"鸡尾酒疗法"防治艾滋病有进展

美国科学和艺术院院士、世界著名艾滋病研究学者何大一教授是“鸡尾酒疗法”的创始人。“鸡尾酒疗法”是用复合药物将人体内蛋白突变株的抗药性降到最低的治疗艾滋病的一种方法。何教授谈到“鸡尾酒疗法”时说 ,研究已经搞清哪些治疗药物抗病毒 ,哪些药物可以杀死病毒 ,这些研究为艾滋病毒在人体内产生的不同作用提供了重要的依据 ,也为科学家们正在进行的研制艾滋病防治疫苗工作提供了重要的数据。何教授指出 ,中国防治艾滋病的形势非常严峻 ,中国应该吸取其他国家在防治艾滋病方面的教训 ,避免走弯路 ,要将艾滋病造成的灾害降到最低。他表…     

猪圆环病毒2b型Cap蛋白多克隆抗体制备及其生物学特性分析

为了使猪圆环病毒2b型(PCV2b)Cap蛋白在猪圆环病毒病等疾病的诊断和防制方面取得更有效的应用,本试验将编码PCV2b Cap蛋白的ORF2基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,并构建pET-32a-ORF2重组质粒,重组质粒转化大肠杆菌BL21受体菌后,通过IPTG诱导表达重组蛋白,将重组蛋白用镍柱进行纯化并免疫大白兔,制备兔抗PCV2b Cap蛋白的多克隆抗体。利用ELISA、Western blotting、间接免疫荧光及病毒交叉反应等试验对制备的多克隆抗体进行生物学特性检测。ELISA检测结果显示,该抗体效价可达到1:2¹⁶;Western blotting检测结果显示,该多克隆抗体可与PCV2b产生特异性的反应条带,说明其具有较好的反应活性;间接免疫荧光试验结果显示,该多克隆抗体能识别感染PK-15细胞中的PCV2b,说明该多克隆抗体具有鉴别诊断PCV2b的能力;病毒交叉试验结果显示,该多克隆抗体能与PCV2b反应,而不与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪轮状病毒(PRoV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)等猪源病毒发生交叉反应,表明该多克隆抗体具有高度特异性。本试验制备的抗PCV2b Cap蛋白多克隆抗体为PCV2b病原特性研究及该病的临床检测奠定基础。     

猴子体内蛋白质抗体可阻止艾滋病毒复制

科学家在新一期英国《自然》杂志上报告说,他们识别出猴子体内一种可以阻止艾滋病病毒自我复制的蛋白质阻滞抗体,这开辟了预防病毒感染和抑制其在人体内扩散的新前景,也为人类在病毒感染初期进行干预治疗提供了新思路。美国马萨诸塞州达娜-法伯癌症研究所的研究人员发现,这种蛋白质抗体名为″Trim5-alpha″在人体内也存在,它可以阻止艾滋病病毒在体内的自我复制。病毒的复制过程分三步:其外表形成保护壳;将其遗传物质植入受感染的细胞;病毒遗传物质与细胞原来的DNA结合。但这一过程如果不能较快完成,病毒会衰变,失去传染能力。研究人员认…     

猪圆环病毒2型Rep蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

本研究旨在制备猪圆环病毒2型(PCV2)Rep蛋白单克隆抗体。PQE30-PCV2Rep蛋白在IPTG的诱导下表达,用SDS-PAGE对表达产物进行检测。将纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备单克隆抗体,ELASA法鉴定抗体亚型及效价。结果显示重组蛋白PQE30-PCV2Rep得到高效表达,筛选获得了3株稳定分泌抗Rep蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系1G4、2G4和6H12,其分泌的抗体分别为IgG2a、IgG2b、IgG2b亚型。其中,6H12抗体效价为256K,浓度为0.47mg/mL,纯度90%。本研究制备的单克隆抗体有较好的生物学特性,为PCV2的研究及快速诊断提供了新的方法。     

K亚群禽白血病病毒多克隆检测抗体的制备和特性分析

为制备识别K亚群禽白血病病毒(ALV-K)兔源多克隆抗体,将含ALV-Kgp85基因的表达质粒在大肠杆菌体内进行诱导表达,获得含his标签的大小为55KD的重组蛋白;将纯化后的表达蛋白免疫接种5只青年兔,三次加强免疫后检测收获血清抗体,ELISA检测血清抗体效价;对血清抗体进行纯化并检测抗体亚型,Western-blot和IFA检测抗体对ALV-Kgp85蛋白和病毒识别特性。结果表明,获得的抗体效价达到8×10~7,抗体亚型为IgG2b,该抗体能够特异性识别ALV-Kgp85蛋白和DF1细胞中的ALVK病毒,可以用于IFA临床检测,为K亚群禽白血病的快速检测奠定了基础。     

