草酸青霉A1菌株的鉴定及对苹果4种镰孢病菌的拮抗作用

从连作条件下的平邑甜茶健康根系分离得到1株内生真菌A1,通过形态学特征、培养特性观察鉴定该菌属于青霉属,将其ITS r DNA序列和β-tubulin序列与Gen Bank中已知标准菌株的ITS r DNA序列和β-tubulin序列进行比对,并利用MEGA5.05软件构建青霉菌A1菌株进化树。结果表明,青霉菌A1与草酸青霉Penicillium oxalicum(KF152942.1,KC344990.1)序列同源性最高,为100%,最终将青霉菌A1鉴定为草酸青霉A1。在马铃薯培养基(PDA)和玉米粉培养基上分别将内生真菌A1与尖孢镰孢菌、串珠镰孢菌、层出镰孢菌和腐皮镰孢菌进行对峙试验,结果在PDA培养基上对菌丝生长抑制率分别为42.0%、74.0%、47.0%和54.5%,拮抗系数达到Ⅱ级或Ⅰ级,在玉米粉培养基上菌丝生长抑制率分别为60.5%、82.2%、68.4%和53.4%,拮抗系数达到Ⅱ级或Ⅰ级,说明草酸青霉A1对4种苹果连作障碍病原镰孢属真菌具有较好的抑制作用。平邑甜茶盆栽试验结果表明,与连作土对照相比,A1菌肥显著促进了连作平邑甜茶幼苗鲜样质量、干样质量的增加,分别增加2.53倍和2.35倍,说明草酸青霉A1菌肥能在一定程度上减轻苹果连作障碍。使用实时荧光定量技术对土壤中的尖孢镰孢菌基因拷贝数进行检测,发现A1菌肥处理的土壤中尖孢镰孢菌的基因拷贝数量大幅下降,说明草酸青霉菌A1可以抑制其生长。A1菌株可作为防控苹果连作障碍的拮抗菌进一步研究。     

根皮苷和串珠镰孢菌加重苹果连作土壤环境及其对平邑甜茶生长的抑制

以平邑甜茶幼苗（Malus hupehensis Rehd.）为试材,在盆栽条件下研究了串珠镰孢菌和根皮苷对幼苗生长及连作土壤微生物的影响,为阐明连作障碍的发生机理提供理论依据。结果表明：8月份串珠镰孢菌、根皮苷、串珠镰孢菌 + 根皮苷处理均不同程度降低了连作条件下‘平邑甜茶’幼苗的生物量,其中串珠镰孢菌 + 根皮苷处理的株高、地径、鲜质量、干质量降低最显著,分别为连作土对照的70.6%、77.4%、52.3%和43.7%;9月份各处理的生长量趋势与8月份一致。在8月和9月,不同处理对幼苗根系呼吸速率的抑制作用表现为：串珠镰孢菌 + 根皮苷 > 串珠镰孢菌 > 根皮苷 > 连作土对照。3个处理均不同程度地抑制了连作土壤中细菌的生长,促进了真菌的生长,改变了土壤真菌的群落结构。3个处理均不同程度地降低了连作土壤中脲酶、中性磷酸酶、蔗糖酶和过氧化氢酶的活性;在8月,根皮苷、串珠镰孢菌、串珠镰孢菌 + 根皮苷处理后对土壤脲酶活性的抑制作用较显著,分别比对照降低14.8%、29.1%和53.4%。综上,串珠镰孢菌和根皮苷单独或组合处理均显著抑制了‘平邑甜茶’幼苗的生长,其中串珠镰孢菌 + 根皮苷处理最为显著,说明根皮苷和串珠镰孢菌共同作用加重了苹果连作障碍现象。     

