肉苁蓉提取物对H_2O_2致兔肾小管上皮细胞损伤的影响

通过体外培养兔肾小管上皮细胞,研究H_2O_2对细胞增殖作用及肉苁蓉提取物对H_2O_2致肾小管上皮细胞损伤的影响。通过细胞形态观察,采用MTT法测定H_2O_2对兔肾小管上皮细胞增殖作用的影响及肉苁蓉水提、醇提物2、20、200mg·L-1三个剂量组的保护作用,测定细胞LDH释放量。结果表明,随着H_2O_2浓度的增加,形态改变的细胞数量逐渐增多,贴壁细胞数量逐渐减少,细胞增殖抑制率越大,细胞LDH释放量越多,呈浓度依赖性,肉苁蓉醇提物和水提物高浓度组能够显著降低H_2O_2对兔肾小管上皮细胞增殖的抑制作用(P0.01),肉苁蓉醇提物和水提物的高、中、低剂量组均能使H_2O_2作用后兔肾小管上皮细胞LDH释放量极显著低于模型组LDH的释放量(P0.01),结果呈浓度依赖性。H_2O_2对兔肾小管上皮细胞增殖具有不同程度的影响,肉苁蓉对H_2O_2致兔肾小管上皮细胞损伤具有保护作用。     

Legumain对TNF-α和CHX共同诱导的细胞凋亡的拮抗作用

目的探讨Legumain（LGMN）对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和放线菌酮（CHX）共同诱导的细胞凋亡的抑制作用,为进一步研究Legumain在肿瘤细胞生长增殖的分子机制以及相关的肿瘤治疗提供实验基础和理论依据。方法采用Western Blot和水解多肽发色底物法分别测定人胚胎肾（HEK）293细胞株和小鼠成纤维细胞L929细胞株中的Legumain表达量,细胞增殖实验（MTT法）检测Legumain对由TNF-α和CHX共同介导的细胞增殖抑制的拮抗作用,激光共聚焦显微镜和流式细胞技术观察Legumain的抑制细胞凋亡效果。结果实验组中的HEK293＋Legumain细胞和采用AEPI预先处理的L929细胞对一定浓度范围的TNF-α和CHX共同介导的细胞增殖抑制有的拮抗作用（P＜0.01或0.05）;激光共聚焦显微镜观察,Annexin V-PI双染法结果表明实验组的HEK293＋Legumain细胞未发生细胞凋亡现象;流式细胞技术,JC-1染色法测定细胞线粒体膜电位结果表明实验组的HEK293＋legumain细胞的凋亡百分比明显低于对照组（＜0.01）。结论Legumain具有拮抗由TNF-α和CHX共同诱导的细胞凋亡作用。     

茶多酚对过氧化氢诱导鹅小肠上皮细胞氧化损伤的保护作用

试验旨在探讨茶多酚(TP)对过氧化氢(H_2O_2)引起鹅小肠上皮细胞的损伤作用。选取25～26胚龄马岗鹅胚为试验材料,通过酶消化法作原代鹅小肠上皮细胞分离与体外培养;采用不同浓度H_2O_2诱导细胞建立氧化应激损伤细胞模型,茶多酚预处理细胞氧化应激损伤干预;采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,比色法检测细胞中丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果表明,成功获得鹅小肠上皮细胞;与对照组相比,400μmol·L~(-1)H_2O_2作用鹅小肠上皮细胞2 h,细胞出现明显损伤,细胞存活率显著降低(P0.05),而不同浓度茶多酚显著提高细胞存活率(P0.05);其中100μg·mL~(-1)茶多酚提前干预10 h明显改善H_2O_2导致的鹅小肠上皮细胞存活率下降(P0.05);抑制H_2O_2诱导的胞内脂质过氧化产物MDA和糖酵解酶LDH产生,且抑制H_2O_2导致的抗氧化酶系SOD和GSH-Px活性降低(P0.05)。研究结果表明,在鹅小肠上皮细胞中,茶多酚可能通过降低脂质过氧化和细胞损伤程度及提高抗氧化酶活性,实现对H_2O_2引起细胞氧化应激损伤保护作用。     

