同时接种。     

灰葡萄孢拮抗细菌的种类鉴定及生长条件研究

经形态和生理生化鉴定,对灰葡萄孢（Botrytis cinerea Pers.）拮抗能力强、防病效果好的3株细菌进行分类,W10为地衣芽孢杆菌[Bacillus licheniformis(Weigmann)Chester],W3和Y2－11－1为多粘类芽孢杆菌[Paenibacillus polymyxa(Prazmowski)Ash et al]。这2种对蔬菜灰霉病的高效拮抗菌为中国首次报道和应用。3株拮抗细菌的生长条件基本一致,最适培养时间为24－72h,最适生长温度是27－30℃,最适培养液pH值为7－8。     

灰葡萄孢拮抗细菌营养与发酵配方的研究

对新筛选的灰葡萄孢生防细菌即地衣芽孢杆菌（B acillus licheniformis)W10和多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa)W3、Y2-11-1的营养要求及发酵培养基配方进行了研究。结果表明：3株拮抗细菌的最佳发酵配方,菌株W10为1%麦芽糖、4%黄豆饼粉、0.2%NaNO3、0.02%K2HPO4和0.05%酵母膏,菌株W3为2%蔗糖、4%黄豆饼粉和0.4%酵母膏,菌株Y2-11-1为1%麦芽糖、2%黄豆饼粉、0.2%NaNO3、0.02%K2HPO4以及0.2%酵母膏。     

与灰葡萄孢致病性相关的真菌毒素及胞外酶

植物病原菌灰葡萄孢引发的灰霉病能侵染大部分经济作物和观赏植物,是一种严重的植物病害。灰葡萄孢侵染植物使植物细胞死亡是一个复杂的过程,这个过程涉及了多种真菌毒素,胞外酶和其它小分子物质。概述与灰葡萄孢致病性相关的主要真菌毒素和胞外酶,并讨论他们作用机理,旨在为研究靶标性的抗灰霉真菌剂提供参考。     

大丽轮枝孢和灰葡萄孢生防放线菌的分离筛选

采用诱捕分离法从土壤中分离到28株放线菌,以大丽轮枝孢(Verticillium dahliae)和灰葡萄孢(Botrytis cinerea)作为靶标菌,通过皿内拮抗试验从中筛选出效果明显的SW6,SW9,SW16,SW20 4株生防菌株,其发酵原液对靶标菌的抑制效果明显高于发酵滤液和菌丝初提液。其中,菌株SW20的发酵液对2种靶标菌均有较强的抑制作用。抗药性测定结果表明,4株生防菌株对链霉素最为敏感,对供试杀菌剂抗性较强。     

一个拮抗灰葡萄孢菌的AMP核苷酶基因的生物信息学分析

运用生物信息学工具和软件对一个从土壤宏基因组文库中获得的AMP核苷酶基因进行初步预测和分析,该基因的最大开放阅读框为612 bp,编码203个氨基酸,预测的蛋白质分子量为22.186 7 kDa,是一个小分子量疏水性脂溶蛋白,含有5个蛋白激酶C磷酸化位点,1个酪蛋白激酶磷酸化位点,3个N-豆蔻酰化位点,这些位点均与细胞内信号传导、蛋白定位以及黏附等过程有关,推测该基因可能在拮抗灰葡萄孢菌过程的信号转导和分子识别中发挥重要作用。     

灰葡萄孢分生孢子萌发的条件研究

灰葡萄孢分生孢子萌发的最适温度为 1 9℃ ,萌发率达 94 .3 %;在空气较多的环境中孢子萌发率较高 ,达87.8%,淹水则不利于孢子萌发 ,萌发率仅为 5.8%。 1 %蔗糖、1 %葡萄糖、1 %乳糖、1 %硫酸铵、0 .2 mol/ L磷酸二氢钾、番茄汁液都可以促进分生孢子萌发 ,以 1 %蔗糖效果最好。分生孢子在 p H3～ 9的条件下均可萌发 ,以 p H5最为适宜。孢子悬浮液在高浓度 ( 6× 1 0 5以上 )下会抑制孢子萌发 ,光照和黑暗处理对孢子的萌发影响不大     

酵母菌菌株4-41的分类属性鉴定及其对灰霉菌的防病机制研究

为明确一株对灰霉菌具有明显抑菌效果的酵母菌菌株4-41的分类地位,明晰其抑菌防病机制,通过形态特征和26S rDNA序列分析对其进行鉴定,并利用平板对峙法检测其抗菌谱,借助灰霉菌与圣女果互作体系验证其在果实上的抑菌活性,检测其在果实伤口处的定殖动态,产挥发性抑菌物质、氨气、铁载体的能力以及溶磷、溶锌和生物成膜能力,揭示其抑菌机制。结果表明,菌株4-41为Cyberlindnera saturnus,该菌株对6种植物病原菌具有抗性,其中对灰霉菌（Botrytis cinerea）拮抗能力最强,能显著抑制灰霉菌对圣女果果实的侵染。菌株4-41能产挥发性抑菌物质,具有产铁载体和氨气的能力,能溶解培养基中的磷酸盐和氧化锌,具有生物膜形成能力,能诱导圣女果中过氧化物酶（POD）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）、几丁质酶（CHI）和β-1,3-葡聚糖酶（GLU）活性升高,抑制多酚氧化酶（PPO）活性。综上,拮抗酵母菌Cyberlindnera saturnus 4-41能够有效抑制灰霉菌的生长,可作为灰霉菌生物防治的有效拮抗菌材料。     

