应用间接ELISA检测动物隐孢子虫病抗体

分别应用蔗糖和氯化铯密度梯度离心法纯化小型隐孢子虫（ Ｃｒｙｐ ｔｏｓｐ ｏｒｉｄｉｕｍ ｐ ａｒｖｕｍ ）卵囊,获得高纯度的抗原,建立了用间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测动物隐孢子虫病抗体的方法。抗原最适包被质量浓度是 ５．０ ｍ ｇ／ Ｌ,待检血清最佳稀释度是 １∶１００,明胶封闭体积分数和作用时间分别为 １％ 和 ６０ｍ ｉｎ。试验证明,该法具有快速、简便、特异和重复性好等优点。     

应用间接ELISA方法检测牛新孢子虫抗体的研究

新孢子虫病(Neosporosis)是由犬新孢子虫(Neospora caninum)或类新孢子虫(Neosporalike)寄生于宿主动物所引起的多种家畜共患的一种原虫病[1].它可引起孕畜流产或死胎以及新生儿的运动障碍和神经系统疾病[2].目前,国外已研制出ELISA诊断试剂盒,但价格昂贵,不适合临床推广应用.而国内虽然建立了多种血清学诊断方法,但所用抗原均为重组蛋白,其敏感性、特异性将会受到不同程度的影响.因此,针对上述问题,试验对新孢子虫虫体抗原进行了分析,并应用新孢子虫虫特异性抗原建立了特异、敏感、稳定的血清学诊断方法,旨在为今后新孢子虫病的诊断和预防研究奠定基础.     

胶体金免疫层析法与ELISA法对牛的新孢子虫血清抗体检测结果的比较

新孢子虫病(Neosporosis)是由犬新孢子虫(Neospora caninum)寄于宿主所引起的一种原虫病[1].牛、绵羊、山羊、马、鹿等均可作为中间宿主,终末宿主是犬[2].     

上海地区奶牛犬新孢子虫病血清学抗体检测

为了掌握上海地区奶牛新孢子虫病的流行情况，应用酶联免疫吸附试验对上海地区奶牛血清样品进行新孢子虫病抗体检测。结果表明，被检的41个奶牛场1239份奶牛血清中有63份抗体阳性，阳性率为5．08％。各场阳性率变幅较大（0-44．23％）。     

应用ELISA检测牛结核血清抗体最佳条件的研究

用Ｔｒｉｔｏｎ ｘ ３０５ＰＢＳ、马高免血清、白陶土和丙酮分别处理３４０份结核菌素皮试阳性反应的奶牛血清，采用不封板、鸡高免血清封板和马高免血清封板三种方法，进行ＥＬＩＳＡ。结果表明，用白陶土处理样品血清、不封板和用鸡高免血清封板效果较好。     

福建省部分地区奶牛新孢子虫病血清学抗体检测

新孢子虫是造成怀孕母牛流产等繁殖障碍和新生犊牛运动障碍的重要寄生虫之一,目前尚未有有效的药物和疫苗来治疗和预防牛新孢子虫病。本研究使用新孢子虫抗体检测试剂盒对采自福建省漳州、南平、三明和龙岩4个地区规模化奶牛场的1 472份奶牛血清样品进行抗体检测,并通过SPSS 22.0软件进行生物统计学分析。结果表明,血清样品新孢子虫抗体总阳性率为7.47%,4个地区样品阳性率分别为5.57%、5.12%、7.41%和12.97%;不同年龄阶段奶牛阳性率范围为2.93%～9.56%,不同胎次阳性率范围为4.83%～9.50%。经统计学分析,不同年龄阶段奶牛阳性率差异显著（P<0.05）。这表明福建省奶牛普遍存在新孢子虫感染,奶牛场应采取综合防控策略和制定有效的管理措施控制奶牛新孢子虫病。     

双抗夹心—ELISA诊断牛隐孢子虫病

为了建立双抗体夹心—ＥＬＩＳＡ检测牛粪便中隐孢子虫卵囊抗原的方法。采用抗小球隐孢子虫（Ｃ．ｐａｒｖｕｍ）卵囊壁单克隆抗体,经对６０头份牛粪便样本分别进行抗酸染色和双抗夹心—ＥＬＩＳＡ检测,结果抗酸染色法检出１２头份有隐孢子虫卵囊,而ＥＬＩＳＡ除对抗酸染色阳性的１２份粪样判为阳性外,还对抗酸染色阴性的４份粪样判为阳性,且不与牛球虫、牛结肠小袋纤毛虫发生类属反应。此外,本试验在稀释液中加入ＥＤＴＡ,并增加了反应温度,使得试验在抗体包被板并封闭后３０ｍｉｎ结束整个检测过程。结果表明,双抗体夹心—ＥＬＩＳＡ是敏感性高、特异性强的诊断牛隐孢子虫病的方法。     

