南瓜籽粕酶法制备血管紧张素转化酶抑制肽工艺优化

用中性蛋白酶水解南瓜籽粕,制备血管紧张素转换酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）抑制肽,是南瓜籽粕蛋白深度开发的途径之一。为了探寻南瓜籽粕酶法制备ACE抑制肽的最佳工艺,该文以ACE抑制率为响应值,用响应面分析法研究酶浓度、底物质量浓度和水解时间等因素对酶解产物的ACE抑制活性的影响,优化制备工艺。结果表明,各因素对制备ACE抑制肽的活性具有极显著影响（P<0.001）。获得中性蛋白酶水解南瓜籽粕制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为：酶体积分数为4.8%、底物质量浓度为4.0g/100 mL、水解时间为320 min。在此条件下,南瓜籽粕蛋白酶解产物对ACE的理论抑制率最高可达80.0％,验证值为80.56％±0.23%,预测模型可靠性高,可应用于南瓜籽粕ACE抑制肽的酶法制备。通过优化,提高了南瓜籽粕ACE抑制肽的活性。     

酶解法制备豆粕水解肽工艺优化

为制备苦味低且生物活性高的豆粕水解肽,本试验在综合考虑水解酶酶切位点后选取7种酶组合对低温豆粕进行水解,以蛋白质转化率、水解度、分子量分布及智能感官评价等作为水解肽的评价指标,比较不同酶组合的作用效果。结果表明,优化得到豆粕水解肽的最佳酶法制备工艺条件:复合酶的最佳组合为碱性蛋白酶+中性蛋白酶+脱苦蛋白酶,酶解pH值依次为8.5、7.5、7.5,反应温度保持55℃,反应时间分别为3、2、2 h,经最佳酶组合制得的水解肽水解度为16%,分子量≤1 000 Da的水解肽可达89.8%,制备的水解肽理化性质及口感更优。本研究结果为豆粕资源开发及功能性肽产品的应用奠定了理论基础。     

三文鱼皮四种蛋白酶酶解物抗氧化活性及功能特性的差异研究

为进一步合理开发利用三文鱼皮,本研究对碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶和复合蛋白酶水解所制备三文鱼皮酶解物的抗氧化活性与功能特性进行了比较。结果表明,三文鱼皮碱性蛋白酶酶解物的水解度(20.18%)和三氯乙酸可溶性氮得率(40.14%)最高,小分子肽含量高达99.97%,其抗氧化活性显著优于其他组(P<0.05);且碱性蛋白酶酶解物的溶解性和持水性最高,分别为87.21%和26.92%;中性蛋白酶酶解物的持油性和乳化性能最强,分别为4.67%和14.69%;而风味蛋白酶酶解物的乳化稳定性显著优于其他组(P<0.05)。综上所述,碱性蛋白酶为制备三文鱼皮蛋白抗氧化肽的最优蛋白酶。本研究为三文鱼皮副产物的高值化利用提供了数据支持和理论基础。     

酶解制备鱼鳞蛋白降血压肽的工艺优化

为有效利用鱼鳞制备降血压肽,以罗非鱼鱼鳞为原料,在121℃条件下进行热预处理15 min后,运用响应面分析法优化酶解制备鱼鳞蛋白ACE抑制肽的工艺条件。结果表明,以水解度和ACE抑制率为评价指标,筛选出碱性蛋白酶为最优酶。在单因素试验的基础上,根据Box-Behnken中心组合试验设计原理,最终确立最优的酶解工艺参数为:酶解时间2 h、酶解温度56.3℃、pH值8.0,酶底比1.1%,此条件下ACE抑制率理论值为87.95%,实际值为88.26%。最优条件下制得的酶解产物相对分子质量集中在300～3 000 Da之间,水解效果较好。本研究结果对酶解法制备鱼鳞蛋白降血压活性肽具有一定的实践参考价值。     

超声辅助竹节虾头酶解及抗氧化肽分离研究

为了实现竹节虾加工副产物的高值化利用,以竹节虾加工废弃物中的虾头副产物为原料,以水解度和DPPH清除率作为评价指标,采用中性蛋白酶酶解,通过响应面法优化超声辅助酶解工艺,并依次通过超滤、凝胶层析色谱和反相高效液相色谱等分离方法,从竹节虾虾头酶解产物中分离制备抗氧化肽,采用超高压液相色谱串联质谱联用技术对肽的结构进行表征。结果表明,在中性蛋白酶添加量为3 000 U·g~(-1)、p H值7.0条件下,最佳超声辅助酶解工艺参数为超声时间41 min,超声温度55℃,超声频率22 k Hz,料液比1∶9(w/v),在此条件下获得的酶解产物DPPH清除率达69.50%。当水解时间为0.5~2.5 h时,超声辅助酶解的酶解产物水解度和DPPH清除率比非超声辅助酶解工艺分别高17.95%和18.83%,该工艺缩短了酶解时间,节约了能耗。酶解产物经超滤初步分离发现,相对分子质量在3k Da(SHP4)的组分具有显著的抗氧化活性。用凝胶层析法进一步分离纯化SHP4组分后得到4个峰,其中SHP4-II的DPPH清除率最高;SHP4-II通过反相高效液相纯化后也得到4个主要肽峰,在多肽含量为1.5 mg·m L~(-1)时,SHP4-II-4的DPPH清除率最高,达到85.69%,并且具有较好的分离度,质谱分析发现,该抗氧化肽的结构为Gly-Asn-Gly-Leu-Pro(455.99 Da)。本研究结果为虾肽抗氧化保健食品的研发提供了一定的科学依据。     

