用ELISA法检测饲料中莱克多巴胺含量

近年来全社会对“瘦肉精”猪非常关注．政府出台了一系列相关法律法规。加大了对生产、销售以及在猪饲料、饮水中添加“瘦肉精”等违禁药物的打击力度．同时对饲料、尿样、内脏中“瘦肉精”残留量的检测水平和检测频率也有了很大的提高,对不法分子起了较大的震慑作用。但由于利益的驱使,加之对“瘦肉精”替代品的检测仍处于起步阶段,违法活动并没有停止。现有证据表明。在市场上出现用莱克多巴胺作为“瘦肉精”替代品用于养猪生产中。本试验用ELISA方法对吴江市区域内生产和销售的中大猪配合饲料进行莱克多巴胺含量检测,以摸索有效、快速的莱克多巴胺检测方法。     

氟苯尼考等兽药对莱克多巴胺ELISA检测的影响

莱克多巴胺(Ractopam ine,商品名Paylean),是苯乙醇胺类β-受体激动剂,用于猪只改善饲料利用率和提高瘦肉率。由美国E lanco AnimalHealth公司(礼来公司的分公司)开发成功并被美国FDA于2000年7月份批准生产应用于养猪业,也是迄今唯一被FDA批准应用于食品动物提高瘦肉率的药物[1]。基于莱克多巴胺与克仑特罗为同类药物,其在动物源性食品中如有高浓度的残留可能会对人体健康产生危害,因而在我国目前仍属违禁药物[2-3]。ELISA是莱克多巴胺残留筛选检测的主要方法,具有简单、快速、高通量的优点。但在检测过程中易出现在饲料中用ELISA…     

莱克多巴胺残留检测方法

一、概述"动物源性食品中违禁药物(如β-激动剂、激素、抗生素和精神类药物等)的残留已成了困扰世界范围内食品卫生的难题。药物残留不仅影响我国畜禽产品的出口贸易,同时威胁着消费者的健康。许多国家以兽药残留监控为技术壁垒,阻止我国畜产品的正常出口。近年来,由于国家加强对“瘦肉精”克伦特罗的监控,有效打击了生猪养殖中非法使用“瘦肉精”的行为。但是在养殖业中,“瘦肉精”的替代品莱克多巴胺(Ractopamine,RCT)和沙丁胺醇却又悄然兴起。其中莱克多巴胺是一种苯基乙醇胺类药物,属于β-肾上腺素兴奋剂,与瘦肉精一样,是一种“营养再…     

尿样中莱克多巴胺残留ELISA检测试剂盒的比对实验

酶联免疫吸附技术（ELIsA）由于其快速、简便、适合同时处理大量样品的特点，被国内外普遍应用于进行口一兴奋剂等各种兽药残留的筛选检测。国内目前销售的菜克多巴胺残留ELISA试剂盒主要有4种，据悉新的试剂盒还将推出。但国内外尚缺乏对不同莱克多巴胺ELISA试剂盒的检测性能的权威评估。由于不同试剂盒的检测效果可能存在差异，检测试剂不统一，可能导致检测结果差异较大，将不利于政府残留监控计划的实施和企业维护自身权益。本研究拟通过比对检测试验，对不同莱克多巴胺ELISA试剂盒进行评估和比对，为制定合理的莱克多巴胺残留检测技术方案和准确评判检测结果提供科学依据。     

酶联免疫法检测饲料中莱克多巴胺

莱克多巴胺(Ractopamin)属于β-兴奋剂.β-兴奋剂是营养重分配剂的一种,是一类结构和功能类似肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙醇胺类衍生物,它可加快畜禽的生长速度,降低酮体脂肪含量,提高瘦肉率.β2-兴奋剂常见的有克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇等,克伦特罗俗称"瘦肉精".随着我国对克伦特罗监管力度的加大,克伦特罗的使用逐渐减少,其他β 2-兴奋剂的使用逐渐增加.莱克多巴胺是美国最新研制出的一种β 2-兴奋剂,由于莱克多巴胺有类似于盐酸克伦特罗的作用,在动物组织中残留,可能对人体产生不利影响,所以我国农业部、卫生部和国家药品监督管理局明文禁止莱克多巴胺用于动物养殖.目前,我国还未统一监测莱克多巴胺的方法,因此,建立莱克多巴胺的快速准确的测定方法以适合市场监测十分必要.目前,国内测定β 2-兴奋剂测定的方法主要有酶联免疫法、高压液相色谱(HPLC)法及气质联用(GC-MS)法等,而酶联免疫分析技术具有检测快速(检测过程只需2 h)的特点.经试验研究,应用酶联免疫法检测莱克多巴胺,回收率可达到75%～95%,相关系数(r值)可超过0.99,而最低检测限能达到0.5ng/mL.     

