苦皮藤内生真菌Hd3菌株抑菌活性成分分离及结构鉴定

根据活性追踪原理,采用硅胶柱层析以及高效液相色谱等技术对苦皮藤内生真菌Hd3菌株发酵液中的抑菌活性成分进行了分离纯化,得到5个具有抑菌活性的化合物,经质谱和核磁共振波谱技术分别鉴定为3'-氯代杀锥曲菌素、曲地酸、曲地酸甲酯、4',6'-二氯代曲地酸甲酯和 4'-氯代曲地酸甲酯。它们在500 mg/L的浓度下对玉米弯孢菌Curvularia lunata的孢子萌发抑制率分别为100%、67.6%、17.3%、29.1%和 30.4%,其中化合物3'-氯代杀锥曲菌素和曲地酸还对枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis具有强烈的抑制作用。     

一株银杏内生真菌代谢产物抗菌活性初步研究

从浙江长兴采集的银杏茎中分离到一株内生真菌,编号为1028。本文对其产生的代谢产物进行了抑菌活性的初步研究,生测结果表明:离体条件下发酵液对番茄早疫病菌、黄瓜枯萎病菌、菜豆炭疽病菌、葡萄炭疽病菌、水稻纹枯病菌、黄瓜立枯病菌均有较强的抑制作用,对不同病原菌的抑制率分别为:66.7%、48.3%、64.6%、36.5%、57.1%、23.0%。抑菌活性成分在80℃以下趋于稳定,pH为7～8时抑菌效果最强。     

一株银杏内生真菌的鉴定及其活性代谢产物研究

药用植物内生真菌是一类重要的微生物资源,能代谢产生多种生物活性物质,本研究从浙江天目山自然保护区银杏Ginkgo biloba中分离获得1株活性菌株TMSF169。通过形态学和ITS rDNA序列分析,鉴定该菌株为团青霉Penicillium commune。发酵粗提物采用正相硅胶柱层析和Sephadex LH-20凝胶柱层析,以紫外光或碘蒸汽显迹,配合活性追踪,从菌株TMSF169发酵液中分离获得1个具抗真菌及除草活性的化合物TMSF169A,通过质谱和核磁共振波谱等技术将其结构鉴定为圆弧菌醛酸（cyclopaldic acid）。活性测试表明,该化合物具有抗菌活性,对鸭跖草Commelina communis,反枝苋Amaranthus retroflexus,马唐Digitaria sanguinalis、空心莲子草Alternanthera philoxeroides、水稻Oryza sativa等植物均具有致病毒性,对芝麻Sesamum indicum和大豆Glycine max不敏感。结果显示菌株TMSF169具有较好的开发应用价值。     

苦楝内生真菌及其代谢产物的杀虫活性

在对290株苦楝内生真菌分离纯化鉴定的基础上,研究了30株具有代表性的内生真菌及其代谢产物的杀虫活性。结果表明其中5个菌株对马尾松毛虫5d校正死亡率大于60%,杀虫活性最强的KL042菌株经鉴定为球孢白僵菌。球孢白僵菌作为内生真菌,在国内尚未见报道。进一步选取杀虫活性较强的9株内生真菌,研究其代谢产物的胃毒和触杀活性,结果表明拟青霉KL017菌株发酵液10倍浓缩液对柳蓝叶甲胃毒活性最强,48h校正死亡率达90.09%。球孢白僵菌KL042、拟青霉KL017和交链孢KL062发酵液10倍浓缩液点滴马尾松毛虫前胸背板后,48h校正死亡率分别为76.67%、56.67%和53.33%。     

乌桕内生真菌次生代谢产物活性物质的分离、鉴定及活性初报

采用硅胶柱层析、反相硅胶柱层析、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析和薄层层析等方法,对乌桕内生真菌Phomopsis sp.UL-B发酵产物乙酸乙酯萃取物的活性成分分离纯化。结果表明,通过核磁共振氢谱,核磁共振碳谱等现代手段并与文献比对,鉴定得到5个单体化合物。化合物1—5的抑菌试验表明,化合物5活性最好,其对苹果腐烂和苹果轮纹菌最低抑制浓度仅为0.15 mg/m L。     

