蛋白桑叶片再生体系的建立及对草丁膦敏感性测定

以蛋白桑的幼嫩叶片为外植体,以MS为基本培养基,采用正交实验设计,研究不同浓度的植物生长调节剂对蛋白桑植株再生的影响。结果表明:叶片诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+TDZ 1.0mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1);最佳分化培养基为MS+TDZ 0.2mg·L~(-1)+NAA 0.09mg·L~(-1),分化率为21.65%;培养基1/2MS+PVP 0.2g·L~(-1)+NAA 0.5mg·L~(-1)生根率最高,达到66.70%;对草丁膦的敏感性试验中,草丁膦浓度0.04mg·L~(-1)为蛋白桑叶片半致死浓度,草丁膦浓度0.05mg·L~(-1)对蛋白桑叶片的致死率为75.00%,草丁膦浓度0.07mg·L~(-1)的致死率为100.00%。     

马齿苋植物的无性系及其植株再生体系

试验研究了影响马齿苋组织培养的3大因素（外植体种类、激素种类和浓度、光照条件）所导致的生物学效应。研究结果表明，在马齿苋愈伤组织的诱导过程中，以幼嫩茎段为外植体比以幼嫩叶片为外植体可以获得更好的诱导效果，由前者所诱导的愈伤组织表现出更快的生长速度。当以马齿苋叶片为材料，以C1培养基或C5培养基进行培养时，其愈伤组织的诱导率均可以达到100%。光照条件对于愈伤组织的生长速度有一定的影响，在光照条件下培养，愈伤组织生长速度比较快，其颜色为淡绿色；在黑暗培养条件下培养，愈伤组织生长速度缓慢，其颜色为淡黄色。根据两种激素（6-BA和NAA）的不同含量，配制9种分化培养基（D1～D9）。试验结果表明，愈伤组织在D，分化培养基（MS＋6-BA4．0mg／L＋NAA0．2mg／L）上的分化效果最好，其幼芽的分化率达到87．5%。含有不同激素的培养基对于诱导马齿苋再生芽产生不定根有明显的影响。在培养基中加入IBA，则对诱导马齿苋生根有明显的促进作用。根据这些初步的研究结果，建立了一套简便易行的高效的马齿苋无性系诱导体系和植株再生体系。     

黄瓜再生体系和除草剂抗性筛选体系的建立

试验以黄瓜自交系C-8子叶节为材料,比较了不同浓度的6-BA和IAA组合对其不定芽诱导的影响,建立了高效快速的再生体系;摸索了不同浓度的草铵膦对产生不定芽的影响,建立了C-8的草铵膦抗性筛选体系,为下一步的遗传转化打下基础。结果表明,最佳的诱芽培养基为MS+0.5mg·L-16-BA+2mg·L-1IAA,出芽率为77.5%,生根培养基为1/2MS。对于C-8黄瓜,草铵膦的最佳遗传转化筛选浓度为0.6mg·L-1。     

橡胶草高频再生体系的建立

以橡胶草叶片为外植体,研究了消毒时间、外源激素等因素对外植体成活率、不定芽的诱导、伸长和生根的影响。结果表明:用0.1%的升汞处理7min为最佳消毒方法,最佳的再生培养基为MS+1.5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA,平均诱导率为97.3%,芽伸长培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+0.02mg/L NAA+0.4mg/L GA3,生根培养基为1/2MS+0.2mg/L NAA,生根率为100%,所获得的组培苗生长健壮且移栽成活率高,最终摸索出了橡胶草最佳的再生体系。     

甜叶菊叶片高频再生体系的建立

以“守田3号”甜叶菊叶片为外植体,研究了消毒时间、外源激素等因素对外植体成活率、不定芽的诱导、不定芽继代培养和生根的影响.结果表明:用0.1％的升汞处理3 min为最佳消毒方法,最佳的不定芽诱导培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA-1.0 mg/L IAA+300 mg/L水解酪蛋白,平均诱导率为80％;最佳不定芽继代培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA+0.2 mg/L GA3 +4.0 mg/L KT;最佳生根培养基为1/2MS+0.2 mg/L IAA,生根率为100％,所获得的再生苗生长健壮且移栽后成活率高,最终建立了甜叶菊最佳的再生体系.     