双抗体夹心阻断ELISA检测血清牛病毒性腹泻—粘膜病病毒抗体的研究

本研究建立了检测血清中牛病毒性腹病（ＢＤＶ－ＭＤ）病毒抗体的双抗体夹心阻断ＥＬＩＳＡ，并用其检测了长春地区２９３头奶和２６２头黄牛的血清。结果，奶牛的阳性率为５４．９％，黄牛的阳性率４３．５％。本文法是一种敏感、特异、快速的检测抗体方法。可在基层推广应用。     

青海省海西地区山羊和绵羊犬新孢子虫病的血清学调查

用犬新孢子虫的重组蛋白GST-NcSAG1t作为ELISA诊断抗原,进行了青海省海西地区山羊和绵羊群中犬新孢子虫病的血清学调查。经过对所收集的120份绵羊血清和531份山羊血清抗体的检测,共检出绵羊阳性血清10份,山羊阳性血清36份,其阳性率分别为8.33%和6.78%。说明青海省海西地区的绵羊和山羊群中存在犬新孢子虫的感染。     

表达牛源犬新孢子虫NcSRS2基因重组腺病毒的构建及免疫原性分析

为构建牛源犬新孢子虫NcSRS2基因重组腺病毒,并分析其免疫原性,PCR扩增牛源犬新孢子虫NcSRS2基因,构建克隆质粒pMD18-T-NcSRS2、重组腺病毒穿梭质粒pCR259-NcSRS2及表达质粒Transpose-AdNcSRS2,脂质体介导转染QBI-HEK293细胞,包装重组腺病毒Ad5-NcSRS2,PCR检测重组腺病毒NcSRS2基因,IFAT和Western blotting检测NcSRS2基因在QBI-HEK293细胞中的表达,测定病毒滴度后,收集病毒液免疫BALB/c小鼠,间接ELISA检测小鼠血清IgG抗体水平.结果显示,扩增的牛源犬新孢子虫NcSRS2基因大小为1 227 bp,与GenBank中发表的NcSRS2( AF061249)核苷酸序列相似性为99％;重组腺病毒Ad5-NcSRS2在293细胞中包装成功,表达蛋白的相对分子质量为43 ku,具有较好的反应原性;测得重组腺病毒Ad5-NcSRS2滴度为109TCID50·mL-1,间接ELISA检测二免后3周BALB/c小鼠血清中IgG抗体效价达1 ∶ 2 048.本研究成功构建了具有良好免疫原性的重组腺病毒Ad5-NcSRS2,为牛源犬新孢子虫NcSRS2基因重组腺病毒载体疫苗的研制奠定了基础.     

新孢子虫荧光PCR检测方法的研究

根据已知的犬新孢子虫种属特异性基因片段Nc-5基因序列,设计荧光定量PCR引物和荧光探针,经反应条件的优化,建立了检测新孢子虫的荧光定量PCR方法。该方法的检测灵敏度为10拷贝/反应。通过对系列稀释的重组质粒进行重复性检测,Ct值的变异系数为0.50%~1.18%。应用该方法对50份牛全血和8份流产胎儿样本进行检测,有5份全血和1份流产胎儿样本为阳性,阳性检出率均为10.3%,比普通PCR方法阳性检出率（7%）高。且具有较好的特异性和可重复性,可用来对新孢子虫病快速准确检测。     

2020年新疆部分地区猪瘟病毒抗体检测及分析

为了解2020年新疆部分地区规模化猪场的猪瘟病毒（CSFV）抗体水平,本试验应用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）,对采自18个规模化猪场的1 085份血清样品进行猪瘟病毒抗体检测。结果显示,CSFV抗体平均合格率为83.59%（907/1 085）,高于国家规定标准（70%）,平均阻断率为（66.99±25.09）%。A、B、C、D、E地区间猪瘟病毒抗体水平差异显著（P<0.05）。各规模猪场猪群抗体合格率在70%~87%之间,并且差异显著。此次检测结果表明,6个不同地区平均抗体合格率中,A、B、C、F地区抗体水平整齐度良好,E地区抗体水平偏低,变异系数偏大,抗体整体水平较差。大型规模养猪场猪瘟抗体合格率普遍高于中、小型规模养猪场,说明大型规模养猪场在猪瘟的防控方面具有一定优势。该结果可为新疆地区规模化猪场的猪瘟免疫防控提供参考。     