沙葱内生菌的分离鉴定及抑菌活性

以荒漠植物沙葱为材料,分离筛选出对植物病原菌具有较强拮抗活性的内生菌,可为生防菌剂的开发提供材料。采用多种培养基通过稀释涂布法从沙葱根、茎、叶不同组织中分离出内生菌,进行形态学观察、分子生物学鉴定和抑菌活性研究。分离出的9株内生细菌均为芽孢杆菌属（Bacillus sp.）菌株,其中的ZT4、ZT5、ZT10和ZT14对7种植物病原真菌表现出较强的拮抗作用,以ZT14的拮抗作用最强,抑菌率均在65%以上。以ZT14为目标菌,研究其生物学性状与抑菌活性,发现该菌株在系统进化树上与解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）聚在同一分支,同源性为100%,由此将其鉴定为解淀粉芽孢杆菌;但ZT14次生代谢产物的抑菌活性较低,推测该菌株可能通过与病原菌竞争生长空间和营养而发挥抑菌作用。     

野生酸枣内生细菌筛选、鉴定及其抑菌活性测定

为广泛开发植物内生菌资源,采用组织分离法从野生酸枣的根、茎、叶和果实中进行生防菌的分离和筛选,通过平板对峙法和发酵液法测定了所得菌株对8种植物病原菌的活性,并利用生物学和分子学方法对所得菌株进行了鉴定。结果显示,从野生酸枣的根、茎、叶和果实中共分离得到76株内生细菌;通过对所有菌株进行初筛和复筛,最终得到8株拮抗作用较强的菌株,菌株SZG-23、SZG-1、SZY-13和SZS-3对梨黑斑病菌Alternaria kikuchiana和黄瓜枯萎病菌Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum的抑制作用较强,抑制率均分别高于82.5%和71.1%,其中菌株SZG-23的抑制率最高,达90.3%和72.4%。菌株SZG-23发酵液对8种植物病原菌生长均有一定的抑制作用,其中对梨黑斑病菌和番茄灰霉病菌Bortytis cinerea的抑制作用最好,抑制率分别达92.2%和90.5%。菌株SZG-23的抗利福平突变菌株能在酸枣幼苗中定殖和移动。结合形态观察、生理生化特征及16S r DNA同源性分析将菌株SZG-23鉴定为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens,16S r DNA序列在Gen Bank中登录号为KF483660。     

1株枸骨内生真菌菌株的分类鉴定及其代谢产物的生防作用研究

 从浙江省天目山采集的枸骨中分离筛选到1株内生真菌菌株(编号为No.2),经形态特征、培养特性等方面研究,初步判定该菌株为木霉属真菌哈茨木霉(Trichoderma harzianum)。该菌通过液体发酵能产生抗真菌活性的次级代谢产物Trichodermin,抑菌活性结果表明,Trichodermin对9种植物病原真菌菌丝生长和2种植物病原真菌孢子萌发均有不同程度的抑制作用。进一步研究发现,Trichodermin具有很高的热稳定性,在100℃以下抑菌活性趋于稳定。活体测定结果表明,Trichodermin对番茄灰霉病有较好的预防保护作用和治疗作用,在150 mg/L的剂量下对番茄灰霉病的保护效果为98.2%,治疗效果为97.4%。     

2株海洋真菌的鉴定及其代谢产物的抑菌活性

以11种植物病原真菌为供试菌种,对2株海洋真菌及其代谢产物的水溶性提取物进行抑菌试验。结果表明,菌株1002F2水溶性提取物对高粱炭疽菌Colletotrichum graminicola和番茄早疫菌Alternaria solani的抑制活性较高,EC50值分别为1.34g/L和0.94g/L;菌株1009F1水溶性提取物对瓜果腐霉菌Pythium aphanidermatum和番茄早疫菌的抑制活性较高,EC50值分别为0.63g/L和0.65g/L。形态学鉴定及ITS rDNA序列的同源分析结果表明,菌株1002F2为曲霉属Aspergillussp.真菌,菌株1009F1可能为Whalleya microplaca。     