万寿菊植株粉末熏蒸对苹果连作土壤环境及平邑甜茶生理特性的影响

为探讨万寿菊植物粉末熏蒸防控苹果连作障碍的可行性及其对土壤环境和植株生长的影响,以盆栽平邑甜茶(苹果砧木)幼苗为试材,设置连作土对照、连作土覆膜处理、连作土+0.05%万寿菊植物粉末(与土壤的质量比)+覆膜、连作土+0.2%万寿菊植物粉末+覆膜、连作土+0.5%万寿菊植物粉末+覆膜5个处理,测定了土壤养分含量、土壤酚酸含量、土壤尖孢镰刀菌基因拷贝数、平邑甜茶根系呼吸速率、根系抗氧化酶活性、叶片的光合参数和叶绿素荧光参数等指标。结果表明,连作土壤中添加0.2%万寿菊植物粉末熏蒸可显著提高土壤的养分含量,减少主要酚酸类物质含量,显著减少尖孢镰刀菌基因拷贝数,提高平邑甜茶根系的呼吸速率及抗氧化酶活性,减少MDA含量;能有效缓解因连作障碍引起的叶片净光合速率(P_n)、最大光化学效率(Φ_(P_o))、实际光化学效率(Φ_(PSⅡ))、光化学猝灭系数(qP)、单位面积活性反应中心数量(RC/CS_m)等荧光参数的下降,改变OJIP曲线形状。0.05%和0.5%处理的各指标与对照相比均有改善,但效果不及0.2%浓度处理的。综上,适宜浓度(0.2%)的万寿菊植物粉末熏蒸处理能显著改善土壤环境,增强平邑甜茶幼苗叶片的光合能力,改善能量分配,减轻连作障碍对平邑甜茶幼苗叶片光系统Ⅱ的破坏,促进幼苗生长。     

葱、芥菜和小麦轮作对老龄苹果园土壤环境的影响

在山东省烟台市大沙岭、凤毛寨和湾头村等的25年生老苹果园中,在1年内进行葱、芥菜和小麦轮作,然后收集每个果园连作土壤和轮作后的土壤,并以溴甲烷熏蒸处理的连作土壤为高标对照,在盆栽试验条件下研究各处理土壤对平邑甜茶(苹果砧木)幼苗生长和土壤环境的影响。结果表明:与连作土壤相比,在3种植物轮作以后的土壤中,平邑甜茶幼苗的生物量显著提高,且地下部干、鲜质量可提高1～2倍;根系呼吸速率增长均超过1倍;同时,3个果园的轮作土壤中细菌数量分别增加148.47%、198.57%和165.44%,真菌降低45%左右,使得细菌/真菌比值提高了4倍;土壤酶活性提高,酚酸类物质含量大幅降低,根皮苷含量分别降低86.67%、46.12%和86.31%;此外,尖孢镰孢菌的拷贝数分别降低76.34%、49.22%和70.89%。     

苹果连作土壤加入酒糟可减轻连作障碍

在盆栽条件下,研究了啤酒糟和白酒糟对连作平邑甜茶幼苗生长及其连作土壤中微生物的影响。结果表明,连作土壤添加酒糟可显著提高平邑甜茶幼苗株高、干样质量、鲜样质量等生物量指标。添加酒糟后土壤中细菌、真菌数量与连作土对照相比也有明显提升。通过聚类分析、主成成分分析和多样性分析发现,加入酒糟后土壤中微生物群落结构发生明显变化,且不同酒糟类型和不同酒糟处理方式造成微生物的群落结构不同;由于酒糟自身携带及灭菌酒糟在土壤中滋生的微生物,促使土壤中优势种群的出现,改变了土壤中微生物群落的多样性指数和丰富度指数。对土壤中的层出镰孢菌(Fusarium proliferatum)进行实时荧光定量分析显示,与连作土壤对照中的层出镰孢菌基因拷贝数相比,啤酒糟、白酒糟、灭菌啤酒糟和灭菌白酒糟处理分别降低了39.1%、58.1%、20.9%和39.2%,酒糟灭菌后减弱了对有害菌层出镰孢菌的抑制作用。综上,苹果连作土壤中加入酒糟后,改变了土壤中微生物的群落结构,降低了有害真菌的数量,减轻了苹果连作障碍现象,其中白酒糟效果更好。     

