荧光定量PCR检测硬蜱体内莱姆病螺旋体的研究

为建立一个荧光定量PCR检测硬蜱体内莱姆病螺旋体的方法,根据GenBank登录的莱姆病螺旋体鞭毛蛋白FlaB序列,应用生物学软件进行序列比对,在保守的C段区设计与筛选特异引物和TaqMan探针。对荧光定量PCR反应体系与条件进行优化,验证方法的特异性、敏感性,并通过对感染螺旋体的蜱样本的检测,评价该方法的实用价值。结果显示,自然感染莱姆病螺旋体的35份蜱标本检测阳性符合率100%,正常蜱20份标本的检测结果均为阴性。该方法对牛巴贝斯原虫、泰勒原虫、边缘无浆体、金龟子绿僵菌、大肠杆菌等蜱体常见病原微生物所抽提的DNA的检测均呈阴性。荧光定量PCR方法检测质粒的灵敏度可达1×102拷贝/μL。TaqMan荧光定量PCR方法检测硬蜱体内莱姆病螺旋体具有较好的敏感性和特异性,可适于莱姆病的流行病学调查和监控。     

吸血蓖子硬蜱成虫唾腺莱姆病螺旋体重度感染的发现

为了解莱姆病螺旋体在蜱体内的发育生物学,采用直接免疫荧光试验、银染色法组织学及电子显微镜观察螺旋体,结果显示,感染莱姆病螺旋体的饥饿蓖子硬蜱雌虫未吸血与吸血0．5和1天唾腺中无螺旋体。在吸血开始后2天出现唾腺的轻度感染,3天出现唾腺的中度感染,4天和5天出现重度感染。这些结果表明,莱姆病螺旋体媒介蜱唾腺的感染程度随吸血时间的延长而迅速增高,并可在缓慢吸血期的中后期形成重度感染。莱姆病螺旋体在吸血期媒介唾腺内的大量存在,特别是重度感染的发现,为该病原螺旋体由蟀向脊椎动物宿主传播的唾液分泌途径假设提供了有力证据。本研究对莱姆病螺旋体在吸血蟀唾腺内分裂增殖的可能性进行了讨论。     

莱姆病诊断技术研究进展

莱姆病是一种经硬蜱传播的新发人畜共患病,可引起人类的慢性游走性红斑及心脏、神经、关节等多系统受损的疾病,造成病人不同程度的活动障碍和肢体瘫痪。该病在世界范围内广泛分布,我国许多地区是该病的自然疫源地。因此,莱姆病越来越引起人们的重视。伯氏疏螺旋体是引起莱姆病的病原体,因其培养周期长、抗原结构复杂给莱姆病的诊断带来了一定的困难。本文对莱姆病病原体的直接检测、免疫学检测、分子生物学检测和一些新的诊断技术进行了概述。     

莱姆病螺旋体感染对蜱的4个功能基因的转录影响

为探索蜱及蜱传病的防控新策略,了解病原与媒介硬蜱相互作用的分子机制,本研究以莱姆病病原伯氏疏螺旋体感染后对长角血蜱4个功能基因的转录影响进行了研究。将不同浓度梯度的伯氏疏螺旋体显微注射到长角血蜱体内,分不同的时间段提取蜱的总RNA,反转录成cDNA后,用实时荧光定量PCR检测蜱基因的表达水平。结果显示:伯氏疏螺旋体感染对蜱半胱氨酸蛋白酶抑制剂1(HLcyst-1)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂3(HLcyst-3)、卵泡抑素(FRP)、凝血酶抑制剂(Hemalin)4个功能基因的转录均产生了显著影响,但存在时间和剂量相关性,感染后第4天显著诱导了长角血蜱HLcyst-1基因的表达,抑制了Hemalin基因表达。     

莱姆病

莱姆病(Lyme disease，LD)是20世纪70年代发现的一种以蜱作传播媒介，由伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorfere，Bb)感染所致的人畜共患传染病。     

锡林郭勒盟草原莱姆病疫源地调查

本项研究于2000年5月—2001年5月从内蒙古锡林郭勒盟地区，不同草原景现带牛、羊体表和草地采集草原血蝉1800只，用直接荧光抗体法检查蜱带菌情况，带菌率为7.5%(6/80)。晴视野显微镜检查蜱带菌情况，带菌率为2%（2/100）；用间接荧光法进行血清流行病学调查，结果证实，调查点的牛和野鼠均存在莱姆病螺旋体感染，其感染率分别为10%和20%，都高于当地人群平均感染率（7.09%)，上述研究证实内蒙古锡林郭勒盟地区人畜及野生动物均有莱姆病螺旋体感染。     

莱姆病的现状及防治

莱姆病(lymedisease)亦称莱姆疏螺旋体病(lymeborreliosis),是20世纪70年代发现的以蜱作为传播媒介,由伯氏疏螺旋体(borreliaburgdorferi)感染所致的人畜共患传染病,其特征有慢性游走性红斑(ECA),同时伴随发热多汗、头疼、颈强直、肌疼、关节疼等症状。通过对该病的现状的分析,提出防治措施,开展有关疫苗的研究。     

