葡萄果皮花青素提取工艺优化研究

利用高效液相色谱(HPLC)对提取葡萄果皮中花青素的提取液、提取方法和色谱条件进行比较,采用正交实验设计选择最佳的提取工艺,利用5种花青素峰面积分析夏黑葡萄果皮所含花青素的含量。试验结果表明,提取液为甲醇：水=1:1,磷酸调pH=2.0,提取时超声辅助提取30min,为最佳的工艺提取出夏黑葡萄果皮中花青素的含量,色谱条件为流动相A：水/乙腈/甲酸= 40/50/10(v/v/v),流动相B：水/乙腈/甲酸= 87/3/10(v/v/v),柱温45℃,进样量20μL,检测波长520 nm,梯度洗脱条件为:(1)0-15 min,6% A-30% A;(2)15-30 min,30% A-50% A;(3)30-35 min,50% A-60% A;(4)35-40 min,60% A-6% A,呈现的色谱图分离度更好,总体效果更佳。     

液相色谱串联质谱法测定海鲈鱼中土霉素 四环素 金霉素 强力霉素含量的分析

研究建立海鲈鱼中四环素族的液相色谱/串联质谱(LC/MS/MS)方法。海鲈鱼样品经制样,1%高氯酸溶液提取土霉素、四环素、金霉素、强力霉素,固相萃取装置(SPE)净化,氮气吹干后用甲醇复溶。以Welch Materials Ultimate XD-C8色谱分离柱,乙腈-甲醇混合溶液、0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,使用电喷雾三重四极杆串联质谱的多重反应监测模式(Multiple Reaction Monitoring,MRM)测定,以校准曲线法进行定量。所建立的液相色谱串联质谱法(LC/MS/MS)对于分析海鲈鱼中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的批内、批间RSD分别为0.12%~0.86%,0.10%~0.37%,回收率为91.7%~95.3%。     

食品中罗丹明B的高效液相色谱串联质谱法检测

建立了使用高效液相色谱串联质谱法检测食品中罗丹明B含量的分析方法。食用油样品经70%甲醇水溶液提取后,直接可用于进样分析,固体样品以70%甲醇溶液提取、MCX固相萃取柱净化,经色谱柱分离后,以0.1%甲酸水和乙腈梯度洗脱,经ESI+模式、多反应模式(MRM)进行检测。结果表明,罗丹明B在1.0~100.0 ng/mL质量浓度范围内呈良好的线性关系,空白样品加标的回收率在90.3%~96.8%,相对标准偏差(RSD)均小于5%,检出限为0.5μg/kg,具有快速、准确、灵敏度高等优点,适用于食品中罗丹明B的定性和定量分析。     

高效液相色谱法在大白菜种子品种鉴定中的应用

该文用高效液相色谱法对北京普遍种植的12个大白菜品种种子的水溶性蛋白进行了色谱分离,同时对北京新二号及其亲本的种子也进行了分析比较。根据不同品种由大小不同的主要色谱峰组成的“指纹”图谱,各品种可以很容易得以鉴别。结果表明:作者发展的高效液相色谱法很适于大白菜种子的品种鉴定.并且为大白菜育种中数量性状的遗传分析提供了有力的手段。     

