金龟子绿僵菌发酵代谢产物中苦马豆素的初步研究

金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)经过发酵培养,采用气相色谱法对发酵代谢产物中的苦马豆素(Swainsonine SW)进行了定性和定量分析;同时用正丁醇萃取法对发酵液进行了初步的分离提取及薄层层析法检测。结果表明,金龟子绿僵菌发酵代谢产物中含有苦马豆素,且含量为10.2 131 mg/L;正丁醇萃取法是从发酵液中提取苦马豆素的有效方法。     

金龟子绿僵菌中苦马豆素的分离与鉴定

探求从金龟子绿僵菌中分离苦马豆素的有效方法,提高苦马豆素产量及降低苦马豆素生产成本。采用超声波处理、过滤、离心、索氏抽提、萃取、离子交换色谱、吸附柱色谱及减压升华等方法,从菌丝体中分离苦马豆素,以薄层色谱、气相色谱及熔点测定法对分离产物进行鉴定分析,气相色谱法测定金龟子绿僵菌干燥菌丝体中苦马豆素的含量。结果分离到白色针状结晶3.15 mg,经薄层色谱、熔点测定及气相色谱鉴定分析,确定分离到的结晶为苦马豆素,提取率为21μg/g。气相色谱法测定金龟子绿僵菌干燥菌丝体中苦马豆素的含量为2.26 mg/g。     

液固两相法培养金龟子绿僵菌的研究

通过对绿僵菌液固两相发酵技术的研究,优化控制发酵过程,筛选出玉米粉(2份)+麦麸(2份)+谷壳(2份)为固体发酵培养基的优化配方,液体种子发酵周期72 h,初始接种量控制在25%为宜。保持25-28℃的培养温度和83%-94%的相对环境湿度,同时选择合适的覆盖物(可降低杂菌的污染)。固态发酵周期11 d,菌粉干燥温度控制在35℃,时间24 h,可缩短生产周期。     

金龟子绿僵菌致病的分子机理研究进展

金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)是一类重要的昆虫病原真菌,在害虫生物防治中起着重要作用.与化学农药相比,昆虫病原真菌开发的真菌杀虫剂作用时间持久、无环境污染、对非靶标生物安全,但存在致死时间长,杀虫效率低,防效不稳定等缺点,严重阻碍了真菌杀虫剂的广泛应用,为解决这一问题,从分子水平揭示昆虫病原真菌的致病机理尤为重要.从分子水平阐述了金龟子绿僵菌对寄主的识别与粘附、绿僵菌侵染寄主过程中附着胞的形成、绿僵菌对寄主体壁的穿透机制和绿僵菌进入寄主血淋巴后的适应机制.     

金龟子绿僵菌室内侵染刚竹毒蛾试验

3个金龟子绿僵菌菌株 ( M1、M2 、M3 )经室内侵染试验证明 ,皆能侵染 2～ 3龄刚竹毒蛾幼虫 ,其中以 M3 菌株的致病力较强 ,M1和 M2 次之 .M3 的 L C50 =7.5 5× 1 0 6孢子· L-1,L T50 =5 .88～ 1 0 .5 0 d(在 1 .0× 1 0 11～ 1 .0× 1 0 7孢子· L-1浓度下 ) .M1和 M2 的 LC50 分别为 3.1 2× 1 0 7孢子·L-1和 7.0 1× 1 0 7孢子· L-1,LT50 分别为 6.5 0～ 1 1 .65 d和 7.66～ 1 1 .5 3d.不同温度、湿度下的分生孢子萌发力试验表明 ,供试的 3个菌株具有较强的耐高温和耐旱特性 .试验结果显示绿僵菌在防治刚竹毒蛾上具有较大的开发利用价值     

金龟子绿僵菌的液固双相发酵研究

金龟子绿僵菌是重要的害虫致病真菌,采用液固双相发酵方法对MA4-37菌株进行发酵,研究液体培养基、固体培养基及其厚度、浅盘固体发酵、袋装固体发酵对金龟子绿僵菌生长及产孢量的影响,优化控制发酵过程。结果表明,液体发酵较适合的培养基为发酵液B(大豆1%、蔗糖1%、NaCl0.5%、MnSO40.5%,用KH2PO4-K2HPO4缓冲液调节pH值为6.0～7.0),采用该培养基时液生分生孢子产量和菌丝生长量均最高,分别达到4.3×109个/L、5.99g/L。固体发酵时,浅盘发酵方法优于袋装发酵,其中采用配方F的固体培养基(碎米600g、大米300g、H2O 50%、KH2PO4-K2HPO4缓冲液0.05%、蔗糖0.5%),厚度在1.3cm时,浅盘培养7d的产粉量可达16.1mg/g。     