日本从蚕丝中提取出抗HIV物质

最近 ,日本农业生物资源研究所科学家玉田靖和圣玛利亚医科大学教授中岛秀喜合作 ,使用丝蛋白硫酸化的方法研制出具有抗艾滋病病毒的物质。艾滋病病素的英文缩写为“ＨＩＶ” ,由于它附在免疫细胞———Ｔ细胞的表面蛋白质上不断感染、增殖 ,致使人体免疫细胞死亡而发生艾滋病。据这两位科学家向新闻媒体提供的科研信息介绍 ,他们在把丝蛋白硫酸化的过程中 ,制造出一种新的抗血液凝固剂 ,并推断它的机制与目前用于治疗艾滋病的一种药物肝素相似。他们在对这种物质进行“抗艾滋病病素活性评估”的实验中 ,发现它有阻止病毒与免疫细胞表面蛋白…     

犬2型腺病毒纤突蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

犬2型腺病毒(canine adenovirus-2,CAV-2)主要引起犬科动物的传染性呼吸道疾病和消化道疾病，且其传染性极强，全球范围内感染率非常高，但现有的临床防治措施难以完全阻断病毒的传播和快速特异性治疗患病动物。为了获得可用于CAV-2基础病毒学研究和临床诊治所需的单克隆抗体，本研究将浓缩纯化的CAV-HN45株灭活后免疫BALB/c小鼠，采用细胞融合技术将免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合，经免疫过氧化物酶单层细胞试验和间接免疫荧光试验筛选出2株能分泌CAV FIBER蛋白抗体的单克隆杂交瘤细胞系：1-A12-C6、8-A12-B10,抗体亚类分别为IgG2a和IgG2b。腹水纯化后质量浓度为1 g/L抗体的间接免疫荧光效价为1-A12-C6:1∶8 192; 8-A12-B10:1∶2 048,2株单克隆抗体均不能用于免疫印记试验检测。抗体具有体外中和病毒的活性，1-A12-C6和8-A12-B10抗体的CAV中和效价分别为1∶256和1∶64。本研究单克隆抗体的成功制备为建立快速、高效的CAV-2免疫学检测技术和CAV-2的防治提供了依据。     

猪圆环病毒2a/2b亚型病毒株灭活疫苗及其重组Cap蛋白亚单位疫苗的交互免疫实验

为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型病毒株及其重组Cap蛋白(rCap)之间的交互免疫,本研究采用PCV2a-LG株和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-rCap和PCV2b-rCap)亚单位疫苗.选用8周龄BALB/c鼠165只,随机分成11组,每组15只,用上述4种疫苗各免疫2组,以PCV2a或PCV2b株攻毒.攻毒后,所有鼠均未见肉眼可见的临床症状和病理变化.采用IPMA法检测抗体,4种疫苗于免疫第3周抗体转阳,第5周抗体效价达到1:200～1:800倍,其中PCV2a-rCap免疫组抗体效价最高.2种灭活苗和PCV2a-rCap免疫组攻击同型或异型病毒株均可以获得完全保护.以PCV2a和PCV2b各为指示病毒对病毒抗血清和rCap蛋白抗血清进行交叉中和试验,同型病毒株与同型血清的中和抗体效价均高于异型病毒株.病理观察显示,免疫鼠均未见明显病理变化,攻毒对照鼠肺脏出现一定程度的病理损伤.本研究表明,病毒灭活疫苗及其rCap亚单位疫苗PCV2a和PCV2b可提供交叉保护.     

科学家发现了与HIV-1感染传播有关的蛋白

某国际研究小组已证实发现了与HIV-1入侵有关的宿主细胞的一个蛋白家族，因此对该病毒的传播有了更本质的认识。对这些蛋白及其之相关蛋白的研究，将带领人类找到治疗HIV-1和有同样入侵机制的其它病毒疾病的更好方法。和其它囊膜病毒一样，HIV-1首先得侵入宿主细胞，然后将感染传播给其它细胞。HIV的箝制蛋白包含一个特殊的氨基酸序列，该蛋白能启动人肿瘤基因101(TSG101)。然后，HIV病毒利用TSGIOI完成对蛋白排列和囊泡形成机制的控制，并达到自己的入侵目的。     

科技进展

<正>猪圆环病毒2型在衣壳蛋白234氨基酸发生突变提高病毒毒力猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,在世界范围内给猪业生产造成巨大的经济损失。其主要有两个基因型:PCV2a和PCV2b。在中国和其他国家已经出现PCV2b基因型病毒的衣壳蛋白的ORF2区域发生突变的毒株。对新出现的PCV2b基因型突变株毒力的确定是非常必要的,把它和PCV2a、PCV2b基因型毒株进行比较,调查突变病毒的毒力是否更强。     