沉水植物菹草组织培养体系的建立

以菹草的茎为外植体材料,探讨了不同采摘季节及灭菌方式对外植体分化的影响,不同培养基类型对增殖培养的影响,不同激素组合对增殖培养及生根培养的影响。结果表明:菹草采摘的最佳季节为每年3月底至4月初,此时菹草的发芽率高且长出的腋芽强壮,褐化率低;外植体最佳的灭菌方式为3%H2O2(30 min)+无菌水冲洗3次+5%乙醇+1.0%NaClO(15~20 min);液体培养基比固体培养基更有利于菹草的增殖培养,最佳组合为:MS+蔗糖3%+6-BA1.0 mg/L+GA31.0 mg/L;生根培养的最适培养基为:母液Ⅰ25%+IBA 2.0 mg/L+蔗糖2%。     

苜蓿高频再生体系的建立

以10个品种苜蓿无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,研究了不同培养基、不同激素种类和配比对愈伤组织诱导率及分化率的影响。结果表明:国产苜蓿下胚轴外植体愈伤组织分化率最高;愈伤组织诱导最适培养基为MS盐+UM维生素+2mg/L 2,4-D+0.25mg/L KT+2g/L水解酪蛋白+6g/L琼脂+30g/L蔗糖;愈伤组织最适分化培养基为MS+0.5mg/L KT+0.1mg/L NAA;最适生根培养基为1/2MS。     

草地早熟禾高频再生体系建立

研究了草地早熟禾愈伤组织的诱导和分化的最适培养基,建立了早熟禾高频率的再生体系.结果表明:品种优异的胚性愈伤诱导率最高,其中含2.0 mg/L 2,4-D和0.2 mg/L6-BA的培养基处理胚性愈伤组织的诱导频率最大,可以达到65.26%.早熟禾品种肯塔基、午夜、优异与新哥莱德最适分化激素浓度与配比分别为6-BA 1.0 KT 0.2、6-BA 2.0 2,4-D 0.1、6-BA1.0 2,4-D 0.2、KT 2.0,愈伤组织分化率分别达到27.93%、52.38%、66.67%和60%.早熟禾再生芽在1/2 MS 0.2 NAA培养基上生根率可达到100%.     

甘蔗近缘属斑茅组织培养高频再生体系的建立

以甘蔗近缘属植物斑茅的幼嫩叶片为材料,研究MS、SH、B5三种基本培养基和不同激素（2,4-D、NAA、6-BA）配比对斑茅愈伤组织诱导及继代培养的影响,并筛选出斑茅细胞高频再生体系的最优培养基配方。研究结果表明,斑茅幼嫩叶片愈伤组织诱导培养基以MS＋2,4-D 3.0 mg/L＋6-BA 0.4 mg/L为最适,愈伤组织继代培养基以MS＋2,4-D 3.0 mg/L为最适。在此条件下诱导的愈伤组织质地疏松,具有较强的分化能力。目的是建立斑茅组织培养的高频再生体系,为斑茅材料的细胞悬浮培养、染色体加倍和细胞融合等研究提供一定参考。     

丽格海棠高效再生体系的建立及对抗生素敏感性研究

以丽格海棠叶片和叶柄为外植体,通过离体培养分化成苗以及对卡那霉素和头孢霉素的敏感性实验,建立了农杆菌介导的稳定、高效的基因转化受体系统.结果表明:丽格海棠的最适生芽培养基为MS 6-BA0.5 rag/L NAA0.05 mg/L KT0.1 mg/L,不定芽的最适生根培养基为1/2MS IBA0.2 mg/L NAA0.15mg/L;75 mg/L卡那霉素可以完全抑制叶柄的生芽,100 mg/L卡那霉素可以完全抑制叶片的生芽,75 mg/L卡那霉素完全抑制不定芽的生根,头孢霉素浓度小于等于250 mg/L时对生芽和生根的影响不大.     

西瓜高效再生体系的建立

以优质小果型西瓜品种西173和小麒麟为材料,系统研究了以子叶为外植体的西瓜组培高效再生体系。结果表明:2个西瓜品种在不定芽和愈伤组织诱导上存在着较大差异,在MS+6-BA1.0mg·L-1+IBA0.5mg·L-1的分化培养基上,西173不定芽诱导率最高达到92.6%,在MS+6-BA2.0mg·L-1+IAA0.2mg·L-1培养基上小麒麟不定芽诱导率最高达到89.7%;诱导出的不定芽丛伸长以MS+KT0.2mg·L-1培养基最佳;2个西瓜品种不定芽在MS+IBA0.2mg·L-1培养基上均获得了较好的生根效果。组培苗移栽后保持高温、高湿是移栽成活的重要条件。西瓜高效再生体系的建立为应用基因工程技术改良西瓜品质和提高其抗逆、抗病性奠定了基础。     

紫花苜蓿组织培养高频再生体系的建立

以紫花苜蓿品种“甘农1号”的子叶为外植体,研究了不同培养基和不同浓度激素对紫花苜蓿愈伤组织诱导、分化及生根的影响.结果表明:最佳愈伤组织诱导培养基为NSH+2,4-二氯苯氧基(2,4-D)4 mg/L+6-苄氨基嘌呤(6-BA)0.4 mg/L+3％蔗糖+0.7％琼脂;最佳诱导愈伤组织分化培养基为MS+2％蔗糖+0.7％琼脂;最佳诱导无根苗生根培养基为1/2MS+萘乙酸(NAA)0.2 mg/L+1％蔗糖+0.7％琼脂;再生植株适宜的移栽基质为营养土∶草炭∶蛭石=1∶2∶1.该研究建立了一个紫花苜蓿稳定的高频再生体系,为其作为转基因受体奠定了基础.     

