鸡胚增殖病毒技术操作要点

目前病毒的培养有动物接种、组织培养和鸡胚培养3种方法,其中鸡胚培养是病毒培养中最常用的方法之一。鸡胚是正在发育中的机体,多种动物病毒能在鸡胚中增殖和传代。鸡胚的优点在于胚胎的组织分化程度低,而且可以选择不同的日龄和接种途径,病毒在鸡胚中易于增殖,部分病毒感染鸡胚以后可以产生疽斑,引起充血、出血、坏死灶和死亡等特异性的感染指征。感染病毒的鸡胚组织和液体中含有大量病毒,容易采集和处理,而且来源充足,设备和操作简便易行。     

鸡传染性支气管炎病毒M41株鸡胚增殖工艺研究

为研究鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41标准毒株在鸡胚上的最佳生产工艺,试验用IBV M41株分别以不同剂量接种同一胚龄不同鸡胚、不同胚龄普通鸡胚,以及IBV M41株接种普通鸡胚后不同培养时间收获鸡胚尿囊液,比较不同培养条件下制备病毒液的产量及病毒效价。结果显示:IBV M41株接种无传染性支气管炎病毒母源抗体的SPF鸡胚最佳病毒接种剂量为104.5EID50,接种含有IBV母源抗体的普通鸡胚最佳病毒接种剂量为105.1EID50,最佳接种胚龄为11日胚龄,最佳收毒时间为48 h。按照此工艺制备疫苗,免疫SPF鸡,IBV抗体效价均符合规程标准。研究结果为用鸡胚高效、大量生产IBV M41株病毒抗原进而生产合格的IB疫苗提供了数据支持。     

一株H9N2亚型禽流感病毒鸡胚培养工艺研究

为了探讨H9N2亚型禽流感病毒在鸡胚上最佳培养工艺,试验采用H9N2亚型禽流感病毒分离株以不同稀释倍数接种不同鸡胚(SPF及普通鸡胚)、不同日龄鸡胚及不同培养时间收获鸡胚尿囊液,比较不同培养条件下制备出的鸡胚尿囊液的产量及病毒效价。结果表明:H9N2亚型禽流感病毒接种无禽流感病毒(H9亚型)HI母源抗体鸡胚的最佳病毒稀释倍数为1×10~(4 )～1×10~5倍,接种带有禽流感病毒(H9亚型)HI母源抗体鸡胚的最佳病毒稀释倍数为1×10~3～1×10~4倍,最佳接种日龄为10日龄,最佳培养时间为96～120 h。说明采用优化的鸡胚培养方法生产H9N2亚型禽流感病毒可以得到高质量、高产量的病毒液。     

神经型犬瘟热病毒鸡胚培养实验

此试验旨在利用现有神经性犬瘟热病例病料通过鸡胚培养的方法分离提取犬瘟热病毒,并研究出鸡胚培养犬瘟热病毒的最佳条件.同时提取的病毒可以用于后续抗体制备.试验共进行六次鸡胚培养,使用犬瘟热快速检测试纸进行鉴定,成功分离鉴定了 CDV病毒.结果表明:鸡胚培养犬瘟热病毒的方法是可行的,犬瘟热病料研磨液接种鸡胚的较佳接种部位是尿...     

兰藤注射液体外抗新城疫病毒的实验研究

采用鸡胚培养法和血凝抑制试验测定了兰藤注射液对新城疫病毒的抑制作用.结果表明,中药对鸡胚无毒性作用;在药物与病毒同时接种后,可抑制新城疫病毒在鸡胚中的增殖.     

H9亚型HP株禽流感病毒繁殖规律的探索

为了研究H9亚型HP株禽流感病毒接种非免疫鸡胚后病毒的繁殖规律,试验用H9亚型HP株禽流感病毒接种非免鸡胚,记录不同时间段死亡的鸡胚数量,并分别收获各时间段死亡鸡胚的尿囊液,测定不同时间段尿囊液的病毒效价。结果表明,接种H9亚型HP株禽流感病毒后,非免鸡胚死亡高峰期出现在60～84 h,死亡数量占接种鸡胚数的80%以上,而该时间段死亡鸡胚尿囊液的病毒滴度也处于最高峰,最高到达10^9.63EID₅₀/mL,直到96 h病毒仍维持较高水平(10^9.50EID₅₀/m L),而96 h后病毒滴度开始衰减。     

