团头鲂3个选育群体遗传纯度的微卫星分析

为从基因层面了解团头鲂3个选育群体的遗传纯度,以团头鲂"浦江1号"选育奠基群体(F0)为对照组,采用14个多态性转录组微卫星标记评估了团头鲂3个选育群体的遗传纯度和遗传多样性。结果显示,3个选育群体在14个微卫星位点的平均观察纯合度为0.425 6~0.508 9,平均期望纯合度为0.2482~0.258 7,平均Shannon信息指数为1.597 1~1.682 5,群体内个体间的平均遗传距离为1.138 2~1.285 0,个体间的平均遗传一致度为0.2767~0.3204。3个选育群体的平均Shannon信息指数均高于F0群体,但差异不显著(P0.05)。遗传一致度和期望纯合度在3个选育群体间的变化趋势一致,即:A群体C群体B群体。群体间Nei氏标准遗传距离(DS)为0.180 8~0.798 9,A群体与B群体间遗传距离最小(DS=0.180 8),F0群体与C群体间遗传距离最大(DS=0.798 9)。总体而言,C群体遗传多样性水平最高,F0群体遗传多样性水平最低。对于3个选育群体而言,A群体的遗传纯度最高,B群体的遗传纯度最低。研究结果为选育群体的进一步选育纯化及种质资源聚合利用提供了科学依据。     

团头鲂3个选育群体的选择压力分析

团头鲂选育群体基因组选择信号的检测有助于研究人工选育条件下基因组的进化机制,为团头鲂的进一步遗传改良提供依据。以团头鲂"浦江1号"选育奠基群体(F0)为对照组,以3个团头鲂选育群体为试验组,采用经典的Ewens-Watterson中性检验和基于3种算法(岛屿模型、分级岛屿模型、贝叶斯似然法)的FST-离群值点检验,在14个转录组微卫星位点上进行选择信号检测。结果显示,F0群体中所有位点均为中性位点,选育群体A在Mac927位点和Mac158位点受到了正向选择压力,选育群体B在Mac158位点受到了正向选择压力,选育群体C在Mac927位点和Mac158位点受到了正向选择压力。由此可见,自1985年起的连续世代人工选育已在团头鲂基因组中留下了可检测到的选择信号。3个选育群体均在Mac158位点检测到选择信号,表明3个选育群体受到的人工选择方向比较接近。     

团头鲂耐低氧新品系雌核发育群体遗传结构的微卫星分析

为了指导团头鲂耐低氧群体的后续选育工作开展,利用筛选出的20对微卫星引物,比较分析了团头鲂耐低氧群体(TN)及其减数分裂(TNM)、有丝分裂(TNDH)雌核发育后代群体的遗传结构;结果显示,团头鲂TN、TNM、TNDH及团头鲂"浦江1号"(TPJ1)对照的平均等位基因数(N_a)分别为3.90、3.55、3.45、4.25,平均观测杂合度(H_o)分别为0.7853、0.3934、0.2768、0.8075,平均期望杂合度(H_e)分别为0.6491、0.5563、0.4870、0.6855,平均多态信息含量(PIC)分别为0.5695、0.4796、0.4181、0.6105,TPJ1对照群体的遗传多样性最高,TN群体较TPJ1群体的遗传多样性有所降低,但不存在显著差异,仍保持了较高的遗传杂合度,而2个雌核发育群体(TNM和TNDH)的遗传多样性显著低于TPJ1和TN群体,TNDH群体的遗传多样性显著低于TNM群体。Hardy-Weinberg平衡遗传偏离指数也表明团头鲂TPJ1和TN群体出现杂合子过剩现象,而TNM、TNDH雌核发育群体则出现了杂合子缺失现象,纯合子比例高。聚类分析表明,TPJ1和TN群体聚类成一个分支,而TNM、TNDH雌核发育群体聚类成另一分支,产生了一定程度的遗传分化。在TN群体中实施雌核发育可加速遗传物质的纯合,可用于团头鲂进一步耐低氧性状基因的纯化。     