氟苯尼考等兽药对莱克多巴胺ELISA检测的影响

本文通过对氟苯尼考等常用兽药对莱克多巴胺ELISA残留筛选检测的影响研究实验。结果表明,这些药物在5ng/ml(或10ng/ml)作为我国动植物检验检疫判定标准下,对莱克多巴胺ELISA检测无影响。     

莱克多巴胺单克隆抗体间接竞争ELISA检测方法的建立

用混合酸酐法将莱克多巴胺(Rac)与匙孔蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联,经紫外光谱扫描确定偶联成功,测得偶联物Rac-KLH浓度为3.6 mg/mL,Rac-BSA浓度为6.2 mg/mL。以偶联物Rac-KLH作为免疫原,免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/O-Ag-14进行融合。以Rac-BSA作为包被抗原,经间接ELISA筛选出阳性细胞株,再用有限稀释法进行多次亚克隆,获得稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D9、1F3、2C11、5C3、3A10、4A8、6B7、6D5、7C11、7D3。其中单克隆抗体5C3和3A10间接ELISA效价1∶500 000,对莱克多巴胺的半数阻断浓度(IC50)均为3.98 ng/mL,对盐酸克伦特罗和沙丁醇胺的IC50均大于2 000 ng/mL;对盐酸克伦特罗和沙丁醇胺的交叉反应率均小于0.2%。间接竞争ELISA检测莱克多巴胺在0.5～100 ng/mL范围内为线性分布,确定的最低检测限为0.5 ng/mL。     

莱克多巴胺的检测方法

莱克多巴胺又名雷托帕明、舒喘灵、权莱克、金莱多巴、Paylean．化学成分为1-（4-羟基苯基）-2-[1-甲基-3-（4-羟基苯基）-丙氨基]-乙醇。动物生产中以RCT盐酸盐形式用作饲料添加剂,称之为盐酸莱克多巴胺（RCT·HCI）。莱克多巴胺（Ractopamine,RAC）与沙丁胺醇（Salbutamol,SAL）是苯乙胺类药物,均为中等极性的疏水性物质,呈酸碱两性。     

莱克多巴胺的检测方法

莱克多巴胺又名雷托帕明、舒喘灵、权莱克、金莱多巴、Paylean．化学成分为1-（4-羟基苯基）-2-[1-甲基-3-（4-羟基苯基）-丙氨基]-乙醇。动物生产中以RCT盐酸盐形式用作饲料添加剂,称之为盐酸莱克多巴胺（RCT·HCI）。莱克多巴胺（Ractopamine,RAC）与沙丁胺醇（Salbutamol,SAL）是苯乙胺类药物,均为中等极性的疏水性物质,呈酸碱两性。     

ELISA检测饲料中莱克多巴胺的不确定度分析

为探讨酶联免疫吸附法(ELISA)检测结果的影响因素,试验分析了ELISA法检测饲料中莱克多巴胺的不确定度。依据JJF 1059-1999《测量不确定度评定与表示》和CNAS-GL06《化学分析中不确定度的评估指南》规定的测量不确定度的基本方法,分析不确定度来源并进行量化,找出主要影响因素。结果显示,ELISA法检测饲料中莱克多巴胺含量为43.75 ng/kg时,其扩展不确定度为6.77 ng/kg,k=2。影响不确定度的主要因素为样品称量、测量重复性和标准曲线拟合。     

三种ELISA法检测猪尿中莱克多巴胺的比较分析

在各种莱克多巴胺检测方法中，适合应用于大批检测样品的是ELISA方法。但目前市场上的大多数检测莱克多巴胺的试剂盒对猪尿样的检测会造成假阳性，有的假阳性率达到33.3％。本实验用三种不同厂家的试剂盒对15份猪尿样进行了检测，通过比较分析得出：对尿样的稀释可以有效的减少阳性的产生，在制备标准曲线时加入尿样背景也可以减少假阳性的产生。方法C的添加回收率在65％以上，可以比较准确的检测猪尿中的莱克多巴胺。     

酶联免疫法检测饲料中莱克多巴胺的探讨

<正>近年来全社会对"瘦肉精"猪非常关注,政府出台了一系列相关法律法规,加大了对生产、销售以及在猪饲料、饮水中添加"瘦肉精"等违禁药物的打击力     

饲料中莱克多巴胺检测前处理方法分析

饲料检测前处理时间几乎占整个分析时间的80%,是决定分析测定效果的关键。文中对饲料及饲料添加剂中莱克多巴胺检测的前期处理方法进行分析总结,探讨了各种检测方法在前处理中的注意事项。     

畜产品中莱克多巴胺残留的快速检测

莱克多巴胺属于β类肾上腺激素,因具有减脂增肉的作用而被广泛用于畜牧生产中,但在动物机体中有较大的残留时会严重威胁人类健康。检测莱克多巴胺有多种方法,而ELISA应用抗原抗体反应,能够对猪尿、猪肝中的莱克多巴胺残留快速进行检测筛选,从而有效控制瘦肉精在动物及人体的残留。     

莱克多巴胺检测方法分析

莱克多巴胺作为瘦肉精克伦特罗的替代产品出现较晚,目前尚没有统一的检测方法.由于其具有不同于克伦特罗的代谢方式,在实际检测中经常出现假阳性及假阴性等问题,而且导致不同检测方法间结果不匹配.文章结合莱克多巴胺的代谢特点,对目前的分析检测方法进行总结,探讨不同检测方法的优缺点,并初步分析符合率低的原因,提出解决方法和建议.     