大豆异黄酮组分HPLC快速分析技术及其在豆腐加工中的应用

大豆异黄酮育种与大豆制品加工研究需要进行大批量样品12种异黄酮组分的快速定量分析。在前人研究基础上利用Agilent 1100高效液相色谱(HPLC)系统,以大豆品种南农95C-13为材料,研究大豆苷元,大豆苷,乙酰基大豆苷,丙二酰基大豆苷,染料木苷元,染料木苷,乙酰基染料木苷,丙二酰基染料木苷,黄豆苷元,黄豆苷,乙酰基黄豆苷,丙二酰基黄豆苷等12种标准品外标法快速定量技术。从样品制备与色谱条件对分析12种异黄酮组分的准确度和分离度入手,确定分析流程,以(科丰1号×南农1138-2)的184个重组自交系(NJRIKY)为材料,研究豆腐加工中总量和各组分的变化特点。(1)样品以80%甲醇水溶液50℃超声1 h提取;色谱条件为,检测波长254 nm, 柱温36℃,流速2.0 mL min^–1, 进样量 10 μL, 流动相0.1%(V/V)乙酸水溶液(A)和100%甲醇(B),0~2 min,27% B (V/V)→2~3 min,27%~38% B→3~10 min, 38% B→10~12 min,38%~39% B→12~14 min, 39% B→14~15 min, 39~27% B梯度洗脱;在15 min内将12个组分良好分离,各组分峰面积与其相应浓度均呈良好线性关系(R²为0.9976~0.9999);加标回收率均大于99%,变异系数低于2%。(2)NJRIKY群体籽粒、豆乳、豆腐异黄酮总量和组分的大量分析验证了HPLC快速技术的效果。籽粒异黄酮总含量(3 695.00 μg g^–1)在豆乳加工中平均85.15%转入豆乳 (3 146.12 μg g^–1),14.85% (548.88 μg g^–1)进入豆渣。传统豆腐加工通过硫酸钙絮凝,只有17.32% (639.89 μg g^–1)转入豆腐,67.83% (2 506.23 μg g^–1)留在黄浆水中。豆乳中12种组分含量比籽粒稍低,均以丙酰基染料木苷含量最高;而豆腐中乙酰基染料木苷和乙酰基黄豆苷缺失,以染料木苷元与大豆苷元含量较高。大豆科丰1号与南农1138-2杂交重组后家系间的异黄酮遗传变异增大,增加了对其遗传改良的潜力。     

鱿鱼内脏制备功能性短肽的初步研究

为了选取水解鱿鱼内脏效果较优的蛋白酶,并对鱿鱼内脏的水解液进行分析,测定水解液的分子量分布范围,并对洗脱液的DPPH自由基清除能力进行分析。试验选取碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、动物蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶对鱿鱼内脏进行水解,通过测定水解液的总氮含量、氨基态氮含量,比较各水解液的水解度、氮收率以及水解得率。经大孔树脂对胰蛋白酶水解液进行水、20%、60%、80%甲醇-水梯度洗脱,经液相质谱(LC-MS)进行分析。结果发现水解液短肽分子量范围在100~2400,其中以60%梯度洗脱的水解液分子量分布范围较为集中,且以分子量在200左右的化合物为主,对各洗脱梯度水解液的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除能力分析可知60%梯度洗脱水解液DPPH清除能力为40.21%。胰蛋白酶为水解鱿鱼内脏较优的蛋白酶,且60%甲醇-水为最优洗脱浓度。     

朝鲜蓟加工品中多酚含量研究

为研究分析不同产地朝鲜蓟罐头食品中多酚种类、含量的差异,应用液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱方法(LC-MS/MS)进行检测,样品在避光条件下经70%的甲醇水溶液室温震荡提取1 h后,进行液相色谱-质谱分析。采用Agilent proshell 120 EC-C18色谱柱,流动相A为0.1%乙酸-水,流动相B为乙腈,采用线性梯度洗脱。结果表明,此方法共定性定量出朝鲜蓟罐头中17种多酚物质,同一样品中不同多酚含量差异显著,绿原酸含量最高为625.701 μg/g,洋蓟素的含量次之,平均值为315.823 μg/g;按照不同地区多酚含量比较,亚洲样品中,多酚含量普遍偏低。由此得出,应用LC-MS/MS可以快速高效检测出朝鲜蓟罐头食品中多酚含量,多酚含量因产地不同差异显著。     

不同产地吴茱萸有效成分指纹图谱研究

通过对不同产地吴茱萸有效成分指纹图谱进行研究,为吴茱萸内在质量的评价提供参考。选择的色谱条件为:色谱柱:DiamonsiL C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇—0.02%磷酸水溶液(pH=3)二元梯度洗脱;流速:1.0 ml/min;进样量10μl;柱温:25℃。检测波长:250 nm。12批贵州余庆产吴茱萸药材样品共有23个共有峰,指纹图谱的相似性较高,其他产地吴茱萸药材与贵州余庆吴茱萸药材之间具有较大差异,可以用该方法来区别其他产地的药材。     

