双孢蘑菇2796菌丝生物学特性研究

研究了双孢菇2796菌丝的生物学特性。结果表明，菌丝生长的最适碳源为麦芽糖，最适氮源为(NH4)2SO4；最适温度为20--25℃；培养基最适含水量为60--65％；最适pH为6—7；菌丝在黑暗条件下生长良好，光照抑制菌丝生长；适宜的CO2浓度可刺激菌丝的生长。     

双孢蘑菇新菌株W192与As2796比较试验

双孢蘑菇贴生型W192、气生型W192菌株和AS2796菌株栽培对比试验,结果表明,不同菌株的菌丝生长、子实体发育、出菇与转潮时间及生物学效率差异较为明显。贴生型W192菌株转潮快,抗逆性强,产量最高、质量较好。     

应用原生质体技术培育双孢蘑菇杂交新菌株

应用原生质体技术从双孢蘑菇气生型与匍匐型二类品种中制备出原一质体同核本并进行杂交配对。结果表明,从１６个组合中得到６个杂交菌株,其中２个不能结实,４个结实正常,且主要农艺性状明显优于双亲。     

双孢蘑菇原生质体杂交系统的建立

双孢蘑菇的常规杂交育种由于次级同宗结合而变得困难。本文研究了蘑菇原生质体制备与再生的最佳条件。从异核菌丝出发,制备与再生原生质体。根据自然性状,推定同核化再生株,栽培验证同核株,并根据配对行为确证同核株并分离异核化杂交种。本文认为原生质体杂交系统比常规杂交育种优越。     

双孢蘑菇的单孢分离和单孢杂交研究

本文采用一种较为简单易行、高效、选择性强的单孢分离法，分离获得双孢蘑菇的单孢菌林１５８株，并对这些单孢菌株的培养性状、菌丝间融合和自发营养缺陷型等进行研究。结果表明：来自同一子实体的许多单孢子在ＰＤＡ培养基上其菌丝体形态、生长速度均有显著差异：单孢菌株之间的融合率为１８．１％；单孢菌株中存在自发营养缺陷型，自然发生率为１０．１５％；活蘑菇菌丝体及高浓度孢子悬液对于单孢子萌发均具明显的促进作用。     

双孢蘑菇原生质体同核体的验证

同核体(homokaryon)是进行双孢蘑菇遗传分析和菌种选育的基本材料。我们曾经报道过应用原生质体技术可以在实验室条件下较方便地用菌丝体分离出大量的原生质体同核体(protoplasted homokaryon),这无疑为加快双孢蘑菇遗传育种研究的进程创造了条件。但是由于双孢蘑菇的菌丝一般是多核的,而且又没有锁状联合标记,因此对所获得的原生质体同核体的真实性缺乏一种简单可靠的检测手段,而只能根据它们在再生时间上的先后顺序以及菌落的形态特征进行推定。鉴此,本研究,旨在寻找到可行的方法对推定的原生质体同核体进行有效的验证,结果报道如下: 1 材料与方法 1.1 供试菌株 双孢蘑菇176菌株,上海市农科院食用菌所提供。P_9、P_(11)、P_(12)、P_(14)、P_(15)、P_(20)、P_(21)、P_(22)为随机挑选出的八个推定的176原生质体同核体。 1.2 培养基及配方 ①PDM:马铃薯200g,葡萄糖     

黄色金针菇菌株提纯复壮技术研究

以黄色金针菇苏金6号为样本,通过在含有不同浓度结晶紫的PDA培养基培养后,采用菌丝尖端分离和原生质体再生相结合的方法进行提纯复壮。试验结果表明,含有20 mg/L结晶紫的PDA培养基,可以显著提高苏金6号的生活力和原生质体再生筛选效率。提纯复壮后筛选出的菌株,生长速度和木质素、纤维素酶活均有提高,锁状联合多且规则,产量增加,其中以再生菌株13B7产量最高,增产12.7%。另外,在生长速度相近的情况下,产量与木质素酶活、纤维素酶活成正相关。     