酶联免疫法检测饲料中莱克多巴胺的探讨

莱克多巴胺(Ractopamine)属于β-兴奋剂。β-兴奋剂是营养重分配剂的一种,是一类结构和功能类似肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙醇胺类衍生物,它可以加快畜禽生长速度,降低酮体脂肪含量,提高瘦肉率。β2-兴奋剂常见的有克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等,克伦特罗俗称"瘦肉精"。随着我国对克伦特罗监管力度的加大,克伦特罗的使用逐渐减少,其他β2-兴奋剂的使用逐渐增加。莱克多巴胺(ractopamine)是美国最新研制出的一种β2-兴奋剂,由于莱克多巴胺有类似于盐酸克伦特罗的作用,在动物组织中残留,可能对人体产生不利影响,所以我国农业部、卫生部、国家药品监督管理局明文禁止莱克多巴胺用于动物养殖,目前我国还未统一监测莱克多巴胺的方法,因此建立莱克多巴胺的快速、准确的测定方法以适合市场监测十分必要。目前国内对β2-兴奋剂测定的方法主要有:酶联免疫法、高压液相色谱(HPLC)法以及气相色谱-质谱朕用法(GC-MS)等,而酶联免疫分析技术具有检测快速(检测过程只需要2h)的特点。经过试验研究,应用酶联免疫法检测莱克多巴胺,回收率可达到95%以上,相关系数(r值)可达到0.99以上,而最低检测限能达到0.5ng/ml。     

ELISA捡测饲料中莱克多巴胺的不确定度分析

为探讨酶联免疫吸附法(ELISA)检测结果的影响因素,试验分析了ELISA法检测饲料中莱克多巴胺的不确定度.依据JF 1059-1999《测量不确定度评定与表示》和CNAS-GL06《化学分析中不确定度的评估指南》规定的测量不确定度的基本方法,分析不确定度来源并进行量化,找出主要影响因素.结果显示,ELISA法检测饲料中莱克多巴胺含量为43.75 ng/kg时,其扩展不确定度为6.77 ng/kg,k=2.影响不确定度的主要因素为样品称量、测量重复性和标准曲线拟合.     

酶联免疫吸附法检测猪肉和猪尿中莱克多巴胺残留

以莱克多巴胺单克隆抗体间接竞争酶联免疫吸附（ELISA）法测定猪肉和猪尿中莱克多巴胺残留。该法对莱克多巴胺的检测限为0.8ng/mL（g）,在空白组织中的添加回收率为80.4%～109.5%,变异系数为5.8%～12.6%。     

液相色谱-串联质谱法检测饲料中的莱克多巴胺

由于莱克多巴胺通过饲料饲喂动物会残留在动物的肌肉与内脏组织中．对饲料中莱克多巴胺进行监测也就显得尤为重要。本文以高效液相色谱一串联质谱法检测饲料中的莱克多巴胺．饲料样品中的莱克多巴胺经酸性三水合乙酸钠溶液提取．离心后经MCX固相萃取柱净化．最后用高效液相色谱一串联质谱仪检测器进行测定;同等条件下绘制工作曲线．莱克多巴胺含量与吸光度值在一定浓度范围内成正比,试样与工作曲线比较定量。经实验．应用高效液相色谱一串联质谱法检测饲料中莱克多巴胺．标准曲线r值≥0．99965;检测回收率均≥80％,批内RSD≤8％。批间RSD≤10％。     

液相色谱荧光法检测饲料中的莱克多巴胺

莱克多巴胺属于β-兴奋剂。β-兴奋剂是营养重分配剂一种,是一类结构和功能类似肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙醇胺类衍生物,它可以加快畜禽生长速度,降低酮体脂肪含量,提高瘦肉率。随着我国对克伦特罗监管力度的加大,克伦特罗的使用逐渐减少,其它β-兴奋剂的使用逐渐增加。现有证据表明,莱克多巴胺作为"瘦肉精"替代品已在养猪生产中被使用。由于莱克多巴胺通过饲料对动物的饲喂会残留在动物的肌肉与内脏组织中,对饲料中莱克多巴胺进行监测也就显得尤为重要。试验以液相色谱-荧光法检测饲料中的莱克多巴胺,饲料样品中的莱克多巴胺经酸性甲醇溶液提取,离心后溶液碱化,经乙酸乙酯粹取和MCX固相萃取柱净化,最后用反相高效液相色谱仪-荧光检测器进行测定;荧光检测器激发波长226nm处,发射波长305nm处检测吸光度,同等条件下绘制工作曲线,莱克多巴胺含量与吸光度值在一定浓度范围内成正比,试样与工作曲线比较定量。经试验,应用HPLC法检测饲料中莱克多巴胺,标准曲线r值≥0.998732;变异系数(CV值)≤0.57%;检测回收率:82.8%～95.6%;回收率标准偏差≤1.0%。