贝莱斯芽孢杆菌XC1的筛选、鉴定及其对苹果连作障碍的影响

从连作苹果园健康苹果树根际土壤中筛选出1株对苹果连作障碍镰孢属病原菌具有较强拮抗作用的细菌XC1,该菌对尖孢镰孢菌的抑菌率最高,达到79.83%。根据其形态、生理生化特征和基于16S rDNA、gyrA基因的系统发育分析,鉴定该菌为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。目前菌株XC1已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为CGMCCNo.20057。苹果连作土盆栽试验表明,XC1菌肥处理能显著促进平邑甜茶(Malus hupehensis Rehd.)幼苗的生长,其株高、地径、鲜质量和干质量分别比对照提高了54.8%、34.8%、121.1%和96.0%;显著提高连作土壤中的蔗糖酶、脲酶、过氧化氢酶和中性磷酸酶的活性,分别为对照的1.57倍、2.71倍、1.21倍和1.79倍;显著减少连作土壤中真菌的数量,提高细菌和放线菌的数量,且对尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)有很好的抑制作用,尖孢镰孢菌的基因拷贝数比对照降低了76.4%。这说明贝莱斯芽孢杆菌抑制连作障碍病原菌的效果明显,可改善土壤环境,促进平邑甜茶幼苗的生长,能在一定程度...     

苦参碱对老龄苹果园土盆栽平邑甜茶和土壤微生物的影响

以老龄苹果园土盆栽的平邑甜茶幼苗为试材,研究向土壤中添加不同量的苦参碱对幼苗生长以及土壤中微生物数量的影响。结果表明,9月时,与对照相比,向土壤中添加0.01%苦参碱处理可明显提高平邑甜茶幼苗株高、地径、干质量和根表面积、根体积以及根呼吸速率,根系SOD、POD和CAT活性也显著提高。经苦参碱处理后,土壤中细菌和真菌数量减少,真菌比细菌降幅更大,细菌/真菌比值增大。其中0.01%苦参碱处理的细菌和真菌分别比对照减少了58.5%和68.3%,细菌/真菌比值比对照增加30.6%,土壤中微生物多样性指数(Shannon index)和丰富度指数(Margalef index)降低显著,腐皮镰孢菌、层出镰孢菌、串珠镰孢菌和尖孢镰孢菌基因拷贝数分别比对照降低了51.2%、43.3%、40.0%和44.5%。综上,0.01%苦参碱处理促进了平邑甜茶幼苗的生长,改善了土壤环境,可有效减轻平邑甜茶的连作障碍。     

西北黄土高原地区苹果连作障碍与土壤真菌群落结构的相关性分析

采用构建真菌克隆文库和T-RFLP相结合的方法,研究了甘肃、陕西和山西省20个地区再植苹果园土壤中的真菌群落结构特征,同时还研究了平邑甜茶幼苗的生长与再植苹果园土壤中优势真菌属的相关性。结果表明,在真菌分类门的水平上,子囊菌门真菌是西北黄土高原地区苹果连作土壤中主要的真菌类型;在属的水平上,镰孢菌属、被孢霉属、毛壳菌属、隐球酵母菌属等是主要优势菌群。从果园地区分布来看,甘肃省的5个地区土壤真菌具有相对较高的多样性指数、均匀度指数、丰富度指数和相对较低的优势度指数。陕西富平,山西平陆,山西盐湖区的苹果连作障碍较严重,镰孢菌的丰度较高。从平邑甜茶幼苗生长受抑制量与土壤中优势真菌属的相关性来看,镰孢菌的丰度与苹果连作障碍的严重程度呈极显著性正相关（r = 0.585,P < 0.01）,而被孢霉属的丰度与其呈显著性负相关（r =–0.473,P < 0.05）。引起西北黄土高原地区苹果连作障碍的主要有害真菌类型是镰孢菌属。     

28种药用植物提取液对6种植物病原真菌抑菌活性的测定

以瓜果腐霉（Pythium aphanidermatum）、辣椒疫霉（Phytophthora capsici）、尖镰孢菌（Fusarium oxysporium）、茄镰孢菌（Fusarium solani）、灰葡萄孢（Botrytis cinerea）、禾谷镰孢菌（Fusarium graminearum）等6种植物病原真菌为供试菌株,采用菌丝生长法对28种药用植物提取液的抑菌活性进行了测定。结果表明：丁香（Eugenia caryophyllata）对6种植物病原真菌的抑制率均达100%,乌梅（Armeniaca mume）、百部（Stemona sessilifolia）和木香（Aucklandia lappa）对5种植物病原真菌的抑制率均在70%以上。采用孢子萌发法对抑菌效果较好的5种药用植物进行进一步研究,结果表明：这5种药用植物对灰葡萄孢孢子萌发抑制率均在90%以上。     