金龟子绿僵菌CQMa421防治稻飞虱田间药效试验

用80亿孢子/mL金龟子绿僵菌CQMa421可分散油悬浮剂1 050、1 200、1 350 mL/hm~2开展稻飞虱防效试验,于药前和药后3、7、14 d进行田间调查。结果表明,随着用药量增加,校正防效显著提高,80亿孢子/mL金龟子绿僵菌CQMa421可分散油悬浮剂1 350 mL/hm~2防治稻飞虱效果良好,持效期长,药后14 d平均防效达85%以上,但显著低于对照药剂25%吡蚜酮悬浮剂450 mL/hm~2的校正防效(91.9%);80亿孢子/m L金龟子绿僵菌CQMa421可分散油悬浮剂对水稻生长安全,对蜘蛛、绒茧蜂等田间优势天敌种群数量基本没有影响。     

金龟子绿僵菌对小菜蛾的室内毒力测定

[目的]采用浸叶法和浸虫法测定金龟子绿僵菌在不同浓度下对小菜蛾的室内毒力。[方法]以小菜蛾3龄幼虫为供试虫源,用浸叶法和浸虫法研究金龟子绿僵菌在2种侵染途径下对小菜蛾的室内毒力,并对感染反应的时间与剂量效应作综合分析。[结果]在2种方法处理下。10^5～10^9个孢子／ml浓度的金龟子绿僵菌孢悬液对小菜蛾均有杀伤作用,同一浓度下浸虫法优于浸叶法。在浸叶法中,金龟子绿僵菌对小菜蛾第3天的LD。对数剂量为15．48,第8天的加。对数剂量为11．93;在浸虫法中,金龟子绿僵菌对小菜蛾第3天的凹。对数剂量为9．25,第8天的蛾．对数剂量为8．73。10^9个孢子／ml金龟子绿僵菌处理的小菜蛾在第8天校正死亡率达到92．86％,其￡％为1．95d。[结论]该研究为田间应用金龟子绿僵菌防治小菜蛾提供理论依据。     

绿僵菌毒素的提取

用金龟子绿僵菌的液物培养体,提取绿僵菌素。每升培养液得绿僵菌素0.7mg。用绿僵菌素注射青杨天牛幼虫,每克虫体用量10.6μg,3d内死亡率达100％。     

金龟子绿僵菌防治蝗虫试验

一、试验地点试验设在托普铁热克乡阿合加尔村的小麦田及农牧交错地带,该地区是我县近几年蝗虫多发区。草场土质为壤土,植被覆盖率为34.33%,适合草原蝗虫繁殖。     

镰形棘豆化学成分预试及生物碱成分薄层色谱分析

采用植物化学成分系统预试法、生物碱系统提取法和薄层色谱技术对镰形棘豆地上部分全草的化学成分,特别是生物碱成分进行了薄层色谱分析。结果表明,镰形棘豆地上部分全草中含有生物碱、有机酸、皂甙、黄酮、香豆素、萜类和挥发油等多种化学成分,其中以生物碱沉淀反应最明显;1.50 kg镰形棘豆经95%乙醇回流提取得总浸膏198.10 g,经酸化、碱化所得碱水液依次用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分段萃取,得生物碱氯仿萃取部分0.72 g,乙酸乙酯萃取部分0.97 g,正丁醇萃取部分26.70 g,分别占总生物碱的2.54%、3.42%、94.04%,说明镰形棘豆生物碱主要集中在正丁醇萃取部分以大极性生物碱为主;各部分生物碱经薄层层析分析,发现镰形棘豆中生物碱的种类至少有24种,经与标准样品对照,证明镰形棘豆所含的生物碱主要以苦马豆素及其类似物等吲哚里西啶生物碱为主,同时也含有少量的黄华碱和臭豆碱等喹诺里西啶生物碱。     

栗疫菌(Endothia parasitica)致病毒素的初步研究

栗疫菌(Endothia parasitica)引起的板栗疫病是森林植物检疫对象之一。病原菌在侵染植物的过程中产生的毒素一向被认为是致病的重要因子。本实验以PD液体培养基为基础,通过震荡和静止两种培养方式,采用浸渍法和针刺法对板栗叶片和小枝进行了生物测定。研究显示板栗小枝和叶片可产生典型的症状,证明栗疫菌能产生具生物活性的毒性物质(毒素),PD培养液适于菌株的生长和毒素的产生。震荡培养比静止条件更利于产毒,浸渍法处理后第二天板栗小枝和叶片都表现典型的病斑和萎蔫症状,针刺法处理后第一天便表现出典型症状,说明针刺法比浸渍法效果更明显、叶片比小枝更敏感。     