不同消毒方式对禽用胚苗、种胚孵化率及疫苗质量的影响

禽用胚苗,系采用鸡胚、鸭胚等作为主要原材料生产的禽用疫苗.由于鸡胚产量大,供应足,价格低,取材广泛,生产周期短等优点,大多数禽用胚苗采用鸡胚作为主要原料.禽用病毒疫苗的生产,一般是以无特定免疫原性的鸡胚作为病毒繁殖的寄主,经孵化病毒扩增后,收获胚内病毒含量较高的部分用来制造疫苗.可见,在疫苗生产过程中需要用到大量的鸡胚.鸡胚成活率、外源物质对终产品的影响,是决定疫苗生产成本及品质的两个关键因素.其中,影响鸡胚成活率的一个重要原因是鸡胚外表面的细菌污染.为了寻找更适合实际生产的鸡胚外表面灭菌方法,提高鸡胚孵化成功率,降低生产成本,我们设计了如下试验:采用连续80余批次种胚,采用不同的消毒方式对鸡胚外表面进行处理,取得比较明显的效果.现报告如下:     

中药复方口服液体外抗鸡新城疫病毒的实验研究

采用鸡胚培养法和血球凝集试验测定了中药配方对新城疫病毒的抑制作用。结果表明,中药配方对鸡胚无毒性作用;在药物与病毒同时接种情况下,能抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。     

中药复方口服液体外抗鸡新城疫病毒的实验研究

采用鸡胚培养法和血球凝集试验测定了中药配方对新城疫病毒的抑制作用.结果表明,中药配方对鸡胚无毒性作用;在药物与病毒同时接种情况下,能抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖.     

中草药在鸡胚水平上抗病毒作用研究

试验对地锦草、黄连、蒲公英提取液在鸡胚水平上进行了抗猪流感病毒和新城疫病毒作用研究.猪流感病毒(或新城疫)病毒分别和地锦草、黄连、蒲公英提取液混合接种到9～11日龄鸡胚,继续孵化,记录鸡胚死亡时间和测定死亡鸡胚尿囊液血凝价.结果表明:地锦草对猪流感病毒没有作用,蒲公英对新城疫病毒没有作用;黄连和蒲公英对猪流感病毒有一定的抑制作用.地锦草和黄连对新城疫病毒有一定的抑制作用,减缓了鸡胚的死亡,降低了血凝效价,但是不能完全杀灭病毒.     

中药复方口服液体外抗鸡新城疫病毒的试验研究

采用鸡胚培养法和血球凝集试验测定了中药配方对新城疫病毒的抑制作用。结果表明,中药配方对鸡胚无毒性作用;在药物与病毒同时接种情况下,能抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。     

中药复方口服液体外抗鸡新城疫病毒的试验研究

采用鸡胚培养法和血球凝集试验测定了中药配方对新城疫病毒的抑制作用。结果表明,中药配方对鸡胚无毒性作用;在药物与病毒同时接种情况下,能抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。     

鸭病毒性肝炎活疫苗(CH60株)规模化生产工艺改进试验

在鸭病毒性肝炎活疫苗(CH60株)生产时,用10日龄和11日龄进行病毒增值,同时把病毒稀释倍数由100倍改为5000倍,将鸡胚死亡高峰期、最终死亡率、单胚平均收获单产、病毒含量ELD50进行对比分析,结果表明将病毒进行100倍稀释后,用11日龄鸡胚增值鸭病毒性肝炎弱毒(CH60株)与10日龄鸡胚相比死亡高峰期时间、最终死亡率、病毒含量ELD50、单胚平均收获单产等基本相同;将病毒进行5000倍稀释后,用11日龄鸡胚增值鸭病毒性肝炎弱毒(CH60株)与10日龄鸡胚相比死亡高峰期时间推迟12~24h,最终死亡率基本相同、单胚平均收获单产可提高30%左右、病毒含量ELD50略有上升;采用5000倍稀释病毒,接种11日龄鸡胚的生产工艺可以提高收获单产,降低生产成本,提高产品效价.     

鸡肾型传染性支气管炎的防制

1病原 鸡传染性支气管炎病毒属于冠状病毒科冠病毒属,有囊膜,单股正链RNA病毒.传染性支气管炎病毒能在10～11日龄的鸡胚中生长,用自然毒辣初次接种鸡胚,多数鸡胚存活,但随继代次数的增加,对鸡胚的毒力增强,到第10代时,可在接种后的第9天引起80%的鸡胚肾细胞、鸡肾细胞和鸡胚肝细胞上生长,经多次传代(6～10)后,可引起较明显的细胞病变;表现为胞浆融合,形成合胞体及细胞死亡.     