引起板栗内腐病的层出镰孢菌生物学特性研究

本试验主要对引起板栗内腐病的层出镰孢菌（同培养基、碳源、氮源、pH、温度及光照条件对层出镰孢菌菌丝生长的影响，了解其生物学特性，为进一步研究板栗内腐病防控技术奠定基础。结果表明：培养病原菌至第6 d时，板栗栗仁培养基最适宜其菌丝的生长；最适合菌丝生长的碳源是木糖醇，氮源以硝酸钾为最佳；p H为8时最利于菌丝生长；最适宜菌丝生长的温度为25℃；在全光照的条件下可以促进菌丝生长。     

河北蔬菜保护地土壤镰孢菌种群分布研究

研究了河北省蔬菜保护地土壤镰孢菌种群分布情况,分析了棚龄、蔬菜种类、土壤真菌、土壤有机质及速效性化肥对镰孢菌种群分布的影响,鉴定出13种镰孢菌,分别是雪腐镰孢菌(Fusarium nivale)、茄病镰孢菌(Fusarium solani)、水生镰孢菌(Fusarium aquaeductum)、梨孢镰孢菌(Fusarium poae)、拟枝孢镰孢菌(Fusarium sporotrichioides)、弯角镰孢菌(Fusarium camptoceras)、半裸镰孢菌(Fusarium semitectum)、潮湿镰孢菌(Fusarium udum)、串珠镰孢菌(Fusarium moniliforme)、尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)、木贼镰孢菌(Fusarium equiseti)、柔毛镰孢菌(Fusarium flocciferum)和双胞镜孢菌(Fusarium dimerum),其中尖孢镰孢菌(F.axyspsrum)和茄病镰孢菌(F.solani)是优势种;同时表明土壤等因子对镰孢菌种群的分布有着重要的影响,但规律不尽相同;木霉对镰孢菌的生长有着明显的抑制作用.     

棉隆熏蒸加短期轮作葱显著减轻苹果连作障碍

在盆栽条件下,以苹果砧木平邑甜茶幼苗为试材,研究棉隆熏蒸老龄苹果园土壤并轮作一季葱,对土壤微生物环境及平邑甜茶幼苗生长的影响,以期为防控苹果连作障碍提供新技术。2015年5月进行4种试验处理,分别为老龄苹果园土壤对照,老龄苹果园土壤轮作葱,棉隆熏蒸老龄苹果园土壤,棉隆熏蒸老龄苹果园土壤后轮作葱,2016年5月各处理土壤统一定植平邑甜茶幼苗。结果表明：与对照相比,棉隆熏蒸后轮作葱处理的土壤真菌数量减少了73%,层出镰孢菌的基因拷贝数减少67%,细菌数减少19%,细菌/真菌比值增加了213%。T-RFLP图谱的主成分分析（PCA）、聚类分析结果显示,棉隆熏蒸后轮作葱明显改变了土壤真菌群落结构,且比单纯棉隆熏蒸处理提高了土壤脲酶、蔗糖酶、中性磷酸酶、过氧化氢酶活性。棉隆熏蒸后轮作葱处理,平邑甜茶株高、茎粗、鲜质量和干质量分别为连作土对照的1.96倍、1.75倍、2.31倍和2.34倍,根长、根面积、根体积和根呼吸速率较连作土对照分别提高了155%、310%、294%和89%。可见,棉隆熏蒸后轮作葱处理,具有最高的细菌/真菌比值,并显著改变了土壤真菌群落结构,提高了土壤酶活性,促进了平邑甜茶幼苗的生长,防控连作障碍的效果优于单纯棉隆熏蒸,是减轻苹果连作障碍的有效措施。     