荔枝中20种登记农药残留分析方法研究

为解决荔枝中20种登记农药多残留的同时快速检测问题,建立并优化基于超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时检测荔枝中7种杀虫剂和13种杀菌剂的分析方法。荔枝全果样品经80%乙腈水溶液提取后,用石墨化碳黑(GCB)净化,流动相为乙腈和水,梯度洗脱,采用Extend C₁₈色谱柱进行分离。电喷雾正负离子交替模式采集,多反应监测(MRM),外标法定量。20种供试农药的质量浓度与其对应的峰面积之间呈现良好线性关系,相关系数均大于0.9990;20种农药在荔枝基质中的平均回收率为71%～106%,相对标准偏差(RSD)在0.9%～9.8%之间,满足残留分析的要求。该方法简便、高效,可用于荔枝样品中20种农药残留的快速检测。     

水蛭素的HPLC色谱分析条件优化研究

为研究水蛭素的HPLC最佳色谱分析条件,通过对比重组水蛭素的HPLC分析方法的洗脱条件、检测波长、色谱柱的分离效果,拟合水蛭素浓度与峰面积的线性方程,优选最佳水蛭素色谱分析条件。结果显示,ODSC18柱分析最佳条件为：采用梯度洗脱,流动相A和B洗脱程序：0～60 min,B:0%～100%,进样量20μL,柱温35℃,流速为1 mL/min,波长205 nm;TSKgelG2000SW柱最佳分析条件为：流动相磷酸缓冲液(0.02 mol/L,pH 7.0),流速0.5 m L/min,检测波长205 nm,进样量20μL。研究表明,水蛭素浓度与峰面积具有良好的直线线性相关关系,采用TSKgelG2000SW色谱柱的分析效果优于ODSC18柱,可为动物活性多肽的分析提供依据。     

枯草芽胞杆菌信号分子的分离纯化

为了获得较高纯度的B. subtilis分泌的信号分子,采用离子交换层析的方法对其进行分离纯化。本文研究了洗脱液及其pH和流速对分离纯化效果的影响,得到最佳层析条件：离子交换层析洗脱液(B液)为pH 4.0的NaAc + NaCl溶液,平衡液(A液)为pH 4.0的NaAc溶液,洗脱流速为2 mL/min;SDS-PAGE验证表明在5 kDa左右出现单个条带,且抑菌试验结果表明层析液中的B. subtilis信号分子能促进L. paracasei HD1.7产细菌素。     

大孔树脂纯化马尾松花粉总黄酮的工艺研究

以马尾松花粉为材料,筛选对马尾松花粉总黄酮吸附和解吸性能好的大孔树脂,并对大孔树脂纯化马尾松花粉总黄酮的工艺条件进行优化。结果表明,弱极性的DM-130大孔树脂对马尾松花粉总黄酮具有较好的吸附与解吸性能,其吸附率和解吸率分别达到84.24%和93.32%。DM-130大孔树脂纯化马尾松花粉总黄酮的最佳工艺参数为:上样质量浓度0.68 mg/m L,上样流速0.67 m L/min,上样体积为5倍柱床体积,洗脱溶剂为75%乙醇,洗脱流速0.67 m L/min,洗脱剂用量为6倍柱床体积。纯化后马尾松花粉总黄酮的纯度可达到50.4%。     

普通小麦类胡萝卜素组分的超高效液相色谱分离方法

类胡萝卜素是影响小麦面粉及面制品颜色和营养品质的重要因素。本研究以中麦175 (软质麦)和中优206 (硬质麦)的面粉为试验材料,旨在优化小麦类胡萝卜素提取方法,建立超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography, UPLC)测定其组分的技术体系。研究表明,用含0.1% BHT的正己烷∶丙酮(80∶20, v/v)混合液作为提取液,结合恒温振荡法(300转 min^–1, 35℃, 振荡1 h)的提取效果最好。以YMC C30胡萝卜素分析专用色谱柱(高100 mm, 直径4.6 mm, 粒径3 µm)洗脱,乙腈∶甲醇∶水∶三乙胺(81∶14∶5∶0.05, v/v/v/v)为流动相A,甲醇∶乙酸乙酯∶三乙胺(68∶32∶0.05, v/v/v)为流动相B,流速0.4 mL min^–1,柱温35℃,分离时间25 min;以二极管阵列检测器(photodiode array, PDA)在450 nm波长下,能有效检测叶黄素、玉米黄质和β-胡萝卜素3种组分。该技术体系可作为普通小麦类胡萝卜素组分及营养品质研究的有效方法。     