大黄鱼连续4代选育群体遗传多样性与遗传结构的微卫星分析

利用13个多态性微卫星位点分析了大黄鱼官井洋优快01品系F1到F44个选育世代的遗传结构与遗传多样性变化情况。结果显示,随着选育的进行,4个世代群体遗传多样性指标值渐次下降,F1到F413个微卫星位点的平均多态信息含量从0.638下降到0.524,平均等位基因数从5.462下降到4.308,平均观测杂合度从0.779下降到0.532,平均Shannon多样性指数从1.356下降为1.092。F1与其后各代遗传相似系数逐渐减小(从0.7194到0.5813),遗传距离逐渐增加,而相邻世代间的遗传相似性逐步升高,遗传分化指数(FST)渐次变小(F1～F2为0.0619,F2～F3为0.0511,F3～F4则为0.0475)。随着选育的进行,微卫星位点LYC0002和LYC0054等位基因频率有规律地发生变化,推测其可能与选育性状存在遗传上的相关。结果表明,经过连续4代的选育,部分不利基因遭到淘汰,选育群体的遗传基础逐步得到纯化,基因型逐渐趋向纯合、稳定,经进一步的选育可望获得较稳定的品系。     

长江刀鲚选育和野生群体遗传多样性的微卫星分析

利用微卫星标记技术,对长江刀鲚野生群体(YS)与3个连续选育世代群体(F_1、F_2、F_3)间的遗传多样性进行了分析。12对多态性微卫星引物总共检测到等位基因82个,平均每对引物获得等位基因6. 83个。4个群体的平均有效等位基因数(Ne)、平均观测杂合度(Ho)、平均期望杂合度(He)以及平均多态信息含量(PIC)分别为3. 47～4. 10、0. 400 0～0. 516 7、0. 684 4～0. 738 1和0. 646 4～0. 701 2。F_1、F_2、F_3之间的遗传分化微弱(FST0. 05),并与YS具有中等程度的遗传分化(0. 05 F_(ST)0. 15)。分子方差分析(AMOVA)结果显示,大部分的遗传变异来源于个体间(93. 66%),仅有6. 34%的遗传变异来源于群体间。F_1、F_2、F_3的遗传变异水平低于YS,且呈现出伴随着选育世代的进行而降低的趋势,表明选育群体随着人工选育的进行而日趋纯化,但仍然具有丰富的遗传多样性和进一步选育的潜力。     

团头鲂野生、驯养、选育3类遗传生态群体遗传变异的线粒体DNA分析

通过对线粒体DNA控制区和COⅠ基因序列的联合分析,研究了团头鲂(Megalobrama amblycephala)3类遗传生态群体(包含4个野生群体、2个驯养群体、1个选育良种"浦江1号"群体)的遗传多样性和遗传分化情况.结果表明:(1)在所分析的7个群体中,共确定了64种单倍型,群体间无共享单倍型.(2)4个野生群体内线粒体DNA的单倍型多样度(Hd)在0.857～0.943之间,核苷酸变异位点数在31～40之间,核苷酸多样性指数(π)在0.275%～0.461%之间,平均核苷酸差异数(K)的范围为4.043～6.800;2个驯养群体的相应参数变化范围分别为0.714～0.800、18～21、0.122%～0.175%、1.800～2.586,均低于野生群体;选育群体的相应参数分别为0.843、23、0.193%、2.843,低于4个野生群体,但高于2个驯养群体.以上4种多样性参数在7个群体中的变化趋势一致.(3)7个群体之间的平均遗传距离在0.000 6～0.003 5之间,遗传分化指数(FST)在0.010 9～0.133 1之间.4个野生群体间FST值差异不显著(P＞0.05),而2个驯养群体间FST值差异显著(P＜0.05),它们与选育群体间的FST值差异也显著(P＜0.05).以上结果表明,生存环境的殊异(敞开的天然水体,封闭的驯养池塘)和人工选择(严格有序的科学选育)对种群遗传结构影响巨大,导致鱼类不同遗传生态类型群体间产生遗传变异和遗传分化.     