基于AFM的人参水提物对VERO细胞氧化损伤作用研究

[目的]研究人参水提物对VERO细胞在体外培养中的氧化损伤。[方法]采用细胞体外培养技术、MTT比色法、SOD和MDA试剂盒法、原子力显微镜(AFM)观察法,研究人参水提物对VERO细胞氧化损伤的机制。[结果]人参水提物对VERO细胞能够起到明显的增殖抑制作用。人参水提物对VERO细胞具有一定的的氧化损伤作用且有一定的剂量及时间依赖性。原子力显微扫描成像结果表明正常生长的VERO细胞表面光滑、细胞体积饱满,而人参水提物处理组细胞膜损坏现象明显,细胞表面的粗糙度较大。[结论]人参水提物对VERO细胞具有一定的氧化损伤作用,其作用机制可能与细胞膜的损伤有关。     

扇贝多肽对H2O2损伤HaCaT细胞的保护作用

[目的]建立H2O2诱导HaCaT细胞氧化应激损伤的体外模型,探讨扇贝多肽(PCF)对H2O2损伤HaCaT细胞的保护作用及其作用机制。[方法]采用不同浓度的H2O2(50、100、200、300、500μmol/L)作用HaCaT细胞12 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率;用不同浓度(1.42、2.84、5.68 mmol/L)的PCF分别处理细胞12 h后,加入H2O2(300μmol/L)继续作用12 h,采用CCK-8法检测细胞活力,采用酶生化法法测定细胞上清液中LDH活性以及细胞质中GSH-Px、T-AOC和CAT水平。[结果]与正常组相比,50~500μmol/L浓度的H2O2依赖性地引起HaCaT细胞氧化损伤,300μmol/L的H2O2使存活率降低到56%(P0.01);与模型组相比,不同浓度的PCF均可保护H2O2诱导的氧化损伤,增加细胞存活率,降低细胞LDH的释放量,提高GSH-Px、T-AOC和CAT含量,增强细胞抗氧化作用。[结论]扇贝多肽能对抗H2O2诱导的氧化应激,对细胞受损具有保护作用,其机制可能与提高抗氧化酶活力有关。     

防风提取物对肝脏的保护作用

为研究防风提取物(防风水提物和防风醇提物)对肝脏的保护作用,将试验小鼠平均分为9组:空白组,CCl4模型组,阳性药组,防风水提物高、中、低剂量组,防风醇提物高、中、低剂量组。采用四氯化碳(CCl4)诱导小鼠急性肝损伤模型,观察了防风水提物和醇提物对小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性、肝匀浆超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影响,并进行了各组间及组内的比较。结果表明:防风水提物和醇提物高剂量组能显著降低小鼠血清ALT、AST活性,降低肝匀浆MDA含量,提高SOD活性。这说明防风提取物具有一定的保肝作用,其作用机制可能与抗脂质过氧化有关。     

NF-κB抑制剂PDTC对卵巢癌细胞HO8910增殖、凋亡的影响

应用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测不同浓度吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)、顺铂(DDP)和联合应用PDTC与DDP对HO8910细胞生长抑制的影响;采用流式细胞仪检测不同浓度PDTC作用HO8910后的细胞凋亡率.结果表明: ① PDTC浓度为25、50、100和200 μmol·L-1时,作用12、24、36 h均明显抑制HO8910细胞的增殖,与对照组比较差异极显著(P<0.01),并具有时间、剂量依赖性.②顺铂联合应用PDTC时能显著提高顺铂杀伤卵巢癌细胞作用.③ 25、50、100 μmol·L-1 PDTC诱导卵巢癌HO8910细胞凋亡.PDTC能有效抑制卵巢癌HO8910细胞增殖并能够增强顺铂化疗作用,提高疗效.     