肉果秤锤树化学成分的预试及生物碱含量的测定

利用植物中的有机成分与专属试剂发生显色反应的原理,采用试管和滤纸片预试法对肉果秤锤树技叶中一些常见种类的化学成分进行预试.结果表明,秤锤树枝叶中可能含有生物碱、有机酸类、酚类、还原糖、多糖、甙类、甾体及三萜类、强心甙、蒽醌、挥发油等有机成分.并采用索氏提取法,以咖啡因为对照对肉果秤锤树枝和叶中总生物碱进行了含量测定.     

豆类丝核菌发酵代谢产物中苦马豆素的测定

利用气相色谱法,对实验室分离保存的6株豆类丝核菌发酵代谢产物中的苦马豆素(swainsonine,SW)进行了定性、定量分析。结果表明,豆类丝核菌发酵代谢产物中含有大量SW,其中02-6B与02-3A2株菌代谢产物中苦马豆素含量分别达到1093.17与1199.64mg/L,说明这2株菌可用于SW生物合成的研究,并有利于降低SW生物合成的成本。     

天然生物碱的研究与应用

生物碱是一类具有生理活性的物质,是许多药用植物的有效成分之一,具有广阔的应用前景。生物碱的生物活性及其在医药和农药两大方面的应用已引起人们的广泛关注。综述了天然生物碱的生物活性、提取、精制、鉴定的方法,旨在为天然生物碱的研究提供参考。     

蜂产品中溶菌酶含量的简易测定方法

利用透析,浓缩提取蜂产品中的溶菌酶,采用紫外可见分光光度法,在285nm处对溶菌酶含量进行检测。结果表明,几种样品的溶菌酶含量为34.52~88.67μg/g,加标回收率95.53%~102.73%,RSD1.97%~3.65%,讨论了放置时间对蜂产品中溶菌酶的含量影响甚微。该方法设备简单,成本低,方便,易操作。     

紫外分光光度法检测肉制品中盐酸克伦特罗残留量

目的建立一种快速检测肉制品中盐酸克伦特罗残留量的方法。方法 -环糊精与盐酸克伦特罗结合后用紫外分光光度法测定吸光度值并建立标准曲线,检测样品中盐酸克伦特罗含量。结果吸光度值强度与盐酸克伦特罗浓度在358 nm波长处呈线性关系。当包合体系p H 7.0、温度30℃、静置30 min时,检出限为0.015 mg/L,线性范围为0.05~0.15 mg/L,线性相关系数r=0.9995,精密度为2.20%~6.04%,回收率为95.0%~106.0%。结论紫外分光光度法是检测肉制品中盐酸克伦特罗残留量的简单、快速、可靠方法。     

草甘膦在土壤中的残留动态研究

利用分光光度法测定了晴天和人工模拟降雨2种情况下草甘膦在土壤中的残留量,分析了草甘膦在土壤中的残留动态。结果表明,草甘膦在施入土壤后可迅速降解,施药后6 d基本降解完毕。人工模拟降雨对草甘膦在土壤中的降解有明显影响,雨天环境下草甘膦降解得更快。     

蜂产品中溶菌酶含量的简易测定方法

利用透析,浓缩提取蜂产品中的溶菌酶,采用紫外可见分光光度法,在285nm处对溶菌酶含量进行检测。结果表明,几种样品的溶菌酶含量为34.52～88.67μg/g,加标回收率95.53%～102.73%,RSD1.97%～3.65%,讨论了放置时间对蜂产品中溶菌酶的含量影响甚微。该方法设备简单,成本低,方便,易操作。     

酿酒酵母的紫外诱变选育及发酵条件研究

以果园土为菌种来源,采用平板分离法得到5种酵母菌,对其进行紫外线诱变,筛选出7株酵母菌突变株,通过测定突变株的发酵性能,从中筛选出1株液化酶活力、糖化酶活力、蛋白酶活力及发酵力均较好的酵母突变株N4-4,其发酵液化酶活力、糖化酶活力、蛋白酶活力和发酵力比对照菌株分别提高了6.7%、7.5%、8.1%和39.0%,通过单因素和正交试验确定该突变株的最佳发酵条件。结果表明,在30℃、120 r/min的培养条件下,突变株最佳发酵条件为3%葡萄糖、3%(NH4)2SO4、p H 5.0、3%接种量(V∶V)。