基于线粒体DNA COII基因序列团头鲂3个选育群体的遗传变异分析

为了从遗传多样性的角度评估团头鲂不同选育群体的选育潜力,以团头鲂"浦江1号"选育奠基群体(F_0)为对照组,采用线粒体DNA COII基因标记评估了团头鲂3个选育群体的遗传多样性,分析了它们的选育潜力。结果显示,在3个选育群体的72条序列中,共确定了15种单倍型,群体间存在6种共享单倍型,单倍型多样性(H)的范围为0.731 9～0.818 8,核苷酸多样性(π)的范围为0.001 108～0.001 765,平均核苷酸差异数(K)的范围为0.649～1.034,群体内核苷酸序列间平均遗传距离的范围为0.000 930～0.001 432,3个选育群体的遗传多样性水平(H、π、K)均高于F_0群体。3个选育群体间Kimura双参数遗传距离和遗传分化指数(F_(ST))的范围分别为0.001 249～0.001 450和0.012 34～0.124 50,A群体与C群体间成对F_(ST)值差异显著(P0.05),F_0群体与A群体间成对F_(ST)值差异极显著(P0.01)。结果表明,3个选育群体的遗传多样性较高,选育潜力较大;同时,选育群体间(A群体与C群体间)、选育群体与奠基群体间(A群体与F_0群体间)均存在显著的遗传分化,表明不同方向上的累代人工选育已在一定程度上改变了选育群体的遗传结构。     

牙鲆3个养殖群体遗传结构的微卫星分析

采用微卫星标记分析技术,用5个多态性的微卫星标记对来自3个不同国家（中国、日本和韩国）的牙鲆养殖群体进行了遗传多样性研究。研究结果表明,3个牙鲆群体平均等位基因在4．8～5．6之间,平均观测杂合度（H0）在0．3917～0．5643之间,平均期望杂合度（HE）在0．5981～0．6264之间。有多个位点在不同的群体中偏离哈代-温伯格平衡。遗传距离分析表明,中国群体与日本群体遗传距离最近,韩国群体与日本群体遗传距离最远。分子方差分析（AMOVA）表明,群体内遗传变异与群体间遗传变异分别占总遗传变异的92．44％和7．56％,固定系数（R）为0．0752（P〈0．001）,表明牙鲆3个养殖群体遗传分化显著。     

草鱼选育群体不同世代遗传变异的微卫星分析

为了分析草鱼(Ctenopharyngodon idella)选育群体不同世代的遗传变异和遗传结构, 本研究利用了已建立的一套标准微卫星标记对草鱼长江选育群体 F0、F3、F4 进行了遗传变异的评估, 并与黑龙江选育群体和珠江选育群体进行了遗传变异的比较分析。实验结果表明长江选育群体的各世代均具有高度的遗传多样性(PIC＞0.05), 且长江选育群体的遗传多样性相对于黑龙江和珠江选育群体的遗传多样性水平更高(P＜0.05)。遗传分化指数(Fst)分析结果表明, 长江选育群体 F0、F3、F4 之间遗传分化的水平较低(0     

