兔精液冷冻复温后超微结构变化和低渗膨胀实验

实验从精子超微结构的变化对冷冻解冻精子的损伤进行研究。结果表明冷冻复温后兔的一些精子不同程度出现了质膜膨胀、变薄、皱褶及损伤；顶体肿胀、顶体外膜、内膜囊泡化或不连续，及顶体完全脱落；部分精子中段质膜破损。线粒体裸露、断裂、电子密度降低或部分丢失；少数主段末段质膜破损，抽丝断裂、散开。实验验证HOST（hypoosmotic swelling test)适合于兔精子膜功能活性检测。     

梅花鹿精子冷冻前后形态和超微结构的研究

采用光学显微镜和电子显微镜对冷冻前后的梅花鹿精子的形态和超显微结构进行了观察。结果表明：梅花鹿精子全长６１．６±２．７０μｍ,其中头长７．１９±０．４７μｍ,中段长１２．０８±０．７５μｍ。线粒体的螺旋数是６３．６８±４．６６旋,中段线粒体每个螺旋约由３～５个线粒体组成。梅花鹿精子超微结构有３个特点：一是头部的厚度为牛、羊、猪精子的１／２;二是在中环处的质膜未见反折现象,并且主段与中段的联接是以套管式镶嵌;三是末段以９＋２结构变成２０根（１２＋７＋１）单丝管形式排列。冷冻处理可使梅花鹿精子顶体膨胀,顶体内容物丢失,顶体内发生空泡,顶体外膜自身囊泡化,线粒体发生断裂和丢失,末段纤维束因质膜丢失而分散成扫帚状。冷冻后的梅花鹿精子畸形率极显著增高（Ｐ＜０．０１）,冷冻解冻是致使梅花鹿精子顶体完整率和活力降低的主要原因。     

海藻糖对猪精液冷冻保存效果的影响

在传统的Tris-柠檬酸-葡萄糖稀释液基础上，分别添加25％、50％、75％、100％的海藻糖，研究不同浓度海藻糖对猪精液冷冻后精子质量的影响。结果表明，海藻糖相对于对照TCG稀释液能够显著改善和提高猪精液的冷冻效果，其最佳添加浓度为25％，冷冻-解冻后猪精子活力、活率、线粒体活性、质膜完整性以及顶体完整率均显著提高（P〈0．05），分别达到41．38％、46．34％、44．56％、43．51％和64．09％。海藻糖可以明显抑制精子获能，获能处理前精子获能率仅为3．68％，而获能处理后达到41．82％，有利于促进精子获能。精液稀释液中甘油的适宜添加浓度为2％，海藻糖只有与甘油共同作用，才能在冷冻-解冻过程更加有效地保护精子。猪精子活力、活率、线粒体活性、质膜完整率、顶体完整率等之间存在极显著的正相关关系（P〈0．01），而与获能处理前精子的获能率存在显著的负相关关系（P〈0．05）。     

西藏獒犬精子的超微结构观察

应用透射电镜技术。对冷冻复温后西藏獒犬精子的超微结构进行了观察。结果表明．西藏獒犬精子头部呈卵圆形．长约4．62μm、宽约3.13μm、厚约0．66μm。颈部和尾部横切近圆形。颈部很短、长约0.88μm．直径为0．63μm。尾部中段长约7．9μm．直径约0.83μm;轴丝为9＋2型：线粒体螺旋42～49转。中段与主段套管式连接。终段轴丝为9×2＋2形式。同时．冷冻对一些精子细胞膜和顶体造成损害．表现为细胞肿胀．头部和尾部主段、终段质膜变薄、皱褶、玻损或丢失;顶体肿胀,顶体外膜囊泡化或不连续。个别出现顶体全脱;中段线粒体较完整．冷冻对西藏獒犬精子的损害并不严重。     

昆明犬成熟精子超微结构的研究

应用透射电镜技术,对3头昆明犬精子的超微结构进行了观察。结果表明,昆明犬精子头部呈卵圆形,长约5.05μm,宽约0.91μm。颈部和尾部横切近圆形。颈部很短,长约0.92μm,直径为0.63μm。尾部中段长约15.02μm,直径约0.86μm;轴丝为9 2型。中段与主段套管式连接。终段轴丝为9×2 2形式。通过观察,没有发现昆明犬精子的独征。同时,冷冻对一些精子细胞膜和顶体造成损害,表现为细胞肿胀,头部和尾部主段、终段质膜变薄、皱褶、破损或丢失;顶体肿胀,顶体外膜囊泡化或不连续,个别出现顶体全脱;中段线粒体较完整,冷冻对昆明犬精子的损害并不十分严重。     

西藏赘犬精子的超微结构观察

应用透射电镜技术，对冷冻复温后西藏赘犬精了的超微结构进行了观察。结果表明，西藏赘犬精子头部呈卵圆形，长约４．６２μｍ，宽约３．１３μｍ，厚约０．６６μｍ颈部和尾部横切近圆形，颈部很短，长约０．８８μｍ，直径为０．６３μｍ，尾部中段长约７．９μｍ，直径约０．８３μｍ轴丝为９＋２型；线粒体螺旋４２－４９转，中段与主段套管式连接，终段轴丝为９×２＋２形式，同时，冷冻对一些精子细胞膜和顶体造成损害，表现为     

