鸡树条荚蒾果多酚改善胰岛素抵抗HepG2细胞的糖代谢效应

目的探讨鸡树条荚蒾果多酚对HepG2细胞胰岛素抵抗（IR）模型的改善作用,以评价其降血糖活性。方法本研究采用高浓度胰岛素诱导,建立体外IR模型,并进行模型稳定性（细胞活性法）及可靠性（Z因子法）评估。试验设空白组、IR模型组、阳性对照（二甲双胍）组和荚蒾果多酚组,MTT法检测细胞活性;葡萄糖氧化酶法检测培养液葡萄糖含量,计算葡萄糖消 耗量;蒽酮法测定糖原含量;比色法检测细胞己糖激酶（HK）、丙酮酸激酶（PK）活性,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞磷酸烯醇式丙酮酸激酶（PEPCK）、葡萄糖六磷酸酶（G6PC）活性。结果10? 6 mol/L的胰岛素诱导处理HepG2细胞24 h是产生胰岛素抵抗模型的最适条件,且IR模型在12 ~ 36 h内有较高的稳定性和可靠性。0.10 ~ 1.00 mg/mL 荚蒾果多酚组的葡萄糖消耗量显著高于模型组（P < 0.05）,24 h、0.50 mg/mL组的糖消耗量最高,为（3.49 ± 0.11）mmol/L,消耗率可达88.81%（P < 0.01）。与模型组对比,荚蒾果多酚可提高糖原的含量33.65%（P < 0.01）,HK、PK活性可分别提高43.36%（P < 0.05）、48.41%（P < 0.01）,对G6PC、PEPCK活性抑制率为分别为22.86%（P < 0.01）、17.33%（P < 0.05）。结论鸡树条荚蒾果多酚可提高IR- HepG2细胞的HK、PK活性,加快糖酵解,增加糖原含量;抑制G6PC、PEPCK活性,从而减少细胞内源性葡萄糖的产生。所以鸡树条荚蒾果多酚对胰岛素抵抗细胞的治疗具有一定效果。      

奶牛能量状态对血清FGF-21水平的影响

为了明确能量代谢负平衡奶牛血清中成纤维细胞生长因子(FGF-21)浓度的变化规律以及与奶牛能量代谢负平衡特征性指标之间的关系。研究从某千头奶牛场选取选择非妊娠、非泌乳、健康奶牛10头,随机分成2组,每组5头。在实验期间,一组牛饲喂120%维持(1.48 Mcal·kg~(-1))日粮,另一组饲喂30%维持能量(0.37 Mcal·kg~(-1))日粮(NRC标准),每天采集血液样品,检测能量代谢特征性指标,其中,血清理化指标采用全自动血液生化分析仪进行测定,激素指标Elisa试剂盒进行检测。所有检测数据均采用统计学方法进行分析与统计。结果显示:摄入30%维持能量(0.37 Mcal·kg~(-1))日粮的牛血清FGF-21水平同时显著升高;饲喂120%的维持日粮的牛血清FGF-21水平同时显著降低。实验检测指标中血清FGF-21指标与瘦蛋白(LP)为正相关,与血糖(Glu),β羟丁酸(BHBA)为负相关。结论:实验表明FGF-21与能量密切相关并且在奶牛能量代谢平衡状态的调控中发挥作用,为今后深入探究能量负平衡的发生机理和新的防治策略奠定了基础。     

葛仙米提取物诱导肝癌细胞HepG2凋亡的活性研究

[目的]研究葛仙米提取物诱导肝癌细胞HepG2凋亡的活性。[方法]采用二甲基四氮唑蓝（MTT）法测定细胞存活率,形态学法观察凋亡的特征性变化,AnnexinV/PI双染及PI单染流式细胞术法检测凋亡率。[结果]经不同浓度提取物作用后,HepG2细胞的生长受到显著抑制,并呈现时间-浓度依赖关系趋势。观察细胞形态,发现有凋亡特征性变化。AnnexinV/PI双染结果显示,癌细胞早期凋亡率随提取物浓度的升高而显著增高,最高可达79.2%。PI法同样显示凋亡的发生,其凋亡峰最大比率为9.6%,显著高于对照组。[结论]葛仙米甲醇提取物能够诱导肝癌细胞HepG2的凋亡。     

