绵羊FecB基因非探针法HRM分型技术条件优化研究

本文通过对影响高分辨率熔解曲线(HRM)的因素分析,旨在建立适合绵羊FecB基因分型的最优反应体系。试验分别对扩增子长度、引物量、Mg2+浓度和模板量等因素进行研究。结果表明,不同因素都会对HRM分析结果有影响,绵羊FecB基因非探针法HRM分型的最优反应条件为:引物添加量0.6μL,Mg2+浓度2.4 mmol/L³.2 mmol/L,模板量50 ng,以及扩增产物为115 bp。     

SNP分子标记的研究及应用

SNP作为一种新的遗传标记，越来越受到世人的关注。本文主要介绍了SNP的概念、特点、检测分析技术、存在的问题及应用前景。     

形态与分子标记用于羊草种质鉴定与遗传评估的研究

利用分子标记与形态标记对随机抽取的17份禾草种质进行了种质评估的比较研究，结果表明，2种方法均在17份供试材料中鉴别出9份羊草种质，占供试样品的53％，说明分子标记方法用于羊草种质资源鉴定是可行的，并具有快速，准确，不受环境条件限制等优点，在40个10Mer的随机引物当中新筛选出21个有效引物，以其对9份羊草材料进行RAPD分析，共扩增出115条带，DNA片段大小在0．2kb-5.5kb之间，其中95条带表现出多态性，多态比率82．61％，平均每个引物扩增的多态性带为4．5条，研究表明，S1213－900，S1213－1700，S1215－S500，S1396－1370，S1384－900，S1202－5180，S1220－2200，S1381－1580，S1211－2800，S1211－800为羊草种质所具有的10个特异性标记，据此可将羊草种质与披肩草，赖草加以区分，同时在羊草种内亦发现13条可区分供试羊草种质的特有标记，形态标记与分子标记相关性分析结果显示：羊草种质的小穗数，种子千粒重，叶色，有性繁殖量和结实率5个形态学指标与遗传多样性指标－特有带百分率及遗传距离之间，存在一定相关性，可以用于羊草种质的遗传评估，笔者对羊草种质资源在收集和评价过程中存在的问题进行了探讨。     

西藏4个绵羊品种SNP基因分型及群体结构分析

藏系绵羊分布范围广泛,品种资源丰富,目前主要分为三大类群,但藏系绵羊群体结构不清。为分析藏系绵羊SNP位点及群体结构,实验利用Illumina Ovine SNP 600K商业化芯片对西藏阿旺绵羊、岗巴绵羊、多玛绵羊和霍尔巴绵羊等150只藏系绵羊进行了SNP基因分型,并通过PCA和NJ-tree等方法分析了藏系绵羊群体结构。SNP质控结果表明,共有147个个体符合质控条件,共获得456 418个SNP位点。群体结构分析表明,西藏地区的岗巴绵羊、多玛绵羊和霍尔巴绵羊分别聚为一类,而其他地区的藏系绵羊混乱聚集在一起。本实验研究结果为今后西藏当地绵羊遗传资源的鉴定和保护开发利用提供了理论基础和参考依据。     

利用随机扩增多态性DNA指纹技术对猪链球菌进行基因分型

通过优化反应条件和筛选随机引物，应用100条随机引物对分离的20株猪链球菌做随机扩增多态性DNA（RAPD）分型研究。结果表明，有27条引物呈现良好的多态性和稳定性，可产生稳定，复杂的指纹图谱。采用SPSS10.0软件分析了不同菌株之间的遗传距离，绘制出了菌株间的亲缘关系树状图，结果，20株猪链球菌被分为4个聚类群。     

促卵泡生成素受体基因的SNP对牛双胎性状的标记研究

以秦川牛和荷斯坦奶牛的双胎母牛和单胎母牛为实验材料，以牛的FSHR基因的第10个外显子作为标记牛双胎性状的候选基因，用SNP法进行了多态检测。结果发现，在秦川牛的双胎母牛中突变率为60％（6／10），而在单胎母牛中突变率为20％（2／10）；在荷斯坦奶牛中，双胎母牛突变率为31.25％（5／16），单胎母牛突变率为6.67％（1／15）；由此可见双胎牛和单胎牛二者之间FSHR基因的第10个外显子的突变率差异明显。这表明选择FSHR基因的10个外显子有可能作为双胎性状的候选基因。经序列分析发现在FSHR基因的第1506个碱基发生了突变（T→C），但氨基酸没有发生变化。     