团头鲂“浦江2号”连续2代雌核发育群体的微卫星遗传结构

为获得团头鲂(Megalobrama amblycephala)的纯合品系, 本研究以团头鲂“浦江 2 号”作为亲本, 采用紫外线灭活的鲤鱼精子刺激团头鲂卵子, 经冷休克抑制第二极体排出的方法获得异源雌核发育一代群体(Meio-G1)和雌核发育二代群体(Meio-G2)。利用筛选出的 20 对微卫星引物, 研究分析了团头鲂“浦江 2 号”正常群体、雌核发育一代群体(Meio-G1)和雌核发育二代群体(Meio-G2)的遗传特征。结果表明, 正常群体、Meio-G1 和 Meio-G2 中, 分别扩增出 129、99、84 个等位基因, 平均等位基因数(Na)分别为 4.30、3.30、2.80, 平均有效等位基因数(Ne)分别为 3.23、 2.24、1.76, 平均观测杂合度(Ho)分别为 0.8067、0.4067、0.1733, 平均纯合度(H)分别为 0.2035、0.6000、0.8263, 平均多态信息含量(PIC)分别为 0.6198、0.4701、0.3628, 表明 Meio-G1 和 Meio-G2 相较于正常群体其遗传多样性下降, 其中 Meio-G2 的遗传多样性最小。Hardy-Weinberg 平衡遗传偏离指数表明 Meio-G1 和 Meio-G2 出现杂合子缺失的现象, 而正常群体则表现为杂合子过剩。聚类分析显示, 正常群体与 Meio-G1 共同汇聚成为一支, 而 Meio-G2 单独成为一支, 产生了一定程度的遗传分化。本研究结果表明, Meio-G2 的纯合度高、遗传多样性低, 是良好的育种材料, 可为团头鲂的选育工作提供重要参考依据。     

湖北淤泥湖团头舫mtDNA限制性片段长度多态性的研究

用ＢａｍＨＩ、ＢｇｌＩ、ＣｌａＩ、ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄⅢ、ＫｐｎＩ、ＰｓｔＩ，ＰｖｕⅡＳａｃⅡ、ＳａｃＩ、ＳｃａＩ、ＸｂａＩ，ＸｂａＩ和ＸｈｏＩ十四种限制性内切酶对来源于湖北淤泥湖的团头舫进行线粒体ＤＮＡ限制性片估长度多态性研究。初步表明ＤＮＡ上切点呈现不同程度的多态性。共检测到六种母集集团。发现一尾团头舫ｍｔＤＮＡ分子大小比普通型鱼ｍｔＤＮＡ小约０．７０ｋｂ。呈现出ｍｔＤＮＡ发子大小多态现象。     

团头鲂双向选育效应研究

报道１９８６￣１９９９年团头鲂正向选育和逆向选育的两种截然不同的效果。正向选育采用混合选育法,每代从鱼苗到亲鱼的总选择率约为万分之四,选留健壮的较大个体,第五代成鱼阶段的平均日增重率比对照系（原种）提高２９．１％,即选育效应每代平均为＋５．８％。逆向选育为全兄妹近交,后代随机留养,近交系第三代成鱼阶段的平均日增重率比对照系（原种）降低１６．６％,即选育效应每代平均为－５．５％;近交系每第四代当年苗种阶段畸形率高达２．８％,越冬成活率比对照系低２８．４％,比选育系低４８．３％;选育系的越冬成活率比对照系提高３８．４％。本研究证明,科学的良性选育可大大提高养殖性能;近亲交配可导致养殖性能的迅速降低,必须严加防范。     

Dietary histidine requirement of juvenile blunt snout bream (Megalobrama amblycephala)

An eight‐week feeding trial was conducted to determine the dietary histidine requirement of juvenile blunt snout bream. The results showed that final body weight, weight gain rate and specific growth rate significantly increased with increasing dietary histidine levels up to 9.9 g/kg (p < .05) and decreased gradually thereafter, while feed conversion ratio showed a converse trend. The survival rate, condition factor, viscerosomatic and hepatosomatic index were not significantly affected by the graded dietary histidine levels (p > .05). About 9.9 g/kg dietary histidine level significantly improved whole‐body protein and lowered moisture content. The contents of plasma total protein, cholesterol, urea and triglyceride levels were not significantly affected by dietary histidine levels. About 9.9 g/kg dietary histidine level significantly upregulated target of rapamycin and insulin‐like growth factor mRNA levels (p < .05), and 12.1 g/kg and 14.2 g/kg dietary histidine levels significantly upregulated eukaryotic translation initiation factor 4E‐binding protein 2 and ribosomal protein S6 kinase‐polypeptide 1 mRNA levels (p < .05). Based on second‐degree polynomial regression analysis of weight gain rate, and specific growth rate against dietary histidine levels, the dietary histidine requirement for juvenile blunt snout bream was estimated to be 11.2 g/kg of diet, corresponding to 36.1 g/kg of dietary protein.     