部分禽源生物制品外源病毒的检测

进行了部分禽用生物制品外源病毒检测的鸡胚检查法、细胞检查法和鸡检查法。鸡胚检查法应用SPF鸡胚检验;细胞检查法主要通过鸡红细胞吸附试验、禽白血病病毒ELISA和禽网状内皮组织增生症病毒IFA检验疫苗是否含有外源鸡红细胞吸附因子、禽白血病病毒和禽网状内皮组织增生症病毒,并提出疫苗检验的判定标准,为各兽用生物制品生产企业新城疫疫苗的外源病毒检验提供参考。     

鸡胚尿囊液量与鸡种的相关性研究

选择９日龄非免疫的罗曼蛋鸡胚和淮南麻黄鸡胚各１８０个,按不同胚重各分成３组,同时接种鸡新城疫病毒,观察病毒对不同品种鸡胚尿囊液量的影响。结果表明：罗曼蛋鸡胚的尿囊液量极显著高于淮南麻黄鸡胚;罗曼蛋鸡胚的尿囊液量／胚蛋重大于淮南麻黄鸡胚。罗曼蛋鸡胚的失水率小于淮南麻黄鸡胚。罗曼蛋鸡胚和淮南麻黄鸡胚尿囊液量与胚重均呈极显著正相关。     

鱼腥草提取液在鸡胚内抗新城疫病毒试验

为证明鱼腥草抗新城疫病毒的作用效果,通过接种鸡胚方法,对病毒接种前、接种同时、接种后加药三种方式处理的鸡胚尿囊液血凝效价进行测定。结果显示,在三种不同的加药方式中,不同浓度的鱼腥草提取液都能够降低新城疫病毒感染鸡胚尿囊液的血凝效价;鱼腥草提取液和新城疫病毒同时注入鸡胚时,鱼腥草原液抗病毒效果最好;鱼腥草提取液于新城疫病毒接种后注入鸡胚时,2倍稀释液抗病毒效果最好;鱼腥草提取液先于新城疫病毒注入鸡胚时,4倍和8倍稀释液抗病毒效果最好。结果表明,鱼腥草提取液能够抑制新城疫病毒在鸡胚尿囊液中的增殖;鱼腥草提取液在鸡胚内抗新城疫病毒活性与其加药方式及浓度有关。     

松乳菌多糖在鸡胚水平抗新城疫病毒研究

对松乳菌多糖(胞内多糖和胞外多糖)在鸡胚水平上进行了抗新城疫病毒研究。接种致死量的新城疫病毒和不同浓度松乳菌胞内多糖(或胞外多糖)混合液到9～11日龄鸡胚。通过测定鸡胚平均死亡时间(MDT)、死亡鸡胚尿囊液血凝效价评价多糖对病毒的抑制作用。结果表明松乳菌胞外多糖对病毒没有抑制作用,不能延长新城疫病毒对鸡胚的致死时间,也不能降低血凝效价;松乳菌胞内多糖对新城疫病毒有一定的抑制作用,减缓了鸡胚的死亡,降低了血凝效价,但是对病毒不能完全杀灭。     

北京小鸭病毒性肝炎的研究——(三)鸡胚化鸭肝炎病毒(DHV)在鸡胚中的生长曲线及分布

本文是研究鸡胚在接种鸡胚化 DHV 后的四个问题:(1)鸡胚死亡发展的格局;(2)病毒在鸡胚中的生长曲线;(3)38℃恒温对死胚里病毒的影响;(4)鸡胚中各部分 DHV 的含量。接种病毒后48小时至56小时为鸡胚死亡的高峰;病毒滴度在接种后48小时至64小时之间都保持在最高水平,约10~8ELD50/0.1ml。当死胚继续孵化24小时后,病毒含量下降2个滴度单位,若再保温24小时,则病毒滴度几乎等于零。在鸡胚的不同部位中,胚胎合病毒的滴度为10(?)ELD50/0.1ml;羊水为10(?)ELD50/0.1ml;尿囊液为10(?)ELD50/0.1ml;卵黄囊为10(?)ELD50/0.1ml。讨论了这项研究的实用意义。     

致肾病变为主的鸡传染性支气管炎病毒分离

通过鸡胚接种、传代,从病鸡肺、肾病料中分离出一株病毒、该病毒对鸡胚的致死率和卷曲胚的出现率均达到50%或50%以上;部分鸡胚的肾脏有白色尿酸盐沉积.结合病毒干扰试验和回归小鸡,本次分离物为传染性支气管炎病毒.发病鸡群的剖检变化以肾脏和输尿管的病变为主.同时伴发气囊炎.本次疫病确诊为鸡传染性支气管炎肾病变型.