柑橘黄龙病菌在寄主体内含量动态变化研究

【目的】探索柑橘黄龙病流行规律,可以为果园柑橘管理提供指导,对延长柑橘黄龙病树的经济寿命具有重要意义。【方法】利用TaqMan qPCR荧光定量检测技术,从2017年8月至2018年10月监测江西赣州柑橘果园中黄龙病病原物的时间动态变化,结合气候数据分析柑橘黄龙病病原物与气候之间的相关性。【结果】柑橘黄龙病亚洲种含量年动态变化中,2017年8—11月和2018年5—7月有2个高峰,2018年4—5月和2018年7—8月会有2个低谷,整体呈现树冠北面枝条病菌含量高于南面,且症状严重程度与病菌含量呈反比。气候数据分析柑橘黄龙病菌含量与月下雨天数和月平均最高气温无相关性。【结论】果园中柑橘黄龙病亚洲种含量变化呈现一定规律消涨趋势,与以往的研究结果有相同之处,在10月存在高峰;柑橘体内亚洲种含量变化与温度和下雨天数这2个气候因子无相关性。     

江西省吉水县柑桔黄龙病菌检测

为了确切诊断江西省吉安市吉水县近年出现的疑似柑桔黄龙病,2019年12月从该县6个柑桔园中共采集12份(株)叶片样品,采用PCR和序列测定技术对叶样进行黄龙病菌检测.结果,从6份样品中检测到柑桔黄龙病菌亚洲种,即亚洲韧皮部杆菌(CandidatusLiberibacter asiati-cus,CLas).表明吉水县已...     

柑橘黄龙病菌亚洲种、虫媒及植物寄主互作研究进展

柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)病原入侵寄主植物后不仅会对其代谢、激素调节、防卫反应等方面产生影响,同时,木虱获菌后,其发育、倾向性及内共生菌种群也会发生改变,病原还能通过改变寄主植物的挥发性信息物质等间接调控媒介昆虫行为。对黄龙病菌亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas)、虫媒及植物寄主互作相关研究进行综述,并对今后相关研究进行了展望,以期对柑橘黄龙病研究有所促进。     

柑桔黄龙病菌在年桔病树枝条和果实桔络内的分布规律

本研究以感染黄龙病的年桔枝条(组)和果实为材料,通过定量Real-time PCR分析黄龙病菌(“Candidatus Liberibacter asiaticus”,CLas)在染病年桔枝条(组)及果实桔络中的分布规律。结果表明,在同一染病枝条(组)中CLas呈不均匀分布,只有果实组织(果蒂、果实中心柱和桔络)能稳定检测到CLas,且果实桔络部位的CLas浓度最高,显著高于其他部位组织(当年生叶中脉、当年生枝韧皮部、2年生及以上枝韧皮部)的CLas浓度。CLas在同一条桔络中的分布亦不均匀,其中,中端片段的CLas含量显著高于前端片段和后端片段(每条桔络从果蒂端起长1.5 cm的片段记为“前端片段”,此后每1.5 cm长的片段依次记为“中端片段”“中后端片段”“后端片段”),前端片段和后端片段的CLas含量差异不显著。研究结果可为进一步探究CLas在柑桔植株中的转运与增殖规律提供参考。     

柑橘黄龙病菌原噬菌体的遗传多样性分析

以采自广东、广西、海南、云南、四川、贵州等6个地区共300份感染柑橘黄龙病菌的DNA样本作为试验材料,通过PCR技术对黄龙病菌携带的3种类型原噬菌体基因进行特异扩增、测序,利用相关生物信息学软件进行遗传多样性分析。结果共鉴定出8种原噬菌体组合;携带单一原噬菌体类型的黄龙病菌株为6个地理种群的优势菌株,占比53.3%,其中以Type 2型为主;3类原噬菌体基因位点中A+T含量均高于G+C,表现出AT偏好特点;重组分析结果显示黄龙病菌间无重组信号,表明未发生重组事件;基因流N_m值均大于1,说明黄龙病菌在各种群中基因交流频繁;中性检验结果显示Tajima’s D、Fu and Li’s D、Fu and Li’s F值均小于0,表明黄龙病菌种群存在过历史扩张。     