薄皮甜瓜高效再生体系的建立

对"G24"和"甘甜一号"薄皮甜瓜材料5～7d苗龄的子叶、下胚轴、根尖、真叶以及不同6-BA浓度下不定芽诱导情况进行了研究,建立了高效稳定的再生体系并对生根以及移栽等条件进行了初步研究。结果表明:2份薄皮甜瓜材料在不定芽的诱导方面差异不大,"G24"不定芽的发生频率达到97.2%,"甘甜一号"为91.6%;最适宜作为甜瓜组织培养的外植体材料为子叶近胚轴端,其不定芽诱导率可达95%以上;不定芽诱导中最适6-BA浓度为1.0mg/L。     

辣椒高效再生体系研究

以辣椒为试验材料,研究不同外植体对辣椒愈伤组织诱导的影响,以及6-BA和IAA不同浓度组合对辣椒子叶不定芽分化的影响。结果表明,取自于子叶中部的外植体愈伤组织诱导率最高,可达到100%,且长势最好,其不定芽的最佳诱导培养基为：MS基本培养基＋6-BA5.0mg/L＋IAA1.0mg/L。     

甘蓝柱头蛋白质双向电泳体系的建立

蛋白质提取方法和电泳条件是蛋白质组学研究中双向电泳的关键。为建立适合甘蓝柱头总蛋白质的双向电泳体系,本试验以甘蓝柱头为材料,采用改良TCA/丙酮沉淀法提取柱头总蛋白质,通过对IPG胶条、上样量、聚焦程序、SDS-PAGE胶浓度等的优化,建立了甘蓝柱头总蛋白质双向电泳体系,即选用长17 cm、pH 3～10 NL的IPG胶条,上样量150 μg,按照聚焦程序Ⅰ进行等电聚焦,第二向SDS-PAGE胶浓度选用12%,得到了分辨率高、重复性好的双向电泳图片。     

Micro-Tom番茄离体再生条件的选择

以Micro-Tom番茄子叶和下胚轴为外植体进行离体组织培养,研究了不同激素及浓度对愈伤组织诱导、不定芽分化及生根的影响。结果表明:培养基组成为MS+2.0mg/LZR+0.5mg/LIAA+3%蔗糖最有利于愈伤组织和不定芽的形成;诱导不定芽生根的理想培养基为1/2MS+1.5%蔗糖+0.2mg/LIBA。     

三种基因型羽衣甘蓝筛选适合叶绿体转化材料

以3种不同基因型的羽衣甘蓝品种"皱叶红心"、"白鸥"和"红鸥"为试材,以MS培养基为基础培养基,分别添加不同质量浓度的6-BA、NAA、IBA激素,筛选不同品种真叶叶片不定芽的诱导频率,同时确定不同材料对除草剂双丙氨膦和抗生素壮观霉素的致死临界质量浓度,为羽衣甘蓝的叶绿体转化研究筛选受体材料。结果表明:影响羽衣甘蓝叶片诱导不定芽因素中,激素质量浓度的影响比品种的影响更大;当诱导培养基中的6-BA质量浓度为1.0mg/L、NAA质量浓度为0.1mg/L时,诱导效果最佳,是3个品种的最适培养基;按照由高到低的顺序排列,3个品种的不定芽诱导率依次为"红鸥"、"白鸥"和"皱叶红心",因此择优利用品种"红鸥"作为后续转基因研究的受体材料;分别利用双丙氨膦和壮观霉素的不同质量浓度梯度进行筛选,研究二者对"红鸥"品种叶片分化的影响,发现双丙氨膦和壮观霉素的最低抑制质量浓度分别为4mg/L和50mg/L。该研究结果对今后利用叶绿体遗传转化技术改良羽衣甘蓝品种提供了技术支持。     

青蒿组织培养再生体系的建立

为了建立和优化青蒿的组织培养再生体系,获得快速繁殖技术,以青蒿叶片和叶柄为外植体,研究了不同激素配比对其离体培养和大量快速繁殖的影响。结果表明:以青蒿叶片为外植体,其愈伤组织诱导培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L 2,4-D,诱导率为78.0%;分化培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+3%蔗糖+0.7%琼脂粉,分化率达95.3%。分化苗在1/2MS+1.0mg/L NAA培养基上快速生根,且根系发达,粗壮,生根率达98.9%。以青蒿叶柄为外殖体,叶柄可在培养基MS+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L 2,4-D上一次成苗,在1/2MS+1.0mg/L NAA培养基上生根良好。该体系有效的缩短了培养周期,具有重要的研究价值。