鸭Fas基因SNP和生物信息学研究

试验以鸭为研究对象,构建DNA池,对Fas基因第2外显子、第3外显子和跨第6、第7外显子设计引物,PCR结合直接测序技术,筛选与扩增产物存在的SNP位点。结果表明:Fas基因第2外显子中检测到1个SNP位点(T729A),且引起天冬氨酸(GAT)转变为谷氨酸(GAA);mRNA二级结构最小自由能增加了133.76 k J/mol,α螺旋和延伸链含量和所占蛋白质二级结构比例增加0.53%和0.27%,而自由卷曲数量减少了0.80%,且蛋白质三级结构发生明显变化,有可能影响Fas功能,从而对机体代谢产生影响。     

单核苷酸多态(SNP)相关技术研究及其应用

单核苷酸多态（SNP）为同一物种不同个体间染色体上遗传密码单个碱基的变化，是限制性片段长度多态性（RFLP）、微卫星标记（SSR）之后的又一种新的分子标记，通常呈双等位基因多态，在生物学诸多领域具有广阔应用前景。本文从SNP技术的发展历史、研究动态及其特点和应用前景等方面进行综述。     

京海黄鸡卵巢转录组研究:基因结构分析与新基因发掘注释

本试验通过对京海黄鸡卵巢组织进行转录组分析,旨在为完善京海黄鸡部分基因结构和发掘新基因提供参考。选取高、低产京海黄鸡各4只,利用转录组测序(RNA-Seq)技术对其卵巢转录组进行测序,然后对得到的测序数据进行生物信息学分析。测序数据经过质量控制后,8个样品共得到484 992 074条有效数据(Clean Reads),总计61.09 Gb。筛选出1 445 264个京海黄鸡品种内SNP位点,其中位于基因区的SNP位点916 108个,位于基因间区的SNP位点552 168个。8个样品中平均新预测的可变剪接12 883个,并对7 481个基因结构进行了优化。与所选的参考基因组序列对比分析,共发掘4 431个新基因,通过与各数据库进行序列对比,1 809个新基因得到功能注释。本研究通过转录组测序技术检测了京海黄鸡卵巢组织的基因结构,为进一步完善京海黄鸡的基因结构信息及发掘潜在的新基因提供分子水平的依据。     

基于SNP标记的滩羊亲子鉴定研究

旨在筛选可用于滩羊亲子鉴定的部分SNP标记，对羊群的保种和繁衍具有重要意义。本试验以宁夏盐池地区的159只滩羊为研究对象，利用600K基因芯片进行SNP测定，通过主成分分析了解样本的遗传背景，依据系统进化树划分家系，最后进行亲子鉴定研究。结果显示，大多数滩羊之间遗传背景相近，系统进化树将其划分为5大家系；亲子鉴定筛选到了211个高质量SNPs，单亲累积排除概率超过99.99%，具有很高的准确性和可靠性；父权鉴定结果表明，在95%置信水平下，观测鉴定率为79%，80%置信度下，观测鉴定率达到87%。在有结果的子代中，大部分真实亲本在疑似父本中找到，即非系谱记录的父本，说明场内应加强系谱管理，尽量避免错误的发生。     

羊草种子生活力测定技术研究

根据种子生活力的氯化三苯四氮唑(TTC)染色机理,探讨了染色温度、时间、种子材料的处理对羊草(Leymus chinensis)种子胚染色效果的影响,以筛选鉴别种子生活力的最佳反应条件;并对不同基因型的羊草种子生活力进行了对比.结果表明,羊草种子生活力检验可以用如下方法,羊草去稃种子,加入磷酸缓冲液配制成0.5%的TTC溶液,在35℃恒温条件下保持反应2～3 h,观察胚部染色状态,呈红颜色者为具有活力的种子,反之为失活种子.本研究建议在生产实际中应将生活力作为评价羊草种子质量的重要指标.     

丛枝菌根对羊草的综合效应及其对退化羊草草原植被修复的研究展望

羊草(Leymus chinensis Tzvel.)草原是我国北方地区最好的天然草原类型。由于近年来的过度放牧、开垦破坏与干旱等原因,导致羊草草原退化面积逐年扩大,产草量和草群营养价值降低,经济和生态功能日趋削弱,羊草草原的修复需求是紧迫的。然而,由于气候干旱、土壤贫瘠,羊草草原的修复面临诸多难题。丛枝菌根真菌广泛存在于草原生态系统中,能与宿主植物形成共生体,对植物具有多种有益效应。本文从养分吸收、生长发育、抗逆性、根际土壤环境及种间关系这些方面介绍丛枝菌根真菌对羊草的综合效应,并对丛枝菌根修复退化羊草草原植被提出展望,旨在为开展退化羊草草原的菌根修复研究提供参考。     

羊草生物学研究进展

羊草的生物学研究对改善我国北方草原生态环境和发展草原畜牧业均具有重大意义.结合近年的科研工作,在查询已有资料的基础上对羊草生物学这一领域所取得的成果进行了综合分析与评述,内容包括种质资源与生物多样性、生理和繁殖生物学以及生物技术研究等.提出羊草生物学目前尚未解决的几个问题,建议及时充分利用水稻基因组已经取得的成果加快羊草生物学的研究步伐,使研究工作向深度发展.     