柑橘黄龙病防治的几项关键技术

柑橘黄龙病是由韧皮部杆菌引起的病害,迄今为止没有很好的防治药剂,是一种毁灭性病害。赣南是柑橘黄龙病区,也是柑橘木虱分布区,因此防治好柑橘黄龙病对赣南脐橙的发展具有重要意义。笔者所工作的柑橘园位于江西省全南县南泾镇,面积80hm2,     

高质量提取柑橘样品中病原总核酸方法的建立

针对柑橘老熟组织中富含多糖、多酚、色素和其它次生代谢产物的特点,以柑橘老叶老皮为试材,在传统CTAB提取法的基础上通过添加增效剂并优化配方,建立了一种快速、简便的提取植物老熟组织及其内部病原总核酸的CTAB-Triton提取法。新的提取液对细胞的裂解能力更强,且解决了传统CTAB溶液因低温析出而致DNA得率损失的弊端。比较了该法和微量葡聚糖柱纯化法制备模板时韧皮部杆菌的检出率,并用该法制备模板,分析了韧皮部杆菌在柚子叶片中的分布情况,及对其它几种柑橘病原菌进行PCR/RT-PCR检测。结果表明,CTAB-Triton方法能有效提取柑橘老熟叶片的DNA,所得DNA质量高,产量比商品化试剂盒大,提高了韧皮部杆菌的检出率,且可用于柑橘其他病原真菌、细菌,以及DNA或RNA病毒病害的PCR/RT-PCR检测,也可用于定量PCR检测和病原种群多态性分析。     

中国柑橘黄龙病菌16S rDNA序列研究

 运用PCR技术对来自中国7省区不同寄主上的黄龙病菌16S rDNA基因区进行了PCR-RFLP-SSCP分析, 采用3种限制性内切酶进行单酶切、双酶切及三酶切反应,对酶切产物进行了单链构象多态性（SSCP）分析,结果表明来自7省区不同寄主上9个黄龙病病菌分离物的16S rDNA无可见变异;同时对9个代表性的分离物16S rDNA进行了克隆测序,序列多重比对结果与PCR-RFLP-SSCP一致,从而在分子水平上证明了中国柑橘黄龙病病菌的16S rDNA序列高度保守, 在不同的地域、寄主内没有发现分子变异,为进一步研究柑橘黄龙病菌系统进化奠定了基础。     

柑橘黄龙病菌双重实时荧光PCR检测方法的建立

建立基于双重荧光定量PCR检测柑橘黄龙病菌(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas)的方法,并对其准确性进行验证。通过受试者工作特征(ROC)曲线、净重分类改善指数(NRI)和综合判别改善指数(IDI)分析7对CLas实时荧光PCR引物及其联合检测的准确性,评价RNRf/RNRr联合CLas-4G/HLBr的双重实时荧光PCR对CLas的检测价值。ROC曲线分析结果显示,表现最好的引物是RNRf/RNRr,其曲线下面积(AUC)为0.971,高于其他6对引物;其次是CLas-4G/HLBr引物,AUC为0.966;在双引物联合检测中,RNRf/RNRr+CLas-4G/HLBr引物串联检测、CQULA04F/CQULA04R+RNRf/RNRr引物并联检测的相关性能指标较优,AUC分别为0.963和0.966,并且RNRf/RNRr+CLas-4G/HLBr引物串联检测同时具备较高的敏感性(85.19%)和特异性(99.25%)。NRI分析结果表明RNRf/RNRr+CLas-4G/HLBr串联检测的诊断能力相较于LJ900f/LJ900r的单一引...     

花粉传播黄龙病可能性研究

为明确柑橘黄龙病能否通过授粉途径进行传播,研究采集了黄龙病发病沙田柚的花粉,将其授到6株健康温州蜜柑树的花上,定期观察被授粉树症状,并通过实时荧光定量PCR方法检测是否感染黄龙病菌.结果表明,授粉后30 d、60 d、90 d和180 d,被授粉树均生长正常,未出现黄龙病症状,也未从授粉树上检测出黄龙病菌.说明花粉传播...     