FGF-21对大鼠血小板聚集和活化的抑制作用

临床上大部分抗血小板药物存在继发性出血等副作用,亟需寻找一种安全有效的抗血小板药物。二磷酸腺苷(ADP)和花生四烯酸(AA)是介导血小板聚集的主要物质,文章探讨成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)是否抑制ADP或AA诱导大鼠血小板聚集和活化。将大鼠分为正常对照组、正常鼠血小板活化组、阿司匹林干预后血小板活化组、FGF-21高、中、低剂量干预后血小板活化组。给药干预后提取各组血小板,分别用ADP或AA处理,观察处理后血小板聚集情况以及P选择素和血栓素(TXB2)表达水平。与正常对照组相比,正常鼠血小板经ADP或AA处理活化后,血小板聚集率显著升高,血浆中P选择素和TXB2含量明显上升;与正常鼠血小板经ADP或AA处理活化后相比,经阿司匹林和FGF-21干预后分别经ADP或AA处理活化后的血小板聚集率显著下降,血浆中P选择素和TXB2含量显著下降;FGF-21干预组经ADP或AA活化后,血小板聚集率、P选择素和TXB2含量下降水平呈明显剂量依赖性。目前国内外尚未发现FGF-21对血小板聚集与活化作用的相关报道,研究首次证明FGF-21具有抑制ADP和AA诱导血小板聚集和活化作用及明显的抗血凝作用,填补FGF-21在抗血凝研究领域空白,为开发安全有效的抗血凝药物提供理论依据。     

SUMO融合系统高效表达可溶性鼠源FGF-21及其活性的研究

利用SUMO表达载体在大肠杆菌中高效可溶性表达鼠源成纤维细胞生长因子(FGF-21)成熟蛋白,并研究其调节血糖的功能。将鼠源FGF-21成熟蛋白基因亚克隆至SUMO表达载体上,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中诱导表达,并用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化重组蛋白,透析后利用SUMO蛋白酶I切割融合蛋白,获得纯度较高的成熟蛋白。将3T3-L1成纤维细胞分化成脂肪细胞,经微量化的GOD-POD法检测培养基中葡萄糖含量,统计学分析葡萄糖消耗率。结果表明,在SUMO表达体系中鼠源FGF-21成熟蛋白基因以可溶形式表达,且可被SUMO蛋白酶I有效地切割,获得纯度较高的成熟蛋白。与未经处理的脂肪细胞对照组相比,经鼠源FGF-21成熟蛋白处理后脂肪细胞对葡萄糖的摄取利用显著增加,残存在培养基中的葡萄糖含量明显减少;两样本比较的t检验,P<0.001,差异极显著。     

沉默Prx Ⅱ基因促进5-FU诱导HepG2细胞凋亡研究

旨在探究PrxⅡ对5-FU诱导HepG2(人肝癌细胞系)细胞凋亡的影响,阐明沉默PrxⅡ基因提高5-FU促进HepG2发生细胞凋亡的作用。利用慢病毒介导的shRNA干扰技术建立PrxⅡ基因沉默的HepG2细胞系、MTT法检测细胞存活率、荧光显微照相测定凋亡情况、蛋白质免疫印迹检测凋亡相关蛋白表达水平。结果表明PrxⅡ基因沉默的HepG2细胞系构建成功;MTT检测发现在1mmol·L-15-FU处理下,shPrxⅡ组细胞存活率明显低于Scramble组;荧光显微照相结果表明shPrxⅡ组细胞凋亡率明显高Scramble组;蛋白质免疫印迹结果表明PrxⅡ基因沉默的HepG2细胞中凋亡标志物PARP、促凋亡蛋白Bad的表达水平明显升高,抗凋亡蛋白Bcl-xL表达水平明显下降。研究表明,沉默PrxⅡ基因能提高HepG2对5-FU促凋亡作用的敏感性,导致HepG2细胞凋亡水平上升,研究结果可为提高肝癌细胞对于5-FU的敏感性提供新的潜在靶目标。     

牦牛CCL14蛋白对HepG2细胞活性和凋亡的影响

旨在研究牦牛CCL14蛋白（Bos grunniens C-C motif chemokine 14 protein, BgCCL14）对HepG2细胞的影响和作用机制。将原核表达的BgCCL14蛋白与HepG2细胞共培养,利用CCK-8试剂盒检测细胞活性,平板克隆检测细胞克隆形成能力,细胞划痕检测细胞迁移以及荧光定量PCR检测相关基因的表达量。结果表明,1 μg/mL、10 μg/mL和20 μg/mL的BgCCL14蛋白均能显著降低HepG2细胞活性;20 μg/mL的BgCCL14蛋白对细胞增殖和迁移有极显著抑制作用;20 μg/mL的BgCCL14蛋白处理36 h极显著上调凋亡基因BAK和BAX 的mRNA水平,极显著降低 HIF1A、 PI3K和 CDK1基因的mRNA水平,显著降低mTOR基因 的mRNA水平。这表明BgCCL14蛋白可能通过促进细胞凋亡抑制肝癌细胞活性。     

