H9亚型禽流感病的防控

禽流感又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟,是由禽流感病毒引起的家禽和野禽的一种从呼吸系统到严重影响全身性败血症等多种症状的综合性病症。H9亚型禽流感病毒属于HA型禽流感病毒中的一种,HA型禽流感病毒目前已发现15种,分别以H1-H15命名（NA型禽流感病毒已发现9种,分别以N1-N9命名）。     

肉鸡与蛋鸡H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体水平调查

为了解养殖场家禽中H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体水平,通过血清学调查,应用血凝抑制试验(HI)的方法,对四川内江、山东济南、河南鹤壁、江苏扬州4个定点实验观测站负责的养殖场的鸡血液样本进行禽流感病毒抗体分析,其中包含2个肉鸡场和3个蛋鸡场。研究发现蛋鸡场通常免疫了H5、H7、H9(或H5与H9)亚型禽流感疫苗,而肉鸡场只免疫了H9亚型禽流感疫苗;蛋鸡场和肉鸡场都存在免疫禽流感疫苗后抗体水平低和无抗体产生的情况,从而导致免疫不合格或免疫失败。以上结果表明,应加强家禽养殖场对不同亚型禽流感疫苗的免疫以及免疫后的禽流感病毒抗体水平监测,以防免疫失败,从而预防禽流感的发生和流行。     

禽流感病毒H9亚型感染发病的初报

通过流行病学调查、临床观察、病理剖检、血清学试验、病毒分离与鉴定，首次确诊了我区发生的Ｈ９亚型禽流感病毒引起的感染发病。此次疫情的死亡率较低（０．２２％～５．０８％），不属高致病性禽流感，但其所引起的以产蛋量下降为主的经济损失不容忽视。     

H9亚型禽流感病毒变异的研究进展

对国内外H9亚型禽流感已分离毒株的基因序列分析、流行情况及变异等方面的研究进行了综述,分析了目前H9亚型低致病流感的流行变异情况,为以后的研究方向提供科学的理论依据。     

H9亚型禽流感病毒的分离与鉴定

从临床表现呼吸困难并伴有啰音、肺部和支气管黄色干酪样栓塞为特征的病鸡肝脾肺混合匀浆中分离到1株病毒（YD株）,该病毒能凝集鸡红细胞并能被AIVH9标准阳性血清抑制,对热不稳定且对热敏感;对鸡胚和番鸭胚的最小致死量分别为10^-7和10^-6,其MDT分别为78h和70h;鸡胚尿囊液毒的HA效价和EID50明显高于番鸭胚尿囊液毒;能扩增出大小约为1027bp的特异性目的片段。结果表明．该分离毒为H9亚型禽流感病毒。     

H9亚型禽流感病毒免疫磁珠分离方法初步建立

禽流感病毒(AIV)严重危害世界养禽业,是举世瞩目的重大人畜共患病原,环境中微量病原是潜在的重要传染源,很难进行监测。为了提高畜禽环境中微量病原的监测效率,样品的必要预处理非常重要。制备了粒径约30~100 nm的Fe_3O_4纳米粒子,并利用戊二醛二步法偶联H9-HA单抗和磁珠,偶联效率约为130 mg/g;200μL免疫磁珠(5.6 mg/m L)可分离纯化100μL血凝价为28的AIV-H9。制备的免疫磁珠可以为纯化和富集畜禽生活环境中的微量病原提供便利,结合其他病原检测手段将有助于提高环境中病原的监测效率。     

禽流感病毒H5和H9亚型RT-PCR检测方法的建立

根据H5和H9亚型的HA基因,设计合成2对特异性引物,分别建立了RT-PCR检测方法,优化了反应体系及反应条件,该方法敏感性可达10^-3,特异性好,与NFV、IBV与H5与H9相互间无交叉反应。利用所建立的RT-PCR检测了10份活禽及禽产品中存在的H5和H9亚型禽流感病毒,其检测结果与病毒的分离培养一致,比电镜和琼扩的检出率高30％,与其他NDV、IBV的病料无交叉反应,证明该方法具有很好的应用价值。     

鸭H9亚型禽流感油乳剂灭活疫苗的免疫原性

对从发病雏鸭体内分离到的H9亚型禽流感病毒NJ01株[A/Duck/Nan jing/01/1999(H9N2)]进行了免疫原性研究。以含有108.0ELD50和108.5ELD50的NJ01进行静脉注射攻击无H9亚型禽流感抗体的26日龄、44日龄和140日龄鸭,结果显示,对小于44日龄和大于44日龄鸭分别以108.0ELD50和108.5ELD50病毒含量的NJ01株静脉攻击,攻毒后1~2 d的喉拭子病毒分离率均为80%以上。将病毒含量为107.9ELD50的NJ01株油乳剂灭活苗,肌肉途径免疫8日龄和28日龄鸭,在免疫后的第7 d、14 d和21 d用含108.0ELD50和108.5ELD50的NJ01静脉注射攻击,攻毒后取1~2 d喉拭子进行病毒重分离,结果表明,免疫后7 d产生抗体,14 d产生坚强免疫力,21 d相对保护率达100%。     