辽宁省猪弓形虫血清抗体检测与分析

弓形虫病是一种呈世界性流行的人兽共患寄生虫病,可在人和动物中相互传播,全球约有50%的人感染,不仅给畜牧业生产带来严重危害和重大经济损失,而且对食品安全构成巨大威胁。采用改良凝集试验(MAT)定性检测从辽宁省沈阳、辽阳、大连等14市采集的共计2 152份血清,结果共有368份阳性血清,总阳性率为17.1%(368/2 152),辽阳市和本溪市阳性率最高和最低,分别为26.3%和6.12%;其中繁殖母猪为33.9%,普遍高于育肥猪的13.4%;成年猪为20.9%,普遍高于仔猪的7.59%。结果表明,辽宁省14市猪均有不同程度的弓形虫感染,且各市感染率有差异。     

犬新孢子虫巨噬细胞转移抑制因子（McMIF）克隆表达与其免疫调节作用鉴定

对犬新孢子虫巨噬细胞转移抑制因子(NcMIF)生物学特性进行鉴定,将NcMIF在大肠杆菌中以3种不同的形式进行表达,三种蛋白分别为NcMIF (成熟的蛋白质),NcMIFm (脯氨酸突变为甘氨酸)和NcMIFhis (在N端添加多组氨酸标记),对三种蛋白的多聚体状态、互变异构酶、氧化还原酶及是否与MIF受体(CD74)结合等进行分析。实验结果显示这三种重组的NcMIFs (rNcMIF)均不具备互变异构酶和氧化还原酶活性;甘氨酸替代脯氨酸的重组NcMIF减少了二聚体和三聚物的形成;N端额外添加的HIS标签增加了三聚物的形成;rNcMIF无法与重组人MIF竞争与MIF受体(CD74)结合,这表明CD74不是NcMIF受体结合;免疫荧光染色结果证明NcMIF定位于犬新孢子虫速殖子的顶端。免疫电镜结果进一步显示NcMIF存在于微线体、棒状体、致密颗粒及细胞核中。为进一步分析NcMIF在寄生虫免疫逃逸过程中发挥的作用提供参考。     

2020年新疆地区猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测与分析

为了解2020年新疆地区猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)抗体水平及其消长规律,本试验采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法对1 218份血清中PRRSV免疫抗体水平进行检测和分析.结果显示,PRRSV抗体平均阳性率为78.49％(956/1218),高于国家规定标准(70％).S/P的平均值为1.22±0.8...     

Detection of Antibodies Against Peste des Petits Ruminants Virus in Sera of Cattle,Camels, Sheep and Goats in Sudan

Detection of antibodies against peste des petits ruminants virus in sera of cattle, camels, sheep and goats in Sudan.     

单抗捕获ELISA检测PRRSV抗体的方法的建立

以国内刚刚研制出的ＰＲＲＳＶ单克隆抗体为基础，建立了检测ＰＲＲＳ病毒抗体的单克隆抗体辅获抗原的ＥＬＩＳＡ法，其单抗包被浓度为１．１６μｇ／ｍＬ，粗提病毒反应浓度为１６．５０μｇ／ｍＬ，血清稀释度为１：４０。经与中和试验以及进口ＥＬＩＳＡ试剂盒比较，证明该法敏感性高，特异性良好，是一种有应用前景的方法。     

三聚氰胺单克隆抗体的制备与鉴定

本实验利用三聚氰胺类似物与血蓝蛋白、卵清蛋白偶联制备免疫抗原和包被抗原,免疫Balb/c小鼠,采用B细胞杂交瘤技术,经免疫、融合、筛选和克隆等,得到了抗三聚氰胺单克隆抗体。该抗体亚类为IgG1,制备的单克隆抗体腹水效果评价达10-7,与其他三聚氰胺结构类似物无交叉反应。三聚氰胺单克隆抗体的获得为进一步研发三聚氰胺药物残留检测试剂盒的研制奠定了基础。