果寡糖对急性氨氮应激下团头鲂非特异性免疫指标的影响

为研究氨氮应激条件下果寡糖对团头鲂(Megalobrama amblycephala)非特异免疫指标的影响,试验选择360尾初重为13.5 g的团头鲂随机分为3组,每组4个重复,每缸30尾鱼,对照组投喂基础日粮,试验组分别投喂果寡糖(FOS)添加量为0.4%和0.8%的日粮,饲养8周,养殖试验结束后,用10 mg/L的NH4Cl对24尾鱼进行氨氮应激试验。试验结果显示,氨氮应激前,0.4%FOS组的血液谷丙转氨酶(GPT)活性显著低于对照组和0.8%FOS组,在氨氮应激后,0.4%FOS组的GOT活性有降低的趋势,但仅在24 h时显著低于0.8%组,0.8%组和对照组之间并无显著差异;血清酸性磷酸酶、补体3(C3)、补体4(C4)、酚氧化酶都出现先升高后降低的趋势,分别在应激后的3、24、12、12 h达到最大值。此外,应激前0.4%FOS组补体C3、C4、酚氧化酶的活性都显著高于对照组,应激后0.4%FOS组C3在3 h处显著高于对照组,但是在其它时间点各组差异并不显著,果寡糖添加水平和采样时间对这些免疫指标都无显著的交互作用。结果表明饲料中添加0.4%的果寡糖能够提高团头鲂的免疫力指标活性,提高了团头鲂抗氨氮应激的能力。     

Dietary methionine requirement of juvenile blunt snout bream (Megalobrama amblycephala) at a constant dietary cystine level

A 9‐week feeding trial was conducted to investigate the dietary methionine requirement of juvenile Megalobrama amblycephala at a constant dietary cystine level. Six semipurified diets were formulated to contain graded dietary methionine levels from 3.9 to 15.4 g kg^?1 in about 2.5 g kg^?1 increments in the presence of 2.2 g kg^?1 cystine. Results showed that specific growth rate (SGR) and protein efficiency ratio (PER) significantly increased with increasing dietary methionine levels from 3.9 to 12.4 g kg^?1 and thereafter kept stable. Maximum protein productive value (PPV), nitrogen retention efficiency (NRE) and liver weight were observed in 8.5 g methionine kg^?1 diet. Protein contents in whole fish body were positively correlated with dietary methionine level, while lipid contents were negatively correlated with it. Morphological index and hepatic glutamate‐pyruvate transaminase (GPT) activities were independent of dietary methionine levels. However, dietary methionine supplementation significantly improved haematological parameters, plasma methionine and total essential amino acid contents and hepatic glutamate‐oxaloacetate transaminase (GOT) activities. Analysis of dose response using broken‐line regression on the basis of SGR and PPV versus dietary methionine level estimated the optimum dietary methionine requirements of juvenile M. amblycephala to be between 8.5 and 8.4 g kg^?1 of diet (25.0 and 24.7 g kg^?1 of protein) in the presence of 2.2 g kg^?1 cystine, respectively. Hence, the corresponding total sulphur amino acids requirements of this species were calculated to be 10.7 and 10.6 g kg^?1 of diet (31.5 and 31.2 g kg^?1 of dietary protein).     

团头鲂同源四倍体、倍间三倍体与二倍体红细胞的形态特征比较

通过比较同源四倍体、倍间三倍体与二倍体团头鲂（Megalobrama amblycephala）的红细胞、红细胞核的形态大小差异,探讨不同倍性团头鲂的红细胞形态遗传特征。结果表明：（1）团头鲂多倍体（同源4n和倍间3n）的红细胞数量显著低于二倍体（2n）团头鲂（P〈0．05）。其中,倍间三倍体团头鲂每毫升血液的红细胞数为二倍体的78．95％,而同源四倍体的红细胞数量下降幅度较大,仅为2n团头鲂的56．87％。（2）团头鲂同源四倍体、倍间三倍体的红细胞短径和长径、核短径和长径、红细胞表面积、红细胞体积和核体积均依倍性增加而显著增大（P〈0．05）;其中,又以核体积增大最为显著,同源四倍体、倍间三倍体的核体积分别为2n团头鲂的1．97倍和1．39倍。（3）团头鲂同源四倍体每毫升血液红细胞的总体积和总表面积,均明显低于二倍体和倍间三倍体团头鲂（P〈0．05）;倍间三倍体每毫升血液红细胞的总体积要多于二倍体团头鲂（P〈0．05）,但红细胞的总表面积在倍间三倍体与二倍体团头鲂间不存在显著差异（P〉0．05）。（4）在团头鲂同源四倍体中还观察到一定比例的异常红细胞现象。     