哈茨木霉菌对灰葡萄孢菌生长的抑制及培养基优化研究

哈茨木霉菌是一种重要的生防菌,灰葡萄孢菌是番茄灰霉病的病原菌,通过对峙试验研究哈芡木霉菌对灰葡萄孢菌的抑制作用。结果表明,该哈茨木霉菌在室内能够很好地抑制灰葡萄孢菌的生长。哈茨木霉菌的培养采用固液双相培养的方法,用正交试验优化法分别对液体培养基和固体培养基进行优化。结果表明,该哈茨木霉菌在优化好的固液双相培养基上能产生5.6×109个孢子。     

拮抗木霉菌在生物防治中的作用

简述了拮抗木霉菌的抑菌作用机理、生防工程菌株的构建、生防制剂的研究及其应用现状。展望了拮抗木霉菌在生物防治上的应用前景     

灰葡萄孢产孢和孢子萌发条件

以灰葡萄孢(Botrytis cinerea)菌株B05.10为试验材料,研究了培养基、温度、pH值以及某些营养因子对菌丝生长、产孢量和孢子萌发率的影响.结果表明,B05.10菌株在PSA培养基、pH 6.0,22℃培养7 d时产孢量最多达到1500×104 cfu/皿;在1水琼脂、pH 5.0,22℃条件下4 h时灰葡萄孢孢子开始出现萌发管,12 h时萌发管转变形成分枝的菌丝,添加木糖、果糖和可溶性淀粉等营养因子对提高孢子萌发率也有明显促进作用.     

中华散尾鬼笔提取物对灰葡萄孢霉菌的作用机制

为探究中华散尾鬼笔提取物对灰葡萄孢霉菌的抑制作用及抑菌机理,通过抑菌试验、酶活试验、电导率试验及菌丝微观结构观测,确定中华散尾鬼笔提取物对灰葡萄孢霉菌的抑制作用,分析提取物对相关酶活性、培养液电导率和菌丝结构变化的影响。结果表明:中华散尾鬼笔提取物对灰葡萄孢霉菌菌丝生长的EC50为4. 428 mg/m L;提取物对灰葡萄孢霉菌的过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、多酚氧化酶(PPO)、果胶酶(Pectinase)、纤维素酶(CL)活性均表现出抑制效果,其中第2天的SOD和PPO活性抑制率分别可达到65. 48%和53. 86%,POD的抑制效果在第4天达到峰值,抑制率为68. 65%;提取物对灰葡萄孢霉菌菌丝形态产生显著影响,导致菌丝生长异常、形态干瘪、菌丝分隔处出现内凹,并伴有菌丝破裂的现象产生。提取物处理的菌体细胞膜透性增强,致各时间点培养液电导率显著高于对照,其中提取物处理的第2天电导率为1 230. 579μS/cm,为对照电导率的1. 3倍。这表明中华散尾鬼笔提取物对灰葡萄孢霉菌有抑制作用,且提取物能抑制与菌丝生长及致病相关的几种酶的活性,影响细胞膜渗透性及菌丝体形态。     

灰葡萄孢菌两种发酵粗提物对烟蚜的杀虫活性初步研究

 用浸渍法测定灰葡萄孢菌的固体和液体发酵粗提物对烟蚜的触杀活性。结果表明：液体和固体的发酵产物对烟蚜都有杀虫活性，且固体发酵产物的触杀活性大于液体发酵产物，30 h后的LC₅₀分别为0.483 6 mg/mL和3.803 6 mg/mL。     

灰葡萄孢对速克灵抗性的研究

从江苏各地采集番茄等15种蔬菜灰霉病标本,经分离获灰葡萄孢(Botrytis cinerea Pers.)127株。以速克灵有效成分5μg·mL~(-1)为标准,检测灰葡萄孢对速克灵的抗性。结果表明:病菌抗速克灵菌株频率平均为11.0％。抗性菌株中,85.7％属低抗水平,EC_(50)值在2.21～6.67μg·mL~(-1)之间。但菌株D_(1-3)抗药性水平极高,EC_(50)和EC_(95)分别达263.78和6000μg·mL~(-1)以上,EC_(95)值约是敏感菌株的1400倍。抗性菌株转管培养15和30代后,抗性水平仍较稳定。抗性菌株在菌丝生长速度、分生孢子与菌核形成以及对番茄致病力等方面无明显规律性,但高抗菌株D_(1-3)具有很强的生长、繁殖能力和致病力。     

三种生防细菌对新疆灰霉病菌(Botrytis cinerea)的拮抗作用

[目的]明确生防芽孢杆菌A57、A178、N1729在植物病害生物防治中的实用价值,并为后续的生防制剂的研发提供科学依据,对其在新疆各地蔬菜灰霉病菌的抑菌活性进行了研究.[方法]采用平板对峙法检测三种生防细菌抑菌活性,并检测其无细胞滤液的抑菌效果,无细胞滤液利用摇瓶发酵后经微孔滤膜过滤制备,用滤纸片法测定抑菌圈,确定抑菌效果.[结果]A178的活菌体拮抗效果最强,平均抑菌率达45.67;, N1729菌株分泌物的拮抗效果最强,平均抑菌率为44.61;,可作为灰霉病的有效生防菌;而A57的抑菌效果最差,不能作为后灰霉病菌有效的生防菌使用.[结论]A178、N1729这两个菌株具有很好的开发应用前景.