培养基质对双孢蘑菇As2796菌落形态影响

配制天然、有机、合成等43种不同配方的培养基,接种双孢蘑菇品种As2796菌丝块,观察菌丝在培养皿中生长的菌落形态变化并测定菌丝的生长速度,以探讨培养基质对双孢蘑菇品种As2796菌落形态的影响。试验结果：双孢蘑菇As2796菌落形态及菌丝生长速度明显受培养基质影响,菌落形态表现为气生、半气生、贴生等类型;不同配方中葡萄糖的添加量对菌丝生长产生不同的影响。     

双孢蘑菇易褐变菌株的多酚氧化酶特征

采用凝胶电泳等生化技术探讨了蘑菇易褐变菌株的酚酶特征。发现易褐变菌株具有特异的同工酶表型,子实体阶段表达的酚酶位点多,且酶活性高;其整个生活史的胞内酚酶活性曲线变化与优质菌株不同;所表达的酚酶对亚硫酸盐类酚酶抑制剂的敏感性低;所表达的酚酶较耐热,在加热的初始阶段(35～40℃)就能迅速催化褐变反应;所含的潜伏型酚酶含量大,且随着鲜菇贮藏期延长而大量活化,继续催化褐变。本文还就如何防止褐变进行了探讨。     

双孢蘑菇不同菌株的RAPD扩增研究

用18个随机引物对3个双孢蘑菇生产菌株进行RAPD扩增,通过计算供试菌株遗传相似系数及聚类分析,构建供试双孢蘑菇菌株的系统树状图谱。结果表明,所用18个引物中有8个能对双孢蘑菇菌株扩增出清晰、稳定的DNA谱带。供试菌株2796与F56的相似程度较高,相似系数为0.8571,菌株2796、F56和菌株176的平均相似程度较低,平均相似系数只有0.4728。     

双孢蘑菇不同菌株生物学特性的研究

比较研究了13株双孢蘑菇菌株的菌丝生长势、出菇性状、菌丝拮抗性、酯酶同工酶酶谱等。结果表明,13个菌株中表现出一定的遗传差异性,部分菌株为同物异名。Ag-004菌株菌丝生长势最强,日平均生长速度0.54 cm·d~(-1),23d长满试管;出菇试验表明棕色蘑菇品种表现出比白色蘑菇品种产量高、较耐低温和抗逆性强的特性。大多数菌株之间表现出一定的拮抗反应,少部分菌株间拮抗现象不明显。酯酶同工酶酶谱出现3个区域,Rf=0.1758、0.2424、0.7697为所有菌株共有,可能为双孢蘑菇酯酶同工酶的特征谱带,Rf=0.8060为白色蘑菇品种的酯酶同工酶的特征条带,而Rf=0.7151为2个棕色蘑菇菌株所有,在所有的白色品种中几乎没有,Rf=0.7151可能为棕色蘑菇菌株的特征谱带。     

姬松茸与双孢蘑菇不同菌株的RAPD扩增研究

以4个姬松茸菌株和2个双孢蘑菇菌株为材料，用20个随机引物对它们进行RAPD扩增，通过对供试菌株遗传相似系数的估算和系统聚类分析，构建姬松茸和双孢蘑菇遗传相关树状聚类图谱，结果表明，进行RAPD扩增的20个随机引物中，有12个能产生三种带型，当遗传相似系数升至0.8713时，这6个菌株被分为3类，第一类为菌株18和26，第二类为菌株13和12，第三类为菌株33和45。     