红娘鱼降血压肽的酶解制备工艺优化及酶解产物的抗氧化活性研究

为有效利用红娘鱼制备降血压肽,以红娘鱼鱼糜为原料提取蛋白,并对其进行酶解制备降血压肽。以血管紧张素转换酶ACE抑制率和水解度为指标,通过响应面分析法对酶解红娘鱼鱼糜蛋白制备降血压肽的工艺条件进行优化,并对最优条件下制备的酶解产物进行分子量和抗氧化活性测定。结果表明,碱性蛋白酶是制备降血压肽的最适蛋白酶,响应面法优化制备降血压肽的最佳酶解条件为pH值9、酶与底物的比值(酶底比)1.4%、温度54℃、时间2 h,此条件下酶解制得的降血压多肽ACE抑制率理论值为88%,实际值为89.3%;经高效液相色谱(HPLC)分析可得酶解产物相对分子量<2 000 Da。通过测定酶解产物样品的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率、羟自由基(·OH)清除率及还原力判定其体外抗氧化活性,结果表明酶解产物具有较强抗氧化活性。本研究结果为红娘鱼的高值化利用提供了数据支持和理论基础。     

中性蛋白酶水解鸡骨泥制备短肽工艺优化

为了探究酶法制备鸡骨泥短肽的最佳工艺,该文研究了以中性蛋白酶酶解鸡骨泥时各因素对短肽得率和羟自由基清除率的影响,以及鸡骨泥肽清除超氧阴离子自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)的能力。试验探究了酶解过程中不同底物浓度、酶浓度、反应温度和反应时间对短肽得率和羟自由基清除率的影响,采用响应曲面优化得到了以短肽得率为目标的中性蛋白酶酶解鸡骨泥的最优工艺,当反应液p H值为7.2,反应温度42℃,反应时间2 h,底物质量分数5%,酶添加量200 mg/g,该条件下制备鸡骨泥肽,测得其短肽得率为56.16%,羟自由基清除率为54.12%。采用该酶解工艺制备鸡骨泥肽,测得其对超氧阴离子自由基最高清除率为56.01%,对DPPH自由基最高清除率为81.57%,说明鸡骨泥肽具有一定的抗氧化活性,研究结果为酶法制备鸡骨泥肽提供参考。     

白果活性蛋白的酶法水解及抗氧化活性研究

白果活性蛋白(GAP)是华中农业大学天然产物化学实验室首次从白果中分离得到的一种以清蛋白为主的且具有显著生物活性的蛋白,为扩大该蛋白在食品中的用途,提高其生物活性,研究了酶法水解制备白果肽段的方法及其抗氧化活性的变化。通过单因素分析、正交试验以及对试验结果的分析,确定了2709碱性蛋白酶水解白果活性蛋白的最佳水解条件为：底物浓度1%,pH值8.5,水解温度45℃,酶浓度7000 U/g,反应时间6 h。以Fenton体系和邻苯三酚体系检验其抗氧化活性,结果表明白果肽段较酶解前的活性蛋白,抗氧化活性有不同程度的提高,但两者均具有较强的抗氧化活性。     