柠檬桉内生真菌的分离及其提取物的抗细菌活性

采用组织块分离法分离柠檬桉中的内生真菌,通过菌落观察和分子生物学相结合的方法对分离到的内生真菌进行鉴定;进一步采用薄层层析-生物自显影法测定了柠檬桉内生真菌次生代谢产物的抗细菌活性。从柠檬桉中共分离鉴定得到10株内生真菌,主要分布于附球菌属Epicoccum、镰刀菌属Fusarium、炭疽菌属Colletotrichum、Rhytidhysteron、半壳霉属Leptostroma、Campylocarpon、Neofusicoccum、白腐菌属Phlebia和Dinemasporium等9个属中。抗细菌活性的测定结果表明,内生真菌Ecf-4(Rhytidhysteron sp.,MK211261)和Ecf-1(Epicoccum sp.,MK211258)表现出最强的抑菌活性,两菌对桉树青枯病菌的抑菌斑最大直径均大于10 mm;依据其R_f值的范围和抑菌斑的最大直径,内生真菌Ecf-4的抗菌活性高于Ecf-1,表现出更强的抗细菌活性,可作为候选菌株,进一步分离和鉴定其中的活性成分。     

枸骨内生真菌抗菌代谢产物的鉴定及活性研究

对一株枸骨内生真菌哈茨木霉Trichoderma harzianum抗菌活性成分的分离、鉴定及其抗菌生物活性进行了研究。该真菌发酵液经乙酸乙酯萃取、正相硅胶和ODS-反相色谱分离纯化得到一单端孢霉烯化合物,经红外、质谱和核磁分析,鉴定为:4β-乙酰基-12,13-环氧-9-单端孢霉烯(trichodermin),这是首次从哈茨木霉菌代谢产物中分离出该化合物。Trichodermin对蕃茄早疫病和黄瓜立枯病病原菌的离体抑制活性EC50值分别为3.35和3.59 mg/L;活体测定结果表明,在 100 mg/L的剂量下对两种病的保护效果分别为97.8% 和98.1%,治疗效果为96.7%和97.3%。     

昆虫病原线虫共生菌YL001细胞内代谢产物抑菌作用研究初报

以生物活性跟踪法测定了菌株代号为YL001的昆虫病原线虫共生菌Xenorhabdus nematophilus细胞内代谢产物的不同溶剂提取物及其不同馏分的抑菌活性。结果表明,YL001细胞内代谢产物的乙醇提取物和甲醇提取物的抑菌活性均高于石油醚提取物、乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物,前两种提取物对番茄灰霉病菌Botrytis cinerea和辣椒疫霉病菌Phytophthora capsici的72 h菌丝生长抑制作用最强,在0.4 mol/mL浓度时抑制率均达100％。乙醇提取物经硅胶柱层析分离,洗出液合并后收集得到8个馏分。测定了各馏分对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制作用,结果表明:馏分F6的抑菌活性最高,在0.5 mol/mL浓度时,96 h的菌丝生长抑制率可达96.09%;提取物的活性段主要集中在馏分F6、F7和F8。活体组织法测定结果表明,其乙醇提取物在10 mg/mL的剂量下对番茄灰霉病的保护效果为64.81%,治疗效果为62.03%。     