九香虫水煎液对肝癌HepG2细胞体外生长的影响

为探究九香虫水煎液对肝癌HepG2细胞体外生长的影响,设置空白组、对照组与水煎液药物组(浓度10、20、30、40 mg/mL),采用细胞形态法观察九香虫水煎液对HepG2细胞形态的影响,MTT法检测细胞的增殖活力,MDC染色法检测细胞的自噬作用,Hoechst 33258染色法检测细胞的凋亡作用.结果表明,不同浓度九...     

姬松茸多糖诱导HepG2 细胞凋亡的线粒体通路研究

为探讨姬松茸多糖诱导HepG2细胞凋亡过程中线粒体膜电位和细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的变化.以人肝癌细胞系HepG2细胞为对象,使用流式细胞仪检测姬松茸多糖对HepG2细胞凋亡及线粒体膜电位的影响,激光共聚焦显微镜检测HepG2细胞[Ca2+]i的变化.结果表明姬松茸多糖能显著诱导HePG2细胞凋亡,并不同程度降低HepG2细胞线粒体跨膜电位,升高细胞[Ca2+]i,造成钙稳态失衡.姬松茸多糖诱导HepG2细胞凋亡的机制与降低线粒体膜电位,造成细胞内Ca2+超载有关.     

SUMO-cFGF-21发酵工艺优化及其降糖效果研究

研究旨在优化SUMO-cFGF-21发酵工艺,同时检测cFGF-21蛋白对糖尿病小鼠和犬血糖的降糖效果。通过SDS-PAGE电泳分析发酵条件(菌种、工程菌OD600、诱导时间、诱导温度、诱导剂IPTG浓度)对SUMOcFGF-21蛋白表达的影响。结果表明,22号菌种蛋白表达量最高,达到上清蛋白30.5%,可作为一级菌种。发酵过程中,当工程菌OD600值约为2、诱导时间6 h、诱导温度23℃、诱导剂IPTG终浓度1 mmol·L~(-1)时,上清中SUMOcFGF-21蛋白表达量最高,达到上清蛋白19.7%。经Ni柱亲和层析,酶切去掉SUMO标签后成功制备cFGF-21蛋白。将不同剂量cFGF-21持续注射糖尿病小鼠两周,以有效剂量cFGF-21持续注射糖尿病犬两周,观察降糖效果。结果表明,与模型对照组相比,有效剂量cFGF-21均可极显著降低糖尿病小鼠和犬的血糖(P0.01)。研究成功优化SUMO-cFGF-21蛋白中试发酵工艺,并检测cFGF-21蛋白对糖尿病小鼠和犬血糖的降糖效果,为临床应用cFGF-21治疗犬糖尿病提供依据。     

高良姜不同成分对人肝癌HepG2细胞的抗氧化损伤活性

目的探讨高良姜二苯基庚烷类、黄酮类、挥发油类及高良姜醇提物（组分Ⅰ-Ⅳ）对人肝癌HepG2细胞过氧化损伤的保护作用。方法采用减压硅胶柱层析（VLC）法对高良姜提取物进行分离;采用薄层色谱法（TLC）结合高效液相-质谱联用（HPLC-MS）法对各组分进行归属与鉴定;建立H2O2诱导HepG2细胞氧化损伤模型,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡。结果组分Ⅰ和模型组的细胞存活率分别为71.9%、50.3%,两组的差异具有显著性（P〈0.05）;与模型组比较,组分Ⅰ和Ⅱ均可降低细胞凋亡率（P〈0.05）,其中组分Ⅰ更明显。结论高良姜组分Ⅰ和组分Ⅱ均有一定的抗氧化活性,其中组分Ⅰ更明显。     

百草枯对人肝HepG2细胞的致突变性

采用微核(MN)试验和姊妹染色单体交换(SCE)试验评价了百草枯(Paraquat,PQ)对人肝Hep G2细胞的致突变性。结果显示,7.21 mg/L的PQ处理即可导致Hep G2细胞的MN率和SCE频率均明显升高,且MN率和SCE频率升高趋势均与PQ处理浓度呈正相关,至34.57 mg/L的PQ处理组,Hep G2细胞的MN率和SCE频率分别升高为正常组的5.29和6.07倍,表明PQ对人肝Hep G2细胞具有明显的致突变性。     