柑橘响应黄龙病菌侵染的NAC基因的克隆及表达分析

挖掘柑橘抗黄龙病（Huanglongbing,HLB）基因是抗病育种的基础和关键。以感染黄龙病菌亚洲种Candidatus Liberibacter asiaticus(CLas)早期（2个月）锦橙根和叶片中脉比较转录组数据为基础,筛选到9个响应柑橘黄龙病侵染诱导的NAC基因,从中选3个差异表达水平较高的基因克隆,分别命名为Cs NAC21/22、Cs NAC68和Cs NAC78。生物信息分析表明3个基因均符合NAC基因家族的特征;烟草亚细胞定位结果表明,Cs NAC68定位在细胞核,Cs NAC21/22和Cs NAC78定位在细胞核和细胞质。实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分析表明,3个候选基因在易感HLB的锦橙、耐病的马蜂柑和高耐病的九里香的组织和病原菌诱导表达特征呈现明显差异。以健康植株为对照,Cs NAC68和Cs NAC78主要在锦橙的根中响应CLas感染,显著上调表达,Cs NAC68在九里香叶肉和马蜂柑根中响应CLas感染,显著上调表达;Cs NAC21/22主要在锦橙根和马蜂柑叶肉中显著下调表达。以‘锦橙’叶片为试材通过q RT-PCR分析候选基因响应SA、J...     

柑桔黄龙病菌浓度对琼中绿橙果实品质的影响

为了定量衡量黄龙病菌量对琼中绿橙果实品质的影响,在海南省琼中县一个感染了柑桔黄龙病的琼中绿橙果园中采摘果实为试验材料,用实时荧光定量PCR相对定量的方法测定果实中心柱中柑桔黄龙病菌浓度,同时对果实品质的8个外在指标(果实纵经、横径、果形指数、单果质量、果皮率、残渣率、种子数量、种子质量)和5个内在指标(果汁率、可食率、...     

柑桔黄龙病菌在贡柑叶片中的分布分析

2017年11月在广东省仁化县4个感染柑桔黄龙病的贡柑园中采叶片样品,进行常规PCR和实时荧光定量PCR检测,从不同病症叶片、典型症状叶片不同部位、初期感病树不同部位(正常和显症)叶片等3个方面分析了贡柑叶片中黄龙病菌"Candidatus Liberibacter asiaticus"(CLas)的分布情况。结果表明,叶片斑驳黄化症和均匀黄化症是与黄龙病最相关的症状,CLas含量很高;缺锌黄化症,具有黄龙病阳性与阴性两类样品;无明显黄化但呈革质化的叶片,CLas含量高。在斑驳黄化与均匀黄化叶片中,CLas的含量从叶尖到叶柄、从叶片到主叶脉呈现递增趋势,即以主叶脉与叶柄的含量更高。初期感病树未显症的部位也会检出黄龙病菌。     

柑橘响应黄龙病侵染的韧皮部蛋白2基因CsPP2B15的克隆与表达分析

黄龙病病原菌诱导柑橘筛孔胼胝体过度积累是其致病的一个重要因素。柑橘韧皮部蛋白（Phloem Protein,PP）在筛孔胼胝体积累中起着重要作用。为研究柑橘韧皮部蛋白响应黄龙病亚洲种（Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas）侵染的功能,克隆获得了一个响应黄龙病侵染差异表达的PP基因CsPP2B15的编码区和长1.5 kb的启动子序列,并以高感品种锦橙和耐病品种酸柚老叶和嫩叶为材料,进行基因表达分析。结果发现,CsPP2B15在高感品种锦橙嫩叶中受CLas诱导显著上调表达,而在耐病品种酸柚嫩叶中受CLas诱导显著下调表达,且在叶肉中的表达量显著高于叶脉。嫩叶和嫩梢被认为是柑橘响应黄龙病侵染的早期原初侵染部位。因此,CsPP2B15可能在CLas侵染柑橘早期中起重要作用。CsPP2B15启动子的顺式作用元件预测分析发现,CsPP2B15启动子含有许多与逆境和激素有关的顺式作用元件。进一步构建了CsPP2B15启动子控制GUS报告基因的植物表达载体,转化枳[Poncirus trifoliata（L.）Raf.]上胚轴。GUS组织化学染色和GUS酶活性测定均表明,CsPP2B15启动子具有较强的韧皮部组织特异性。     