金线鱼鱼皮抗冻蛋白酶法制备工艺优化

为了探讨金线鱼鱼皮抗冻蛋白的酶法高效制备工艺,该文首先探究不同蛋白酶酶解获得的酶解产物的热滞活性(thermal hysteresis activity,THA)以及不同分子区间的酶解产物的热滞活性。随后以抗冻蛋白得率为指标优化了底物与酶的比例、酶解时间、酶解温度以及p H值,并采用响应面法探究抗冻蛋白的最佳酶解工艺。最后使用差示扫描量热仪(differential scanning calorimeter,DSC)测定验证抗冻蛋白的热滞活性。结果表明:在碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶以及复合蛋白酶4种酶的最佳酶解条件下,碱性蛋白酶酶解所获得抗冻蛋白热滞活性最大,选择碱性蛋白酶作为制备金线鱼鱼皮抗冻蛋白的最佳蛋白酶;截留分子量为≥5~10 k Da鱼皮蛋白的抗冻效果最佳,热滞活性达1.20?0.07℃,确定≥5~10 k Da鱼皮蛋白得率作为酶解制备工艺的指标;得到金线鱼鱼皮抗冻蛋白最佳的酶解制备工艺条件为:底物与酶比例为32∶1、酶解时间为147 min、酶解温度为50℃和p H值为9,在此条件下,金线鱼鱼皮抗冻蛋白得率为49.25%±1.34%。相比于牛血清蛋白(bovine serum albumin,BSA),其降低了溶液起始结晶的温度;在最佳的保留温度条件下,其热滞活性为1.2℃。碱性蛋白酶酶解制备鱼皮抗冻蛋白是一种快速有效的方式,酶解获得的抗冻蛋白热滞活性高。该结果为综合发展和利用金线鱼鱼皮提供一定的理论依据。     

超声处理对菜籽蛋白酶解效果的影响

以双低菜籽饼粕蛋白为原料,以常规酶解为对照,以酶解产物的抑制活性为指标,分别考察了超声预处理蛋白酶、超声预处理蛋白原料和酶解过程前期施加超声3种超声处理方式对双低菜籽蛋白酶解制备ACEI 活性肽效果的影响。结果表明,3种超声辅助方式都能有效地促进菜籽饼粕蛋白的酶解,提高产物的ACE抑制活性,其中超声预处理蛋白原料效果最为明显。这种方式的最佳参数为：超声频率20 kHz、超声时间 30 min、超声功率1250 W、作用时间4 s、间歇时间2 s,该条件下酶解产物对ACE的抑制率从对照组的70.83%提高到92.97%,肽得率从29.6%提高到41.4%,半抑制浓度IC50从3.57 mg/mL降到2.48 mg/mL。这表明脉冲超声辅助酶解法是一种高效制备双低菜籽ACEI肽的方法。     

小肽转运蛋白(PepT1)及其活性调控

小肽是蛋白质消化的主要产物，在氨基酸消化、吸收以及动物营养代谢中起着重要的作用。小肽转运蛋白（PepT1和PepT2）的克隆揭示了动物小肽转运的机制。主要综述了小肽转运蛋白（PepT1）的分子结构特征，PepT1mRNA在不同动物、不同组织中的分布，以及各种因素对PepT1转运活性的影响，并就需要进一步深入研究的问题进行了探讨。     

根癌农杆菌Ti和AT质粒基因组中的分泌型信号肽分析

利用SignalP3.0和PrediSi软件结合L值和TMHMM筛选,对根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)C58Cereon菌株的Ti和AT质粒所编码的745个ORF编码蛋白中的信号肽进行了预测,发现35条为分泌型蛋白,其中6条属于RR-motif型信号肽,2条蛋白的信号肽为细菌素-信息素型信号肽,新注释了24条分泌型信号肽,其中1条来自Ti质粒,23条来自AT质粒的蛋白。这些信号肽N结构域的长度变化为2￣19aa,平均为6.8aa,H结构域的长度变化为8￣34aa,平均为17.1aa。     

枯草芽孢杆菌Y-6产抗菌肽的体外抗氧化效果研究

为研究枯草芽孢杆菌Y-6产抗菌肽的抗氧化活性,通过化学发光法测定抗菌肽清除H2O2、·OH和O2·3种氧自由基的性能,再通过分光光度法测定抗菌肽的还原能力、对DPPH·的清除率以及对肝匀浆丙二醛(MDA)生成的抑制率.结果表明,抗菌肽有一定清除自由基、抑制脂质过氧化的作用,试验范围内抗菌肽浓度越高,抗氧化效果越好.抗菌...     

大米肽的酶法制备工艺及其特性的研究

该文利用蛋白酶水解大米蛋白制备得到大米肽。比较碱性蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶和风味酶水解大米蛋白的进程曲线,结果显示碱性蛋白酶的水解效果最好,其较佳作用条件为：底物浓度10%、pH值9.0、温度45℃、酶与底物比48 AU/kg、时间150 min。在此条件下,大米肽的得率为46.8%,纯度为71.3%。大米肽具有溶解性较好和黏度较低的特性,可以在食品中广泛应用。     