紫茎泽兰挥发性成分及抑菌活性研究

采用索氏提取器及水蒸气蒸馏两种方法对采于不同时间、不同产地的紫茎泽兰Eupatorium adenophorum Spreng挥发性成分进行了提取,比较了两种方法的得油率、化学组成及其相对含量;采用GC-MS联用技术对其中的挥发性成分进行了分析。结果表明:同一种植物挥发性成分的组成及相对含量因提取方法不同而具有明显的差异,如贵州紫茎泽兰叶中的α-红没药醇用索式提取器提取和水蒸气蒸馏提取的相对含量分别为1.99%和7.55%;不同采集时间、不同产地及不同植物器官的化学组份及相对含量也具有明显差异,如姜黄烯(gurcumene)在不同紫茎泽兰叶或种子中的相对含量在0.41%~5.23%之间。初步的抑菌试验表明:紫茎泽兰挥发油提取液在浓度为3 000 mg/kg时对4种供试真菌的抑制率均大于60％,其中对番茄灰霉菌抑制作用最强,其EC50值为580.5 mg/kg。     

南方红豆杉内生真菌的抗菌活性

从南方红豆杉中分离到549株内生真菌,以终极腐霉Pythiumultimum、立枯丝核菌Rhizocto-niasolani为靶标菌进行抗菌活性的筛选。结果表明,对终极腐霉、立枯丝核菌的半抑制稀释倍数(ID50)在10以上的活性菌株分别为20株(占总菌株的3.6%)和15株(占总菌株的2.8%)。其中矮棒曲霉Aspergillusclavatonanicus菌株F0028对这两种病原菌的活性最高(对终极腐霉、立枯丝核菌的ID50分别为278±15.0、108±18.6)。进一步研究表明,F0028发酵液在pH值为1.0~7.0之间均有较强的抑菌活性;经高温高压处理后抑菌活性仍达到了对照的(65±3.8)%。发酵液经高效液相色谱纯化得到5种化合物,活性测定表明,5种化合物对终极腐霉、立枯丝核菌均有不同程度的抑制作用,半抑制浓度(EC50)在7.0~45μg/mL之间。     

An Endophytic Actinomycete, Streptomyces sp. AOK-30, Isolated from Mountain Laurel and Its Antifungal Activity

To survey endophytic actinomycetes as potential biocontrol agents against fungal diseases of mountain laurel, young plants of mountain laurel (Kalmia latifolia L.) were used as an isolation source. From a total of 73 actinomycetes isolates obtained from leaves, stems and roots of test plants, Streptomyces sp. AOK-30 was selected, because i) it had a broad and intense antimicrobial spectrum against various yeasts and fungal pathogens of Ericaceae, ii) it grew on the multiplication and rooting media for tissue culture for this plant, and iii) the tissue-cultured seedlings that had been treated with this isolate became resistant to Pestalotia disease without any adverse growth effects such as malformation, dwarfing, discolorization and defoliation. This isolate was identified as Streptomyces sp., based on cultural, physiological and morphological characteristics. The present results indicate that isolate AOK-30 is a potential biocontrol agent against diseases of mountain laurel. Received 10 September 2002/ Accepted in revised form 22 November 2002     

内生菌螺旋毛壳抗生素和水解酶的协同抗真菌作用

 生防因子螺旋毛壳(Chaetomium spirale) ND35生长于含立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)菌丝细胞壁制备物的SM培养基中,从培养滤液提取的粗酶液强烈抑制Valsa sordida、Valsa mali、Glomerella cingulata和Curvulavia lunata病原真菌的菌丝生长和孢子萌发。经DNS法检测,粗酶液同时具有β-1,3-葡聚糖酶(包括内切和外切酶)和几丁质酶活性,分别为0.19 U.mg-1和0.09 U.mg-1。生长于3%玉米粉浸渍液的螺旋毛壳ND35的培养滤液也能抑制上述病原菌的菌丝生长和孢子萌发。离体条件下检测了ND35产生的一纯化的具有分子量为73 kD的内切β-1,3-葡聚糖酶(GLUC73)和一纯化的抗生素对苹果炭疽病菌的分生孢子萌发和芽管延长的抑制效果。当内切β-1,3-葡聚糖酶使用浓度为180 μg·mL^-1时,抑制了测试真菌的孢子萌发,造成细胞壁的改变,导致了菌丝顶端的破裂;抗生素的有效抑菌中浓度ED₅₀为1.75 μg·mL^-1。单独应用时,1.0 μg·mL^-1的抗生素或40 μg·mL^-1的内切β-1,3-葡聚糖酶没有或仅有很低的抑菌效果;两者组合导致孢子萌发约78%受抑制。甚至10 μg·mL^-1的内切β-1,3-葡聚糖酶也使1.5 μg·mL^-1抗生素的抑菌作用从低于25%增加到超过50%的抑菌效果。此外,80 μg·mL^-1的内切β-1,3-葡聚糖酶使1.0 μg·mL^-1抗生素的抑菌活性从0%提高到90%。抗生素和β-1,3-葡聚糖酶的协同抗菌活性可能在内生菌螺旋毛壳的植病生防中起重要作用。     