柑橘黄龙病研究进展

 柑橘黄龙病是柑橘生产中重大病害,其病原菌能够侵染几乎所有的柑橘及其近缘属植物,但目前尚无该病的有效防治方法。随着其在全球范围内的传播,该病已是近年来柑橘生产和研究受到普遍关注的热点。本文试图就近年来围绕柑橘黄龙病病原及其对宿主柑橘的影响、黄龙病的防治以及柑橘抗病育种等方面的最新研究进展作一概述。     

广西综合防控柑橘黄龙病之体制机制探讨

柑橘是广西栽培面积最大,果品产量最多,社会消费面最广的水果之一.柑橘黄龙病是影响和制约广西柑橘产业发展的第一大毁灭性病害,广西许多柑橘产区果园因受柑橘黄龙病危害而毁于一旦.因此,如何有效防控好柑橘黄龙病的爆发危害,是广西柑橘产业发展急需研究解决的重要课题.总结分析广西综合防控柑橘黄龙病的成功经验和失败教训,可以说有效防控柑橘黄龙病的爆发危害不缺成熟的技术、成功的经验以及失败的教训,而是缺柑橘果园在不同经营体制下,落实综合防控柑橘黄龙病技术措施的有效机制.研究和探讨不同类型柑橘果园在不同经营体制下有效落实综合防控柑橘黄龙病技术措施的机制,对指导柑橘黄龙病的综合防控工作有着十分重要且积极的指导意义.笔者根据从事综合防控柑橘黄龙病近30年的实践经验和体会,对柑橘黄龙病爆发危害的原因进行了较为系统的总结分析,对几种不同类型果园在不同经营体制条件下,建立有效落实综合防控柑橘黄龙病技术措施的机制进行了较为全面地研究探讨,得出了建立有效防控柑橘黄龙病之体制机制的几点初步结论.     

柑橘中黄龙病菌效应子SDE70的表达特征及寄主互作蛋白解析

柑橘黄龙病菌主要致病种亚洲种(‘Candidatus Liberibacter asiaticus’,Las)具有完整的Sec依赖型分泌系统,可分泌致病因子(效应子)作用于寄主靶标蛋白或基因,调控寄主的抗(感)病反应。为了研究黄龙病菌Sec依赖型效应子在柑橘中的致病机理及其寄主靶标基因,本研究中从感病‘锦橙’中克隆了Las病原菌Sec依赖型效应子基因SDE70(CLIBASIA₀2470)。生物信息分析显示,SDE70蛋白全长132个氨基酸,N端20个氨基酸为典型信号肽。大肠杆菌碱性磷酸酶活性分析显示,该信号肽具有胞外分泌功能。亚细胞定位显示,SDE70::GFP融合蛋白在洋葱细胞质和细胞核中积累。定量PCR分析发现,耐黄龙病酸柚显症叶脉中SDE70表达量显著低于未显症叶脉,相反,易感黄龙病‘锦橙’显症叶脉中表达显著高于未显症叶脉;‘锦橙’根中SDE70表达量显著高于叶脉,而幼叶叶脉中显著低于老叶。SDE70在不同品种不同症状发育时期以及不同组织中表达差异显著。利用酵母双杂交试验筛选获得26个与SDE70互作的柑橘蛋白。GO富集分析表明,42.3%的蛋白质与细胞内...     

资源县柑橘黄龙病发生情况与综合防治

调查广西资源县柑橘黄龙病发生情况和为害程度,介绍广西资源县采取的主要防控措施和效果。     

柑橘果实柠檬酸代谢研究进展

柑橘果实中柠檬酸含量是决定果实品质好坏的重要因素之一.综述柑橘成熟果实中有机酸的种类、柑橘果实发育过程中柠檬酸的代谢、调控、相关酶及柠檬酸代谢的分子生物学研究等内容;详细介绍柠檬酸的代谢途径及相关酶活性的变化,并提出今后的研究方向、思路和需要解决的问题.     

柑橘感染黄龙病后的变化综述

柑橘属芸香科植物,是世界上第一大水果,我国南方最重要的果树之一[1]。2017年全国柑橘种植面积2.53×10^6hm^2,产量3816×10^4t,近年来柑橘黄龙病给柑橘产业带来了严重打击,柑橘感染黄龙病之后除了挖除烧毁几乎没有方法可以根除。