不同菱角壳提取物抑制肺癌A549细胞生长的研究

目的研究不同菱壳水和乙醇提取物的抗癌活性。方法采用Folin比色法测定不同品种菱壳提取物中多酚的含量,通过MTT法测定二角菱壳、四角菱壳的水提取物、醇提取物对肺癌A549细胞生长抑制作用。结果四角菱壳多酚含量高于二角菱壳,醇提物多酚含量高于水提物;二角菱壳醇提取物对肺癌A549细胞的抑制率高于水提物,差异具有统计学意义(P<0.01);四角菱壳水提物对抑制率高于二角菱壳水提物肺癌A549细胞的生长,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论菱角壳提取物对肺癌A549细胞生长具有较强的抑制作用,且菱角壳的醇提取物优于水提取物,四菱角壳优于二角菱壳。     

中国仓鼠卵巢细胞和人胚肾T细胞骨架及其迁移特性的比较

【目的】比较中国仓鼠卵巢(CHO)细胞和人胚肾T(HEK293T)细胞的迁移能力,筛选适用于细胞骨架形态和外源基因对细胞迁移影响研究的细胞系。【方法】通过免疫荧光组织化学比较CHO和HEK293T细胞骨架的形态差异,通过延时成像和划痕试验比较细胞迁移能力,通过免疫印迹比较2株细胞系细胞骨架基因的相对表达,并从细胞骨架差异和结构基因的选择性表达方面解释细胞迁移能力的差异。【结果】CHO和HEK293T细胞系的细胞骨架在形态上存在较大差异,HEK293T细胞系的核质比是CHO细胞的2.25倍;CHO细胞比HEK293T细胞的迁移能力强,是HEK293T细胞的2.9倍;2种细胞内α-Tubulin/β-Actin的比率存在较大差异,CHO是HEK293T的1.2倍。【结论】细胞中微管微丝的差异性分布及结构基因Tubulin和Actin的选择性表达是细胞迁移特性不同的关键因素。CHO细胞适用于涉及细胞骨架形态和外源基因对细胞迁移影响的研究,HEK293T细胞不适用于此类研究。     

泽泻提取物对油酸诱导建鲤脂肪肝细胞损伤中生化指标及CYP1A蛋白表达的影响

为了研究中药泽泻提取物对油酸诱导建鲤脂肪肝变性细胞的保护作用,本实验以0.4 mmol·L-1油酸来构建建鲤原代脂肪肝细胞损伤模型,然后用不同浓度的泽泻提取物处理肝细胞24和48 h后,分别收集细胞和细胞培养液,然后测定谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、碱性磷酸酶(AKP)、胆碱酯酶(CHE)、细胞色素酶P4501A1(CYP1A1)和细胞色素酶P4502E1(CYP2E1)的含量等生化指标以及CYP1A的蛋白表达情况。结果显示,0.4 mmol·L-1的油酸与原代肝细胞共培养48 h可以显著提高肝细胞培养上清中GPT、GOT、TG、TC、AKP、CHE、LDH、CYP1A1和CYP2E1的含量(P0.01或者P0.05),可以诱导肝细胞中CYP1A的蛋白表达。将不同浓度的泽泻提取物(0、1、5、10、20、50μg·m L-1)与脂肪肝细胞共培养24~48 h发现,泽泻提取物能不同程度抑制油酸诱导的GOT、GPT、TG、TC、LDH、AKP、CHE水平和CYP1A1、CYP2 E1含量的升高(P0.01或者P0.05),不同程度降低肝细胞中CYP1 A蛋白表达,以作用时间48 h效果较好。研究证实了泽泻提取物对油酸诱导的鱼类脂肪肝细胞损伤具有保护作用,而泽泻提取物作为鱼类脂肪肝的防治药物还需要进一步的在体研究。