牛冻精一次稀释与二次稀释的实验研究

从正常采精的公牛群中，随机选择２￣９周岁的种公牛１４头。将公牛的原精分别用一次稀释的配方和二次稀释的配方稀释，冷冻，测试精子生理指标的变化情况。结果表明：二次稀释冷冻的精子，顶体完整率指标高于一次稀释冷冻的精子（Ｐ〈０．０５）。     

牛血清白蛋白对犬精液冷冻保存效果的影响

为了研究牛血清白蛋白(BSA)对犬精液冷冻保存效果的影响,试验配制含有不同浓度(0、3%、5%、7%)BSA的精液冷冻稀释液用于保存犬精液,测定冷冻-解冻后精子活力、质膜完整率、顶体完整率、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量及线粒体膜电位(MMP)等指标。结果表明：3%和5%BSA组冷冻-解冻后精子活力、质膜完整率、顶体完整率和T-AOC均显著高于对照组(P<0.05);3%BSA组MDA含量显著低于其他各组(P<0.05),线粒体膜电位值显著高于其他各组(P<0.05);除精子活力外,7%BSA组和对照组之间各项指标均差异不显著(P>0.05)。说明在犬精液冷冻稀释液中添加BSA能有效改善冷冻-解冻后精液品质,对提高精子抗氧化能力及代谢能力都有显著效果,BSA的最适添加浓度为3%。     

奶牛精子顶体与季节关系的初步研究

奶牛精子顶体与季节关系的初步研究本试验对精子顶体与季节关系进行研究，为今后的冷冻精液生产提供一些参考资料。１材料和方法冷冻精子顶体来自本站１０头荷斯坦种公牛。精子顶体依《牛冷冻精液质量检测规范》进行抹片观察。根据所测冷冻精子顶体数据的平均完整率与季节...     

利木赞种公牛精液冷冻中精子顶体和精清内酶的变化

对三头法车引进利木赞公牛的精液进行了冷冻过程中顶体变化民政部和精清内谷草转氨酶ＧＯＴ和乳酸氢酶ＬＤＨ的变化进行了研究，结果表明，（１）精子的平均活力与Ｉ类顶体率无显著相关关系；（２）冷冻会使精了Ｉ类顶体率下降；（３）冷冻会使ＧＯＴ和ＬＤＨ显著上升（Ｐ〈０．０５）。     

牛冷冻精液稀释液中草药配方的初步研究

通过比较以淫羊藿为主要成分的单方及复方中草药提取液对牛冷冻精液解冻后精子活率、畸形率、顶体完整率及低温保存时间的影响，以期开发牛冷冻精液中式稀释液。将三种不同配方的淫羊藿提取液分别以6．25％、12．5％、25．0％、50．0％的体积分数添加于稀释液中，制作牛颗粒冻精，利用干解冻法（40～42℃）解冻后分别检查精子活率、畸形率和顶体完整率，评定其品质。结果表明：配方三取得了较佳的冷冻效果。其提取液添加12．5％时精子冻后活率平均达到0．56，极显著高于其他各组（P〈0．01）：精子顶体完整率最高达到76．80％。畸形率仅14．61％，低温保存时间长迭138h。配方三最有利于生产牛冷冻精液。     

用TG染色检测德国牧羊犬冷冻精子顶体形态的研究

本文用TG染色检测德国牧羊犬冷冻精子顶体的形态。根据染色结果可将精子分为四类:a.有正常顶体活精子;b.无正常顶体活精子;c.有正常顶体死精子;d.无正常顶体死精子。冷冻精液效果存在着个体差异。顶体损伤率过高是导致犬冷冻精液受胎率低的主要原因。     

猪冷冻精液的研究

本试验以甘油、乙二醇为抗冻剂，并添加ATP或安息香酸咖啡因，以解冻后精子活力、顶体完整率、顶体膨胀率、顶体破损率、尾部畸形率和在37℃下的存活时间几个重要评定指标为依据，筛选了几种猪颗粒冻精的冷冻稀释液配方，并优化了其冷冻程序。结果表明，与对照组相比，在冷冻液中添加0．1mg／ml的ATP或2mg／ml的安息香酸咖啡因都能显著提高解冻后精子活力(分别提高0．13和0．18)，降低顶体膨胀率(两者都将近降低了11％)，并能延长其存活时间(分别延长10．5h和11．8h)；甘油和乙二醇两种抗冻剂配合使用，将显著提高冻后精子的活力与存活时间，其较优混合量为甘油3％，乙二醇0．5％。     