中国主栽双孢蘑菇菌株的DNA多态性

本文以中国双孢蘑菇不同主栽产区的9个具代表性的双孢蘑菇菌株为材料,用20个随机引物对其进行RAPD分析。结果表明,20个随机引物中,有15个随机引物的扩增产物DNA片段表现出明显的多态性,其中每个引物对不同菌株扩增出的DNA片段数目各不相同,而且不同引物扩增出的DNA带谱也不同,差异较大。这15个引物对供试菌株总共扩增出168条DNA片段,其中最大的片段可达6.77kb,最小的DNA片段仪有0.31kb。同时,比较了供试菌株两两间的遗传相似性,发现它们之间的变化不大,其相似系数从0.6891到1.0000,而平均相似系数仅为0.8500,表明供试菌株之间的亲缘关系较近,遗传变异不丰富。另外,采用系统聚类法中的类平均法,对供试菌株相似系数两两间进行聚类分析并生成树状图谱,直观准确地揭示了它们之间的差异。当相似系数为77％时,所有供试菌株都被聚为一大类,说明我国主栽双孢蘑菇菌株的遗传基础较狭窄,可能来源于同一品系,这为进一步开展双孢蘑菇菌种的遗传改良提供了理论依据。     

双孢蘑菇同核原生质体育种技术研究：Ⅰ.同核原生质体的分离与鉴定

通过对溶壁酶组成及浓度,渗透压稳定剂、菌丝培养方法等研究,建立了有效的双孢蘑菇原生质体制备与再生系统。采用1.5％Lywallzyme、0.6M KCl为渗透压稳定剂,25℃酶解4小时,原生质体的产量可达到10~7个/ml;纯化后的原生质体在0.6M蔗糖为渗透压稳定剂的PDMA培养基中,25℃恒温培养5～7天,再生率达1%以上,根据原生质体再生菌落出现时间的先后顺序,并以菌落形态特征、菌丝生长速度。羧甲基纤维素酶(Cx酶)活性及子实体形成能力上的差异为鉴定同核体的主要标记,从两种形态类型,不同来源的12个双孢蘑菇菌株中均分离到同核原生质体,同核率为2％～15%,平均为11.75％。     

国内外主栽双孢菇菌株的栽培对比试验

以从美国、荷兰引进的8个优良双孢菇菌株(L901、XXX、2200、F5113、H901、F3F、HA15、HRLM)和国内主栽菌株(2796)为试材,研究了9个菌株的生物学性状、工厂化栽培性状、商品性状和子实体营养成分等指标,以筛选出优质高产的双孢菇菌株。结果表明:菌株L901产量最高,为21.27kg·m~(-2),其最适生长温度为25℃,子实体大小和营养成分等各方面性状优良,可作为鲜食品种进行推广栽培。菌株HRLM子实体呈棕色,体积最大,如推广栽培可改变我国双孢菇产品均为白色的现状,具有较高的商品价值,但产量较低,需进一步育种提高产量。菌株F5113蛋白质、多糖、氨基酸等营养成分含量较高,粗纤维含量少,且产量较高,适于做双孢菇深加工品种。     

双孢蘑菇三种类型菌株的RAPD扩增研究

用７２个随机引物,对三种类型双孢蘑菇菌株２７９６（杂交型）,８２１１（优质型）,０１（高产型）等进行了ＲＡＰＤ扩增,发现２６个引物均产生三种不同的带型。用该２６个引物进一步作三种类型９株双孢蘑菇白色菌株的ＲＡＰＤ扩增,发现引物Ｕ１６,Ｕ２０,Ｂ１,Ｈ４,Ｈ５,Ｍ７能很好地区分三类菌株,尤以Ｕ２０和Ｈ５为佳,其产生的三种带型稳定整齐,差异带明显,为双孢蘑菇菌株特性的早期预测提供了ＤＮＡ水平的标记。     

双孢蘑菇“桂菌As108”菌株的生物学特性及栽培技术

根据广西局部的气候特点,采用单孢子杂交的方法选育适合广西的蘑菇新菌株"桂菌As108"。本文对该菌株的菌丝形态特征、子实体特征、基本营养特征、生长发育特征等生物学特性进行了描述,并从原料配方、原料发酵、铺料播种、发菌管理、覆土、出菇管理等方面介绍其栽培技术,为广大种植者提供栽培依据,促进广西双孢蘑菇产业的发展。