羊草草原改良措施与效果

1980～1997年改良退化草原4349.2km²,主要改良措施:1浅耕翻改良,有效利用15年,年均增产90.5%。2松土改良,有效利用年限6～10年,平均增产70.35%。3施肥改良,其中施尿素187.5kg/hm²,产草量提高3.2倍,施厩肥30～37.5t/hm²,第二年增产53.5%。4引种国内外苜蓿品种25个,筛选出一批耐寒抗病品种,每年割两茬,干草产量4927.5kg/hm²,是对照的3倍。表现好的品种有黄花苜蓿、肇东苜蓿、公农1号苜蓿、公农2号苜蓿、草原2号苜蓿。5补播改良效果不佳。     

羊草与灰色赖草及其杂交种的耐盐生理特性比较

用不同浓度的复盐(NaCl 60%,Na2SO4 40%)进行根际盐分胁迫处理,研究了羊草(Leymus chinensis)、灰色赖草(Leymus cinereus)及其杂交种的耐盐生理特性.结果表明,在0.2%、1.0%和2.0%盐浓度胁迫处理下,两亲本及其杂交种叶片均表现相对含水量(RWC)逐渐降低,相对电导率、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性逐渐增加,但亲本羊草和杂交种的SOD酶活性在2.0%盐浓度胁迫下,酶活性开始降低.而且杂交种对盐胁迫的敏感性与亲本灰色赖草接近,小于另一亲本羊草.     

羊草与灰色赖草杂种F1再生体系的建立

对羊草(Leymus chinensis)与灰色赖草(Leymus cinereus)杂种F1幼穗进行离体培养,建立了杂种F1植株再生体系.结果表明:不含任何激素的MS培养基是最佳的分化培养基,分化成苗率为66%;2,4-D对愈伤组织的诱导及其质地的改造有重要作用;3.0 mg/L 2,4-D MS培养基愈伤组织诱导率最高,为68%;2.0 mg/L 2、4-D MS诱导的愈伤组织胚性最强;诱导率与分化率没有直线对应关系;再生体系的建立为杂种F1育性恢复的研究奠定了基础.     

羊草种群的水分利用动态

采用中子水分探测仪、光电叶面积仪和LI-1600型稳态气孔计对羊草草原的水分利用进行野外实验观测。结果表明,羊草种群蒸腾速率T(t)的季节变化主要取决于20-40cm土层贮水量(SW46),光合有效辐射(FAR)和大气日均温(AT)的影响,其中20-40cm土层贮水量对羊草蒸腾速率的季节变化影响最大。羊草蒸腾耗水量的季节动态归根结底受控于大气降水的时空分布,并在时间上滞后于大气降水一旬左右。羊草的水分利用率,主要受植物生长大周期的控制。生物量在前期积累较快,相应的水分利用率高,而后期增长缓慢,水分利用率低。     

羊草生长率的研究和生长率假说的验证

生长率假说（GRH）是研究生物生长率与化学计量特征之间关系的理论。为了验证生长率假说，以北方草原重要建群种羊草（Leymus chinensis）为材料，将取自内蒙古和吉林省4个地点的羊草在相同的光照、水肥条件下盆栽土培，用称重法测定了羊草的生长率，用PCR的方法分析了羊草核糖体DNA基因间隔区（IGS）长度，研究了羊草生长率与羊草磷含量、氮磷比、IGS长度及取样地土壤中氮、磷含量之间的关系。结果表明，羊草生长率与羊草全磷含量存在正相关关系，与羊草氮磷比存在负相关关系，生长率较高的羊草具有较长的IGS，符合生长率假说的预测。不同来源的羊草种植在相同环境下，来自氮、磷含量较高土壤的羊草具有较高的生长率，这可能是羊草对特定地域生境条件长期适应的结果。高的生长率和长的IGS可能是植物对较高氮、磷含量环境的适应。     

羊草根茎顶芽分生组织分化的动态研究

羊草以无性繁殖为主,抽穗率低,而抽穗率的多少实质上是花芽分化的数量和质量问题。本研究对羊草根茎顶芽采用石蜡切片法的研究结果表明,在整个生长季的根茎顶芽中,营养芽和花芽均存在,但春秋2季是花芽分化和发育的高峰;而秋季分化和发育花芽的早晚和多少,是限制羊草种群抽穗整齐度和抽穗率的重要因素。本研究首次报道了羊草根茎分生组织分化的动态以及花芽分化的时间和所占比例。