改进的昆明犬精液冷冻保存方法

为了对现有的犬精液冷冻方法进行改进,进一步提高精子冷冻保存效率,试验采用4种降温时间(30,60,90,120 min)和2种添加甘油方法(一步加或五步加),以冷冻复苏精子的运动度、复苏率、质膜完整率和顶体完整率为指标,比较不同降温时间和不同添加甘油方法对昆明犬精液超低温冷冻保存的效果。结果表明:在相同降温条件下,五步加甘油进行冷冻的精子,复苏后精子运动度、复苏率和质膜完整率均高于一步加甘油组,顶体完整率高于一步加甘油组或与其相当;降温处理60 min,五步加甘油后进行冷冻的精子,其运动度、质膜完整率显著高于其他组(P0.05),而复苏率比其他组高,但差异不显著(P0.05)。     

影响波尔山羊冷冻精液受胎率的原因及对策

一、影响波尔山羊受 胎率的原因 波尔山羊冷冻精液受 胎率低，仅有４０％－６０％， 经过几年的生产实践，我 们认为影响波尔山羊受胎 率最主要的因素有以下两 点： １．解冻过程，造成精 子质量下降。各地使用的 波尔山羊冷冻精液解冻后 活力一般在０．３５以上从精子本身因素考虑，冷冻和解冻会引起精子受精能力下降。研究表明，精子冷冻、解冻会引起精子细胞结构发生改变，使精子顶体异常变化是冷冻精液受胎率下降的主要原因。 ２．人工输精技术不规范。主要表现为，输精时间、部位把握不好，器械使用方法不当和解冻方法不正确等。 二、…     

使用荧光染色和流式细胞术检测山羊精子

分别使用PI(碘化丙碇),FITC-PSA(异硫氰酸荧光素络合豌豆凝集素)和RH123(罗丹明)对山羊冷冻精子进行染色,再使用流式细胞仪进行检测、分析。试验发现,对于山羊的冷冻精子,PI染色阴性的为质膜完整的精子;FITC-PSA染色阴性的可能为顶体完整的精子,染色FITC-PSA+和FITC-PSA++,可能分别为顶体反应中的精子和顶体破损精子;RH123+应为线粒体无活性精子,有绿色荧光可能是因为染料残留在细胞膜上导致,而RH123++可能应为线粒体有活性的活精子。不同个体羊的精子对于低温敏感度不一样。不同个体羊之间的冻精顶体完整率、质膜完整率、线粒体有活性的精子比率之间差异显著,据此应选择合适的山羊个体进行精液冷冻。     

不同冷冻方法对犬细管精液冷冻效果的影响

通过采集6头德国牧羊犬共计24份细管分装精液,分别采用液氮熏蒸法和程序冷冻法进行冷冻,检测解冻后精子的活力、动力学参数、顶体完整率和质膜完整率来比较不同冷冻方法的冷冻效果。结果显示:采用程序冷冻法冷冻后的精子活力(P0.01)、质膜完整率(P0.01)和顶体完整率(P0.05)极显著或显著高于液氮熏蒸法,程序冷冻法解冻后精子动力学参数(平均路径速率、直线速率和曲线速率)高于液氮熏蒸法。结果表明:程序冷冻法优于液氮熏蒸法的冷冻效果。     

青海牦牛和藏羊冷冻精液顶体完整率研究

为了研究牦牛、藏羊离体精子遭受低温打击和冷冻伤害差异,试验对牦牛、藏羊的鲜精采用最佳的冷冻程序进行细管冻精,比较其鲜精及冻后精子顶体完整率差异,并分析冻后精子顶体完整率降低的原因。结果表明:牦牛的冻精顶体完整率显著低于藏羊的(P0.05)。牦牛精子冷冻后,精子顶体完整率为53.92%,较鲜精精子顶体完整率降低30.90个百分点;藏羊精子冷冻后,精子顶体完整率为84.93%,较鲜精精子顶体完整率降低8.53个百分点。牦牛离体精子抗低温打击和冷冻伤害能力显著低于藏羊。     

绵羊鲜精和冻精超微结构的初步观察

本文利用电子显微镜超薄切片技术,比较鲜精和冷冻解冻精子的超微结构的变化,特别注意到精子的顶体损害。按顶体的形态可以划分为十种类型:(1)原生质膜及顶体完好。(2)原生质膜扩张,顶体完好。(3)顶体电子密度下降。(4)顶体内出现空腔。(5)顶体外膜皱折。(6)顶体外膜部分空泡化。(7)顶体外膜全部空泡化。(8)顶体外膜肿胀畸形。(9)顶体诸层膜翻卷。(10)顶体外膜全脱以至内膜部分剥落。也注意到线粒体的“失色”过程,及线粒体的肿胀和失去现象。根据统计分析,冷冻前后顶体形态的改变可作如下叙述:1.顶体完整率从67.97％(58.28～86.50％),下降为38.48％(32.68～52.11％)。2.顶体外膜空泡化从8.48％增至18.56％。3。顶体外膜肿胀从9.64％增加到20.42％。4.顶体诸膜翻卷从5.40％增至10.59％。5.线粒体受损达40％以上。     

胆固醇对山羊精液冷冻效果的影响

研究了胆固醇对山羊精液冷冻的影响。结果表明，胆固醇不影响冷冻后精子的活力，但影响精子的项体，添加胆固醇后，精子顶体部分脱落的比例增高，但全部脱落的比例降低。