H7N9亚型禽流感综合防控技术现状及对策

从2013年起,中国在加强活禽市场和禽类养殖场监控方面投入巨大。但由于此前禽类感染H7N9病毒后几乎不会表现出明显症状,致使针对该病毒亚型的监控工作变得格外复杂。该文主要结合实际情况,首先分析了H7N9亚型禽流感综合防控技术现状,然后提出了相应的防控建议。     

H5亚型禽流感疫苗免疫效果研究

对大庆地区H5亚型禽流感油乳剂灭活疫苗免疫的两个蛋鸡场进行抗体消长情况的调查,了解生产实践中禽流感疫苗免疫工作方面存在的问题。应用血凝抑制(HI)试验跟踪检测免疫后鸡群的抗体水平。初次免疫后15d抗体达到保护临界值,28d抗体水平达到峰值,再次免疫后,抗体水平在一周上升到最高峰,二免有效期可达180d。两个鸡场的免疫效果比较理想,但存在着初免时间不确定和两次免疫间隔时间较长等问题。     

H9亚型禽流感病毒血凝素蛋白在原核系统中的表达

应用带有His6尾的pET原核表达系统对禽流感病毒血凝素蛋白进行表达,将禽流感A/Turkey/Wisconsin/66(HgN2)的HA基因克隆至原核表达载体pET-30a中,经酶切、PCR扩增和测序分析确证其插入,并且阅读框正确,获得重组质粒pET30a-H9.将此重组质粒转化到宿主菌BL21中,用诱导剂异丙基硫代...     

H9N2亚型禽流感病毒的致病特性研究

将SS，KMI，KMIII3个禽流感病毒的感染性胚液分别中2周龄及5周龄的SPF鸡，观察其症状及病理变化。结果显示：1，3个毒株均可引起攻毒鸡体温升高，部分出现水样淡黄色稀粪，但不能致死攻毒鸡，表明3个毒株均为非高致病力毒株，2，攻毒鸡除胰腺充血出血外，其他器官不见明显的肉眼病理变化，但组织病理病理学的变化较为明显和一致，主要为：脑及脊髓充血出血，神经元变性坏死，胶质细胞增生；心肌在出血，组织变性坏列, 腺充血出血，组织坏死，3个毒株对5周龄SPF鸡的病理变化无明显差异，但KMI毒株对2周龄SPF鸡的病理损害稍大于SS株。     

禽流感H5、H9亚型灭活油乳剂疫苗的免疫效果评价

对采自成都市牧星蛋鸡场免疫鸡群的2943份血清样品进行了H5、H9亚型禽流感抗体免疫接种试验。结果表明,在2943份血清样品中,tt5、H9亚型HI效价≥410g2的样品数量分别为2455、2738份,免疫合格率分别为83-4％、93．1％,免疫后抗体高峰维持7log2以上的时间达63d以上。超过蛋鸡场免疫合格标准,可...     

肉鸽H9亚型禽流感的诊断与病毒分离及鉴定

通过分子PCR检测,初步证明在湖北一发病肉鸽群感染H9亚型禽流感病毒。病原分离后,盲传3代,其血凝效价达到109~1011,经生物学特性进行测定,其鸡胚半数致死量为107.5,9日龄鸡胚平均致死时间为54.3 h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数为1.8,6周龄小鸡静脉接种致病指数为2.0,证明该H9亚型禽流感为毒力较强。将该病毒回归非免疫肉鸽,能产生典型的H9亚型禽流感症状,采集其肺、喉头、泄殖腔等病变组织进行病毒分离,均可分离到H9亚型AIV。     

一株鸭源H9亚型禽流感病毒分离株生物学特性研究

对分离到的1株鸭源H9N2亚型禽流感病毒(NJ01株)的生物学特性进行了研究。研究结果显示:其静脉致病指数IVPI为0,脑内致病指数ICPI为0.26,血凝解脱时间NHAT为慢,血凝热稳定时间HOT为30 m in。以108.0ELD50/羽的剂量静脉感染26日龄非免疫鸭,可使40%鸭致死,且从攻毒后存活鸭1 d+2 d喉拭子中100%分离到该病毒;而以相同剂量静脉感染1月龄SPF鸡后不出现死亡,但攻毒后4~6 d的泄殖腔拭子中,均可100%再分离到该病毒。毒株血凝素基因的RT-PCR试验结果显示,与1997年香港3个分离株的同源性为94.8%~96.0%,其HA裂解位点处氨基酸序列为-RSSRG-。研究结果表明该NJ01株为低致病性禽流感病毒,属欧亚大陆分支,在SPF鸡及非免疫鸭体内均能很好地复制。     