Hybridization barriers between wheat and rye: In vitro pollen assays and electrophoretic survey

Summary Five- to seven-day-old ovaries from Triticum aestivum vars Hope (non-crossable), Chinese Spring (CS, crossable) and the chromosomal substitution line Chinese Spring/Hope 5B (CS/H5B) were used to test the hypothesis that an ovarian substance inhibits rye (Secale cereale var Wrens) pollen tube growth. In vitro assays on a semi-solid medium demonstrated that a soluble, dialyzed lysate from Hope or CS/H5B ovaries inhibited rye pollen tube elongation significantly more than a similar lysate from CS ovaries (26%, 13% and 5% respectively compared to controls). When only the 20 longest tubes from each sample were included in the analysis the relationship was maintained (33%, 22% and 15% for Hope, CS/H5B and CS respectively). Heating the Hope lysate at 100° C for 10 min reduced the inhibition from 26% to 14% for all pollen tubes measured (n = 51 per sample) and from 33% to 20% when only the 20 longest pollen tubes per sample were analyzed. Isoelectric focusing followed by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide electrophoresis (IEF/SDS-PAGE) and non-equilibrium pH gradient electrophoresis (NEPHGE) revealed several differences in the polypeptide profiles of soluble lysates from vars Hope, CS and CS/H5B. While two striking differences were observed, a 50 kilodalton (kD) polypeptide with an isoelectric point (pI) of approximately 8.5 and 100 kD polypeptide (pI4) from CS lysates which were considerably reduced in lysates of Hope and CS/H5B, none were obviously associated with the Hope 5B chromosome and therefore cross-incompatibility.Mention of a trademark or proprietary product is for identification only and does not imply a guarantee or warranty of the product by the U.S. Department of Agriculture.     

大孔树脂纯化襄荷黄酮提取物及其对小鼠运动性疲劳的影响

采用大孔树脂纯化襄荷黄酮提取物,比较树脂之间静态吸附与洗脱性能的差异,确定最佳型号树脂的吸附机理后,采取动态吸附与洗脱试验确定最佳纯化工艺,另通过动物实验考查纯化后的襄荷黄酮抗疲劳活性.结果 表明,AB-8型大孔树脂为纯化襄荷黄酮的最佳树脂,饱和吸附量随上样浓度的升高逐渐增大,但随温度升高而逐渐减小,等温吸附线符合Langmuir模型特征,最佳纯化工艺条件为:60 mL上样浓度为6 mg/mL襄荷黄酮(pH 6.0),上样流速3 mL/min,洗脱流速2 mL/min,洗脱液乙醇浓度60％,洗脱液体积150 mL,产物的黄酮纯度由11.25％提高至47.52％.动物实验结果显示,中、高剂量的纯化产物可明显延长小鼠的负重游泳时间,降低运动后体内乳酸与尿素氮浓度,并提高乳酸脱氢酶的活力,因此可较好地缓解运动性疲劳.     

The combination of curing with either chitosan or Bacillus subtilis CPA-8 to control brown rot infections caused by Monilinia fructicola