动物莱姆病的研究进展

莱姆病是由伯氏疏螺旋体引起的一种蜱传性人兽共患传染病。1977年美国医生A.C Sleere发现康涅狄格州莱姆镇流行的青少年关节炎是一种独立的疾病,并称为莱姆关节炎。     

吉林省四平市周边地区莱姆病流行情况调查及优势菌株外膜蛋白C的表达

为了解吉林省四平市周边地区伯氏疏螺旋体流行情况,本试验于2017年5-7月分别采集四平市周边地区蜱虫样品共25份。通过筛选扩增伯氏疏螺旋体外膜蛋白C(OspC)基因片段的通用引物、优化反应条件后建立用于检测蜱体内伯氏疏螺旋体的PCR方法。从25份样品中分离到8份阳性样品(阳性率约为32%),经过测序比对发现其基因型均为Borrelia burgdorferi;并以分离到的Borrelia burgdorferi DNA为模板,PCR扩增OspC基因,构建重组质粒pET-30a-OspC,以IPTG诱导蛋白表达,为建立伯氏疏螺旋体ELISA检测方法奠定了基础。     

聚合酶链技术在莱姆病蜱传播途径研究中的应用

采用聚合酶链技术（ＰＣＲ）对采自甘肃省肃南县皇城区的草原革蜱进行了伯氏疏螺旋体传播途径的研究。结果，从３６组草原革的成蜱标梧检测到９组阳性一，阳性率为２５６．０％从３２组幼蜱中检测到７组阳性，阳经为２１．９％；从８组蜱卵中检测到２组阳性，阳性率为２５．０％；还从蜱叮咬的１４份羊皮肤红斑组织中检测到６是性，阳性率为４２．８％，从而证明 的革蜱是该地区莱姆病的传播媒介，既可水平传播，也可垂直传播。     

ON NAVICULAR DISEASE IN THE HORSE

Radiolucent crescents found in the cortical bone of the flexor central eminence are normal variations of equine navicular bones and represent the radiographic presentation of a curvature in the central eminence that is best visualized when a dorsoproximal-palmarodistal beam angle of approximately 45° is used.     

Epizootiologic background of dissimilar distribution of human cases of Lyme borreliosis and tick-borne encephalitis in a joint endemic area

Lyme borreliosis (LB) and tick-borne encephalitis (TBE) are co-endemic in some parts of Europe, however, their distribution differs despite a common tick vector and comparable animal hosts. A serosurvey of game and small mammals was made in a highly endemic area and compared with historical data in human cases; the epidemiologic risk and the population density of game were modelled using a geographic information system. While LB-risk corresponded with an overall population density of game (red deer, roe deer, mouflon, wild boar) regardless of mouse abundance, TBE-risk suggested a dependence on the abundance of mice on the one hand, and game, particularly roe deer, on the other. While the prevalence of TBE-antibodies generally grew with the game’s age, it was virtually constant at about 65% in LB irrespective of species. It implies a cumulation of scarce TBE-infection histories during the game’s lifetime, and thus a limited size of TBE-foci relative to the living space of these animals, as well as omnipresent LB-foci, in which the animals became continuously re-infected. More ecological prerequisites seem necessary to keep TBE circulating in nature which may be responsible for its confined distribution.     

全沟硬蜱围食膜初步观察研究

本工作用光镜和电镜技术对全沟硬蜱的围食膜进行了初步观察研究。结果表明，饥饿幼虫、若虫、成虫以及吸血期雄性成虫不具围食膜。吸血期幼虫、若虫及雌性成虫最晚分别于吸血开始后20、20及18小时出现了单层结构的围食膜；缓慢吸血期围食膜的厚度持续增加，而在快速吸血期其厚度却会显著减小。饱血后发育期围食膜不断增厚，愈来愈拱曲，与肠壁的距离不断扩大，并形成多层结构；至少分别于饱血后12、25及11天，仍能在幼虫、若虫及雌性成虫肠腔观察到完好状态的围食膜。全沟硬蜱是我国北方地区多种血液传播病原体的重要媒介，其围食膜的发现及围食膜形态变化的初步描述，对进一步认识这些病原体在全沟硬蜱体内迁移扩散规律、发育动态以及向宿主的传播途径，可提供有益的启示。     

鸡新城疫消化道免疫的研究 Ⅱ、幼雏消化道免疫组织化学及功能研究

本实验采用免疫组织化学方法及酶联免疫吸附试验(ELISA)对鸡新城疫弱毒活苗消化道直接免疫后,对其免疫机制和免疫效果进行了研究。 7日龄前,雏鸡肠道无免疫球蛋白G阳性细胞出现。7日龄后出现并缓慢上升,第二次免疫(嗉囊免疫、饮水免疫)后增长明显,出现峰值。免疫组与对照组差异显著,表明雏鸡胃肠道具有保持产生局部抗体的功能,并且血清IgG抗体效价的消长与之呈现相关免疫状态。胃肠道T淋巴细胞在第一次免疫(嗉囊免疫、饮水免疫)后10天和二免后5～10天出现峰值,然后下降并稳定在一定水平,证明细胞免疫参与鸡新城疫消化道免疫。