一株鸭源H9亚型禽流感病毒的分离及鉴定

从发病雏鸭体内分离到1株具血凝活性病毒,并鉴定为H9亚型禽流感病毒。取发病鸭肺作为病毒分离病料,接种10日龄SPF鸡胚,死亡鸡胚尿囊液具血凝活性,且不能被已知鸡新城疫(ND)阳性血清、产蛋下降综合症EDS-76单克隆抗体、禽流感H5亚型阳性血清抑制,但能被禽流感H9亚型阳性血清抑制,血凝抑制价为211。该毒株经中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家禽流感参考实验室鉴定为H9N2亚型。对分离株进行的研究结果表明,该毒株为低致病力毒株,其ICPI为0.26,IVPI为0。用第三代鸡胚尿囊液原液0.5 m l静脉注射8日龄樱桃谷鸭,雏鸭死亡率达50%。     

H7N9亚型禽流感病毒RT-PCR检测方法建立

【目的】2013年3月,中国国家卫生和计划生育委员会宣布在上海、安徽地区发现了人感染H7N9亚型流感病毒事件,由于这种新型重组H7N9流感病毒未曾有过感染人或者动物的报道,因此出现了一系列亟待解决的问题,引起了全世界范围的广泛关注。根据H7N9亚型禽流感病毒 HA和NA核苷酸序列,设计并合成靶基因为HA和NA的2对引物,建立快速检测H7N9亚型禽流感病毒的一步法RT-PCR检测方法。【方法】根据测序结果,用DNAStar生物软件进行同源性分析比较,选出H7和N9基因中高度保守且特异的核苷酸区域,用oligo6.0软件设计针对H7和N9基因的引物。用Trizol LS提取RNA,采用一步法Access RT-PCR扩增反应液,建立了一步法检测H7N9亚型禽流感病毒RT-PCR 方法。以H7N9亚型流感病毒为阳性对照,其他亚型流感病毒以及新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊等其他禽病病原作为阴性对照,按所建立的反应体系和反应程序进行RT-PCR反应,验证所建立方法的特异性。对病毒含量为 10^6.5 EID₅₀·mL^-1 的 H7N9 亚型禽流感病毒尿囊液依次进行 10 倍倍比稀释,提取RNA用RT-PCR 方法检测,评价其敏感性。另外,采取双盲试验用荧光定量RT-PCR对该方法进行了比对验证。【结果】用H7亚型特异性引物检测 H1-H15 亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他禽病病原,除H7亚型流感病毒外,其他样品均为阴性;用N9亚型特异性引物检测N1-N9 亚型禽流感病毒和其他禽病病原,仅当前流行的H7N9 亚型 AIV 样品有特异性目的条带,与其他N1-N9 亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他禽病病原均无交叉反应。通过对 H7N9亚型禽流感病毒尿囊液进行10倍倍比稀释检测,证实该方法最低检出量为 1.4×10^2.5 EID₅₀·mL^-1,并可以从阳性棉拭子浸出液中扩增出目的基因片段。【结论】该RT-PCR 方法具有特异性强和准确率高的特点,可以作为H7N9亚型AIV核酸检测的一种有效候选方法。     

石家庄地区商品蛋鸡H9亚型禽流感防治浅析

1 概述近几年,在石家庄部分养殖区域的免疫鸡群中H9亚型禽流感流行不断发生。因免疫程序不当、漏免、疫苗质量、机体的抵抗力及免疫抑制病等原因常造成免疫失败,许多学者已证实AIV可引起禽的免疫抑制,进而导致鸡群的免疫失败以及机体对各种病原微生物的易感性增高。     

H_9亚型禽流感预防与控制措施

H9亚型禽流感近年来发病率呈上升趋势,对养禽业造成严重危害。对2例疑似H9亚型禽流感病例,通过检测HI抗体,初步诊断为H9亚型禽流感感染,结合该病在江苏省海安地区的流行情况,提出预防和控制H9亚型禽流感感染的措施。     

黄羽肉鸡H9亚型禽流感的诊断和防控

H9亚型禽流感属于低致病性禽流感,但近几年其致病性、感染宿主谱等特性都发生了明显增强的趋势,并且由于不是强制免疫的疫病病种,养禽户疏于免疫防范,造成疫情发生和流行的威胁性日益加大。2010年12月在上海浦东新区诊治了一起黄羽肉鸡的H9亚型禽流感,笔者提出了相应的防控措施。