断奶前后仔猪小肠不同肠段胰高血糖素原mRNA的表达

研究表明,成年猪的肠上皮细胞大约2～4d更新1次,而新生仔猪肠上皮细胞7～10d才能完成1次更新。仔猪的胃肠道功能发育迟缓,使其不能适应生产上早期断奶的需要,出     

鱿鱼皮胶原蛋白肽的脱色及其对风味影响的研究

为探究脱色工艺及其对鱿鱼皮胶原蛋白肽风味的影响,本试验在酶解制备的基础上,研究了不同活性炭和树脂对鱿鱼皮酶解液的脱色效果及最优工艺,并采用电子舌、电子鼻、氨基酸分析及感官评价等方法对鱿鱼皮胶原蛋白肽风味变化进行了分析。结果表明,粉末状活性炭的脱色效果较好,最佳脱色工艺为：pH值2.0,添加量0.1%(m/v),30℃下脱色30 min,该条件下鱿鱼皮酶解液的脱色率和蛋白损失率分别为82.91%和24.81%。分子量分布与游离氨基酸分析结果表明,与脱色前相比,脱色后样品的分子量分布变化不大,游离氨基酸及苦味氨基酸含量下降,鲜味氨基酸占比上升。电子舌、电子鼻及感官评价结果表明,脱色前后样品的风味差异较大,脱色后,样品的风味有显著改善,表现为苦味下降,鲜、酸、咸味提升。本研究结果为鱿鱼皮高附加值产品的开发及胶原蛋白肽的应用提供了一定的理论依据。     

家蝇防御素抗菌肽Des-hf突变体的抑菌活性

采用PCR定点突变技术,将家蝇(Musca domestica)防御素抗菌肽成熟肽段的基因(des-hf)第32位氨基酸残基由甘氨酸(G)突变为带正电荷的精氨酸(R),构成第一个突变体des-hf-MU1;采用同样的方法在des-hf基因的C端加上6个带有正电荷的赖氨酸(K),构成第2个突变体des-hf-MU2.采用毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统对上述2个突变体进行表达.抗菌特性表明,抗菌肽突变体对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)有较好的抑菌活性.琼脂孔扩散法检测des-hf-MU1和des-hf-MU2的抑菌效价比des-hf分别提高了2.4和8.0倍.酸稳定性试验显示,抗菌肽突变体在pH值为5～6时活性最高,热稳定性试验显示des-hf-MU1和des-hf-MU2 100℃加热10 min后仍具有抑菌活性.显示了两抗菌肽突变体具有良好的应用前景.     

复合酶法制备鱿鱼皮胶原蛋白抗冻肽的工艺研究

为了获得具有较高活性的抗冻肽,提高水产加工副产物的综合利用率,本试验以水解度和过氧化氢酶低温保护活性为指标,优化鱿鱼皮胶原蛋白酶解工艺,并对水解产物进行分离纯化及结构鉴定。结果表明,最佳酶解条件为：当底物浓度为4%、加酶量为4 000 U·g^-1时,先由碱性蛋白酶于pH值8、50℃条件下酶解2 h;灭酶后由木瓜蛋白酶于pH值6、45℃条件下酶解3 h。在此条件下所得酶解产物分子量主要在1 000～5 000 Da之间,经G-25凝胶柱分离后得到具有较高抗冻活性的F₂组分,其主要成分的氨基酸序列可能为Gly-Pro-Try-Pro-Ala-Ala-Asn-Ser-Pro-Glu或Glu-Pro-Ser-Asn-Ala-Ala-Pro-Try-Pro-Gly。本研究为鱿鱼皮的精深加工和新型抗冻剂的开发提供了一定的理论依据。     

半定量RT-PCR法评定鸡小肠肽转运载体cPepT1基因的表达

根据鸡肽转运载体cPepT1mRNA和看家基因β-actinmRNA序列,分别设计cPepT1和β-actin引物各1对,并通过Mg2 浓度、循环数等PCR条件的优化,建立了包括RNA提取、反转录、PCR的鸡小肠cPepT1基因表达检测方法。采用该方法研究了肉仔鸡cPepT1基因在小肠各段的表达差异。结果显示,肉仔鸡小肠cPepT1表达水平表现为随小肠近端到远端显著降低的趋势,回肠表达水平显著低于十二指肠和空肠,十二指肠和空肠差异不显著。     

人胰高血糖素样肽1在转基因番茄中的表达

人胰高血糖素样肽1（GLP1）是一种短肽激素,对Ⅱ型糖尿病具有很好的疗效。本研究在设计合成GLP1基因并构建植物表达载体的基础上,通过农杆菌介导将GLP1基因导入番茄基因组中,经过PCR扩增和Southern Blot分析,证实GLP1基因已整合进入9个株系的番茄基因组中。Western Blot检测表明,其中4个株系转基因番茄的叶片能够检测到hGLP1融合蛋白的表达。通过Ni—NTA亲和层析分离纯化转基因番茄表达的hGLP1融合蛋白,动物实验表明该融合蛋白具有显著的降血糖生物活性。本研究结果将为转基因番茄作为生物反应器表达药用蛋白提供重要的理论和技术支持,并将为培育具有糖尿病治疗功能的番茄新品种奠定基础。