ZJUF0028乳油防治黄瓜苗期病害试验

黄瓜连作引起苗期病害猖獗,致使产量大幅度降低,成为导致连作障碍的直接原因。由瓜果腐霉、立枯丝核菌和尖镰孢菌引起的猝倒病、立枯病和枯萎病是黄瓜的主要苗期病害。培育无病健壮的幼苗是获得蔬菜丰收的基础,而防治苗期病害是培育壮苗的关键措施。选用抗病品种、种子处理、选用无病床土、加强苗畦管理及药剂防治是苗期病害防治的主要措施,目前苗床土壤消毒常用绿亨一号。ZJUF0028是浙江大学生物技术研究所从植物内生真菌中筛选出的一种抗生素类杀菌剂,平皿生物测定表明,该杀菌剂对灰霉病菌、猝倒病菌、纹枯病菌和菌核病菌等植物病原真菌具有很好的抗菌活性,本试验测定了其对黄瓜苗期病害的田间药效。     

生石灰与过磷酸钙混施对连作土壤的改良效果及平邑甜茶幼苗生长的影响

在盆栽条件下,研究了施用生石灰、生石灰与过磷酸钙混施、草木灰对连作土壤的改良效果和对平邑甜茶幼苗生长的影响。结果表明,生石灰与过磷酸钙混施或单独施用适宜浓度的生石灰以及草木灰,均对连作土壤有改良效果,幵促迚了平邑甜茶幼苗生长。兵中,以1 g/kg生石灰与1 g/kg过磷酸钙混施效果最好,连作土壤p H值提高,土壤中细菌与真菌数量的比值增加最高,是对照的15.45倍,兵中细菌数量升高了291.3%,真菌数量降低了74.0%,腐皮镰孢菌和尖孢镰孢菌拷贝数均有所降低;土壤酶活性均有提高,脲酶、蔗糖酶、磷酸酶、过氧化氢酶活性分别是连作对照的2.14、1.71、1.55、1.41倍。平邑甜茶幼苗的株高、地径、地上部与地下部的鲜重和干重较对照分别提升了49.9%、80.4%、83.9%、153.8%、114.4%、221.2%,地下部根长度、根表面积、根体积及根尖数较连作对照分别提高了204.4%、254.2%、354.8%和133.6%,根系呼吸速率为连作对照的1.35倍。单独施入1 g/kg生石灰或2 g/kg草木灰效果也较好,但生石灰浓度过高不利于植株生长。     

拮抗细菌BMY-1菌株对几种水果储藏病原真菌的抑制作用

采用平板对峙培养法测定从土壤中分离获得的拮抗细菌BMY-1菌株对柑桔绿霉病菌（Penicillium digatatum）、柑桔青霉病菌（Penicillium italicum）、苹果炭疽病菌（Glomerella cingulata）、苹果轮纹病菌（Physalospora piricola）、梨扩展青霉病菌（Penicillium expansum）、葡萄白腐病菌（Coniothyrium dlodiella）等6种水果产后病原真菌的抑制作用。结果表明，BMY-1菌株对苹果炭疽病菌（G.cingulata）和梨扩展青霉菌（P．expansum）的生长有较好的作用，抑菌率分别达48．43％和50．37％。采用液体共培养法观察到BMY-1菌株对病原真菌的菌丝有破坏作用，使苹果炭疽病菌菌丝扭曲和断裂，葡萄白腐病菌菌丝膨大畸形。对几种水果同时接种拮抗细菌BMY-1和病原真菌，BMY-1菌株对苹果炭疽病病斑和梨扩青病病斑扩展有较强的抑制作用，并能有效延迟葡萄白腐病发病时间。     

设施韭菜根腐病致病镰孢菌鉴定及生物学特性研究

韭菜根腐病是设施连作多年生韭菜的重要病害之一.为明确辽宁省设施韭菜根腐病的病原菌种类,从韭菜感病根系分离纯化获得45株镰孢菌,结合形态学特征及EF-1a、Histone3、IGS基因片段序列分析结果,鉴定为尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)、层出镰孢菌(F.proliferatum)和腐皮镰孢菌(F.s...     