Genetic parameter estimates for growth‐related traits of blunt snout bream (Megalobrama amblycephala) using microsatellite‐based pedigree

Blunt snout bream (Megalobrama amblycephala) is an herbivorous freshwater fish species native to China and has been recognized as a main aquaculture species in the Chinese freshwater polyculture system with high economic value. The genetic parameter estimates for important economic traits are needed for its selective breeding. The aim of this study was to estimate the heritabilities for its growth‐related traits and explore the genetic and phenotypic correlations among the traits using microsatellite‐based pedigree approach. Offspring from a mass‐spawning of 92 broodstocks (42 sires and 50 dams) were reared in a communal pond and nine microsatellites were used to identify the parents of each sampled offspring. Of 749 offspring randomly selected, 708 (94.53%) could be assigned directly to a single parental pair, which was used for heritability estimates. Data were analysed using the method of restricted maximum likelihood (REML) using animal model and the results showed that the heritabilities of body weight, body length, total length and body height were 0.65, 0.53, 0.53 and 0.50, respectively. High genetic correlations were found among these four traits. According to these results, selection for growth seems to be feasible in M. amblycephala and the other growth traits will be heightened accordingly with the selection based on body length.     

团头鲂“浦江1号” 选育后期世代群体同野生群体间遗传变异的ISSR分析

以团头鲂“浦江1号” 选育后期3个世代群体（F₇、F₈、F₉）为试验对象、其选育奠基群体（1985年淤泥湖野生群体）后代、淤泥湖野生群体（2007年）、梁子湖野生群体（2007年）为对照材料,通过ISSR标记技术分析,并通过部分样本的细胞色素b基因测序的补充验证,了解选育所产生的遗传变异及野生群体遗传结构现状。主要结果：（1）从100个ISSR引物中筛选出26个引物,扩增出清晰、可重复的条带共164条,多态性条带比例49.39%。细胞色素b基因在选育良种3个世代中只发现一种单倍型。（2）选育群体同选育奠基群体后代、野生群体间的遗传差异显著,如群体多态位点百分数,F₉（28.05%）比选育奠基群体后代（40.24%）减少了30.29%,比淤泥湖野生群体（41.46%）减少了32.34%。选育群体同淤泥湖野生群体间的遗传相似系数最小（0.935 0）,距离最大（0.067 2）,两两配对F_ST值最大（F_ST=0.305 72）;UPGMA法构建系统进化树表明,选育群体同野生群体处于两个大分支,而在野生群体大支中,选育奠基群体后代与淤泥湖原种野生群体间配对F_ST值最小（F_ST=0.050 45）。（3）选育群体F₇、F₈、F₉各世代间遗传分化虽弱（低G_ST 0.141 7值,高N_m 3.027 9值）,但多态位点百分数、位点基因平均多样性、Nei氏基因多样性、群体内Shannon多样性指数等遗传参数仍然都呈现随选育世代数的累进而降低的趋势。（4）ISSR比细胞色素b基因更适合近缘种的相关关系研究。（5）经过二十多年9代的选育,相对于野生群体,团头鲂“浦江1号”良种已产生了明显的遗传分化,性状已相当稳定,但离选育极限尚有一定距离,今后应在继续监测其遗传结构变化的基础上,进一步挖掘选育潜力,同时要避免种质混杂、近交衰退及瓶颈效应等的发生。