4-烯-3-酮甾体衍生物对HepG2细胞的抑制作用研究

采用MTT法,研究了8个4-烯-3-酮甾体化合物对肝癌细胞HepG2生长抑制作用。7α,20β-二羟基-16,17α-环氧黄体酮（8）抑制作用最好,IC50值为92.5μg.mL-1。结果表明羟基化甾体的抗肿瘤活性与其化学结构密切相关。随受试物浓度的增加,对HepG2细胞的抑制作用均增强,但对HepG2细胞的效果存在差...     

低氘水对肝癌HepG2细胞增殖和侵袭能力的抑制作用

目的探讨低氘水(deuterium-depleted water,DDW)对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭能力的抑制作用。方法 HepG2细胞及正常肝细胞LO2用50、75、100、150ppm DDW(纯净水对照组)处理,用MTT法、平皿克隆实验检测细胞增殖、侵袭转移能力,Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达。结果 100ppm DDW处理24h对LO2细胞、72h对HepG2增殖抑制无影响(P>0.05)。HepG2在50、75ppm DDW中细胞克隆数均低于对照组,而LO2细胞克隆数高于对照组(P<0.01)。50、75、100ppm DDW处理后HepG2细胞PCNA表达明显低于对照组(P<0.01)。结论 DDW可抑制HepG2细胞增殖和侵袭能力,但促进正常细胞LO2生长,这可能与PCNA表达下调有关。     

豆类丝核菌次级代谢产物与阿霉素的体外联合抑瘤作用研究

［目的］研究豆类丝核菌次级代谢产物与阿霉素的降毒增效作用。方法］分别采用6种不同浓度的豆类丝核菌次级代谢产物（苦马豆素含量分别为10.00、5.00、2.50、1.25、0.62、0.31 μg/ml）处理人肝癌细胞HepG2,测量其IC50;然后用此代谢产物与2种不同浓度（60、6 μg/ml）阿霉素（ADR）联合处理HepG2,分析两者的增效作用。结果］豆类丝核菌次级代谢产物可抑制肝癌细胞HepG2生长,其对HepG2细胞作用72 h的IC50为1.25 μg/ml;ADR可显著抑制肝癌细胞HepG2生长,加入豆类丝核菌次级代谢产物后HepG2细胞的形态和存活率变化不大。结论］豆类丝核菌次级代谢产物与阿霉素体外联合不具有增效作用。     

百草枯对人肝HepG2细胞存活力和凋亡的影响

探讨百草枯(PQ)对人肝细胞的毒性。采用甲基噻唑蓝试验和流式细胞术分别检测了PQ处理24 h对人肝Hep G2细胞存活力和凋亡的影响。PQ处理24 h时,对Hep G2细胞存活力的半数抑制浓度为51.17 mg/L;7.21 mg/L的PQ处理24 h即可启动Hep G2细胞的早期凋亡程序,随着PQ处理浓度的增大,Hep G2细胞的总凋亡率先升高后降低,而细胞坏死率持续升高。PQ对人肝Hep G2细胞具有明显毒性,会抑制Hep G2细胞的存活力,低浓度时主要诱导细胞凋亡,高浓度则主要导致细胞坏死,说明保肝类药物可能对PQ中毒有较好疗效。     

构树黄酮诱导肝癌细胞凋亡的初步观察

[目的]研究构树黄酮对肿瘤细胞的抑制效果。[方法]将处于对数生长期的Hep G2细胞接种于含有0、25、50、100、200、300μg/ml构树黄酮的DMEM培养基中,在37℃、5%CO2条件下分别培养24、48和72 h,采用MTT法测定构树黄酮对Hep G2细胞增殖的影响、用碘化丙啶(PI)染色法观察细胞形态的变化,并计算Hep G2细胞凋亡率。[结果]构树黄酮能显著抑制Hep G2细胞增殖,并呈现剂量和时间依赖性;构树黄酮能诱导Hep G2细胞凋亡,其最低有效浓度为25μg/ml;且Hep G2细胞凋亡率呈随着构树黄酮浓度增加及作用时间延长而升高。[结论]构树黄酮能抑制Hep G2细胞增殖并诱导其凋亡。