中草药提取物对果蔬病原真菌的抑制作用

采用菌丝生长速率法测定了19种中草药乙醇提取物对5种果蔬病原真菌的抑制活性.结果表明:在提取物浓度为0.1 mg/mL时,豨莶草对草莓软腐病菌、葛根和鸦胆子对苹果褐腐病菌有抑制作用,抑制率均在20%左右.射干对苹果轮纹病菌和苹果褐腐病菌的抑制率分别为21.47%和21.9%,EC50(有效中浓度)值分别为0.7928、0.9107 mg/mL.马兜铃对番茄灰霉病菌和苹果褐腐病菌的抑制率分别为28.39%和49.64%,EC50值仅为0.3732和0.1256 mg/mL.综合分析认为,马兜铃值得进一步研究开发.     

4种杀菌剂对连作苹果园土壤镰刀菌及土壤酶活性的影响

【目的】老果园栽植新树苗时遇到幼苗生长不良等连作问题越来越突出,因此对苹果连作障碍的研究尤为必要。本试验旨在筛选出高效、低毒的化学杀菌剂,通过药剂混土的方式缓解果树连作障碍问题。【方法】通过田间试验,研究了多菌灵、福美双、咯菌腈、代森锰锌连作树穴(连作土)用药量分别为10 g a.i/10 kg土、10 g a.i/10 kg土、2.5 g a.i/10 kg土和10 g a.i/10 kg土,行间树穴(非连作土)用药量分别为5 g a.i/10 kg土、5 g a.i/10 kg土、2.5 g a.i/10 kg土和5 g a.i/10 kg土对苹果连作土壤镰刀菌及土壤酶活性的动态影响。【结果】四种杀菌剂对土壤镰刀菌毒力测定结果表明,咯菌腈对连作土壤串珠镰刀菌的控制效果最好,EC50仅为0.356 mg·L-1。对连作土壤镰刀菌抑制率最高达80.17%,对行间土壤镰刀菌抑制率最高达86.48%;苹果幼树生长测定结果表明:代森锰锌对幼树生长的促进作用最为明显,与其他处理差异显著。连作树穴幼树枝条数、茎粗度、叶片数、新梢长、叶面积分别增加了2条、0.20 cm、10.84枚、27.54 cm、9.84cm2,行间树穴幼树分别增加了1.92条、0.16 cm、14.26枚、22.19 cm、5.55 cm2;对土壤酶活性测定结果表明,不同药剂对不同土壤酶影响不同,咯菌腈对过氧化氢酶激活作用最强,多菌灵对蔗糖酶的激活作用最强,福美双对中性磷酸酶的激活作用最强,多菌灵对脲酶激活作用最强。各土壤酶活性在8月份以后普遍降低,药剂对土壤酶激活作用消失。【结论】杀菌剂可以有效抑制土壤镰刀菌的生长,减轻苹果连作障碍问题。     

越橘镰孢果腐病菌的生物学特性测定及防治药剂初步筛选

对新发现的越橘镰孢果腐病菌(Fusarium acuminatum)的生物学特性及药剂防治进行了研究。结果表明:病菌菌丝生长最适培养基为PSA培养基,产孢最适培养基为OA培养基,菌丝生长最适温度为20℃,产孢最适温度为21℃;菌丝生长和产孢的最佳碳源分别为麦芽糖和羧甲基纤维素钠,最佳氮源分别为酵母粉和尿素;pH 5~6适宜菌丝生长,pH 6产孢最佳;全黑暗条件有利于菌丝生长,但全光照有利于产孢;菌丝致死温度为51℃(10 min),分生孢子致死温度为67℃(10 min)。病菌生长因素正交试验结果表明温度对病菌生长的影响最大。采用生长速率法测定了病菌对21种杀菌剂的敏感性,结果表明:病菌对多粘类芽孢杆菌、蜡质芽孢杆菌、咯菌腈、丙环·嘧菌酯和枯草芽孢杆菌的敏感性较高,其EC500.5000 mg·L~(-1)。防效试验结果表明,咯菌腈和多粘类芽孢杆菌处理越橘镰孢菌果腐病的发病率和病斑直径均明显小于对照,防效较好,能有效控制该病害的发生。     

红壤山地西瓜枯萎病的发生与防治

1、病源及症状 西瓜枯萎病病原菌属真菌中的西瓜尖镰孢菌,专化型病菌,主要以菌丝厚垣孢子和菌核在土壤与带菌的肥料中越冬,成为第二年发病的初侵染来源。