Recently, it has been reported that brown rot in peaches and nectarines can be effectively controlled by exposing fruit to 50 °C for 2 h and 95-99% relative humidity (RH). This treatment was effective at reducing infections that had become established in the field. However, it did not provide protection for further Monilinia fructicola infections, indicating that fruit was susceptible to subsequent infections after the treatment process and before cool storage. Chitosan and Bacillus subtilis (strain CPA-8) were evaluated for their ability to prevent M. fructicola infections and for their ability to complement the heat treatment. Two chitosan concentrations (0.5% or 1%) were applied at three temperatures (20, 40 or 50 °C) for 1 min to wounded and unwounded fruit that were artificially inoculated with M. fructicola. One percent chitosan applied at 20 °C had a preventive effect against further M. fructicola infections on heat-treated fruit that had been previously inoculated: brown rot incidence was reduced to 10%, in comparison with the control (73%). However, chitosan applied to wounded fruit had a poor preventive effect. The antagonist, B. subtilis CPA-8, had a preventive effect in controlling M. fructicola infections: the incidence of brown rot was reduced to less than 15% for both varieties evaluated (‘Baby Gold 9’ and ‘Andros’ peaches), in comparison with the control fruit (higher than 98%). In contrast, when fruit were stored at 0 °C, this preventive effect was not detected. These findings indicate that heat-treated fruit can be protected from subsequent fruit infection after heat treatment by use of chitosan or B. subtillis CPA-8, thereby providing packinghouses with an effective biologically based, combined approach to the management of postharvest brown rot.     

白桦叶黄酮超声波提取及纯化工艺研究

以白桦叶为原料,采用超声波法提取其黄酮化合物,以黄酮粗提物得率为指标筛选试验条件,进而进行响应面优化试验;采用NKA-9大孔吸附树脂对白桦叶黄酮粗提物进行纯化优化试验。结果表明:在料液比1∶41(g/g),乙醇质量分数90%,超声时间44 min的工艺条件下进行提取,黄酮得率可达6.12%。NKA-9大孔吸附树脂纯化粗提物的工艺条件为:上样浓度0.8 mg/mL,上样量3 BV,上样速率1.5 mL/min,pH 3,洗脱液乙醇体积分数90%,洗脱液用量2.5 BV。在此工艺条件下所得到的纯化物黄酮含量可达68.5%。     

茶树叶片和胚根原生质体的分离及PEG诱导融合

植物原生质体是细胞培养和体细胞融合等细胞水平研究及植物遗传育种的重要材料。本研究用福鼎大白茶茶树的幼嫩叶片及胚根, 分析了原生质体分离过程中的材料、酶解液组成及酶解时间、纯化方法等影响因子, 建立了最佳原生质体分离体系, 为茶树体细胞杂交等细胞水平的研究提供了高效获取大量高活力原生质体的方法。结果表明, 23°C恒温黑暗或遮光培养的茶树实生苗的5周叶龄以内的幼嫩叶片是茶树原生质体分离的最佳材料, 其次是茶树种子萌发后的幼嫩胚根; 而以茶园健康生长的5周叶龄以内的幼嫩叶片为材料时, 只能获得混有大量细胞碎片的少量具有活力的原生质体。以茶树幼嫩叶片为分离材料的酶解液组成为1.5%纤维素酶+0.1%离析酶+0.5%果胶酶+0.4 mol L^-1甘露醇+20 mmol L^-1 MES; 以茶树幼嫩胚根为分离材料的酶解液组成为1.5%纤维素酶+0.3%离析酶+0.5%果胶酶+0.4 mol L^-1甘露醇+20 mmol L^-1 MES。分离茶树幼嫩叶和幼嫩胚根原生质体时, 宜采用低速(分别为55 r min^-1和50 r min^-1)恒温(23°C)摇床振荡酶解培养, 时间分别为7 h和8 h; 最适宜采用15×g的转速, 离心4 min可纯化获得高产量和活力的原生质体。用40% PEG-6000诱导20 min后可使茶树原生质体融合, 融合率达10%。     

聚酰胺吸附法分离纯化何首乌中二苯乙烯苷的研究

研究何首乌中二苯乙烯苷成分较佳的分离纯化工艺条件。采用层析柱分离法,选用聚酰胺为吸附剂,食用乙醇为洗脱剂,通过单因素试验和多因素正交试验,研究理想的分离工艺。二苯乙烯苷含量检测采用分光光度法。结果显示:二苯乙烯苷理想分离工艺条件为:食用乙醇体积分数为70%,食用乙醇洗脱流速为1.0 mL/min,洗脱柱高为70 cm,静置吸附时间为20 min。食用乙醇体积分数显著影响二苯乙烯苷的分离效果。聚酰胺柱层析可以较好地分离纯化何首乌中二苯乙烯苷成分。