Studies on Endophytic Actinomycetes ( I ) <Emphasis Type="Italic">Streptomyces </Emphasis>sp. Isolated from Rhododendron and Its Antifungal Activity

To survey endophytic actinomycetes as potential biocontrol agents against fungal diseases of rhododendron, young plants of rhododendron were surface-sterilized for use as an isolation source. Nine, six and two isolates, with distinguishing characteristics based on the macroscopic appearance of colonies, were obtained from roots, stems and leaves, respectively, suggesting that various species of actinomycetes grow in the respective organs of this plant as symbionts or parasites. On an agar medium, only isolate R-5 commonly formed a clear growth-inhibition zone against two major fungal pathogens of rhododendron, Phytophthora cinnamomi and Pestalotiopsis sydowiana, indicating that this isolate can produce antifungal material(s). Acetone extracts of a liquid culture of R-5 had a broad antimicrobial spectrum against Gram-positive bacteria, yeast and filamentous fungi. Isolate R-5 was identified as a Streptomyces sp. based on morphological, physiological and chemotaxonomical characteristics. The present results indicate that isolate R-5 is a suitable candidate for the biocontrol of diseases of rhododendron. Received 25 March 2000/ Accepted in revised form 18 May 2000     

嗜线虫致病杆菌YL001菌株代谢产物的抑菌活性

从陕西杨凌土样中筛选得到一株昆虫病原线虫,从其体内分离到它的共生菌嗜线虫致病杆菌Xenorhabdusnematophilus,编号为YL001,为明确其代谢产物的抑菌活性,本试验采用抑制菌丝生长速率法、抑制孢子萌发法、组织测定法和盆栽试验法系统测定了其发酵液对植物病原真菌的抑制作用。结果表明,在离体条件下该菌株发酵液对供试的15种植物病原真菌菌丝生长均有一定的抑制作用,对番茄灰霉病菌和辣椒疫霉病菌的抑制作用最强,EC50分别为53.54和90.39mg·L-1;对供试的6种植物病原真菌孢子萌发均有一定的抑制作用,其中对番茄灰霉病菌和烟草赤星病菌孢子萌发有较强的抑制作用,EC50仅分别为16.97和21.87mg·L-1;组织法测定中,发酵液稀释10倍后,对番茄灰霉病的保护效果为74.98%,治疗效果为63.50%;对盆栽番茄灰霉病的保护效果为65.11%,治疗效果为54.64%。显微观察表明,YL001菌株的发酵液可使菌丝生长形态异常、变形萎缩,甚至断裂。     

油茶内生拮抗细菌的筛选、鉴定及防效

为筛选出对油茶炭疽菌有拮抗效果的生防菌株,以油茶健康叶为对象,平板对峙法筛选,利用形态和生理生化特征以及16S rDNA基因和gyrA基因序列对菌株进行鉴定,测定其抑菌活性,并将该菌株与枯草芽胞杆菌Y13复配进行林间防效试验.结果表明,对油茶炭疽病菌拮抗作用效果较强的内生菌株为HBMC-B05;菌落为乳白色,不透明,边...