猪源CD163受体蛋白多克隆抗体的制备及其PRRSV阻断效力研究

为了制备猪源CD163受体蛋白鼠源多克隆抗体并检验其病毒阻断效力,采用RT-PCR方法扩增了猪肺泡巨噬细胞(PAM)CD163受体SRCR4-6功能区域片段,将其克隆至载体pET-32a中,并在大肠杆菌中表达重组CD163受体蛋白,纯化后的重组蛋白与弗氏佐剂充分混合乳化;采用皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,经3次免疫后获得多克隆抗体,应用间接ELISA方法检测抗体含量,以病毒阻断试验和间接免疫荧光法验证其病毒阻断效力。结果显示:重组蛋白主要以包涵体的形式表达,相对分子量约为50 kDa,制备的CD163受体蛋白多克隆抗体含量较高,经2～8倍稀释后,抗体阻断PRRSV感染细胞的能力逐渐下降。研究表明,在大肠杆菌中成功表达了PRRSV重组CD163受体蛋白,制备的鼠源多克隆抗体具有较明显的阻断PRRSV感染细胞的效力。本研究为深入研究病毒的入侵机制和PRRSV的防控提供了试验基础和新的思路。     

检测绵羊进行性肺炎病毒的血清学方法 美国国家动物病中心的方法(1983年)

美国国家动物病研究中心(NADC) 的Cutlip博士报告使用琼脂胶免疫扩散(AGID)试验检测绵羊进行性肺炎病毒(OPPV)(又称梅地—维士那maedi/visna病毒)的抗体。通常是绵羊产生抵抗病毒颗粒的一种外围醣蛋白和另一种内结构蛋白的抗体。一般是绵羊的对外围醣蛋白的抗体可以持续终身。因此可以将检测系统进行标准化后,用于检测病毒醣蛋白抗原。操作程序如后:     

经典和高致病性PRRSV疫苗株嵌合病毒的构建及其免疫原性分析

为研究经典和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)疫苗株间的生物学差异,本实验以经典PRRSV疫苗株CH-1R的全长感染性克隆p CH-1R为骨架,利用反向遗传操作技术分别将其ORF1a、ORF1b和ORF2-7替换为HP-PRRSV Hu N4-F112的相应片段,构建3个全长c DNA嵌合质粒。将构建的3个重组c DNA质粒经体外转录后转染BHK-21细胞,并于Marc-145细胞中传代,拯救出3种嵌合病毒,分别命名为r CH-1R-T1a、r CH-1R-T1b和r CH-1R-T27。病毒一步生长曲线结果表明,3种嵌合病毒在Marc-145细胞中的生长特性与亲本病毒CH-1R基本一致;动物实验结果显示,嵌合病毒实验组血清中PRRSV N蛋白抗体阳转率分别为3/3(r CH-1RT1a)、2/3(r CH-1R-T1b)和1/3(r CH-1R-T27),而CH-1R免疫组血清N蛋白抗体检测始终为阴性。以上结果表明,HP-PRRSV Hu N4-F112非结构蛋白在N蛋白抗体产生中起关键辅助或协同作用。     

哈尔滨兽医研究所发现诱导降解艾滋病病毒的细胞分子

<正>近日,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所基础免疫创新团队在研究中获得重要发现:内质网I型α-甘露糖苷酶能够诱导艾滋病病毒囊膜糖蛋白降解,继而抑制艾滋病病毒的复制,最终有望达到治疗的目的。该研究结果发表在近期美国出版的《生物化学杂志》上。这是该团队继去年首次揭示人体内存在降解艾滋病病毒囊膜糖蛋白的天然     

猪流行性腹泻病毒血清学监测和监视方法酶联免疫吸附测定(ELISA)的开发与验证

猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDv)是冠状病毒属的成员之一,会引起哺乳仔猪急性发作严重的腹泻和呕吐,从而导致其大批死亡。PEDv最初发现于欧洲,现今已传播到亚洲。其在美国的首次出现时间为2013年5月,并且至2013年7月中旬,15个州确定存在PEDv。因此,美国急需快速、高通量的诊断检测方法,以进行血清学监测和监视。我们旨在设计可供诊断室使用的PEDv的ELISA测定分析方法,以检测猪血清、口液和粪便中PEDv抗体。研究人员已完成了美国多个PEDv分离株的病毒颗粒(N)和纤突蛋白(spike protein)1区(S1)和2区(S2)的测序,发现它们的同源性在99%以上。因此,任意分离株的重组蛋白都可以代表美国的PEDv分离株,且在酶联免疫吸附测定中应该能产生交叉反应。为了净化PEDv蛋白,笔者设计了PCR引物,以扩增N、S1和S2。随后,扩增的基因克隆到pET-25b和pMAL-p5X载体中,以进行细菌表达。两种载体将用于提高获得大量高纯度蛋白质的可能性。6X-his标签用于金属亲合蛋白(pET-25b)的纯化,而麦芽糖结合蛋白融合通过淀粉色谱分析法用于蛋白质纯化(pMAL-p5X)。纯合蛋白一旦获得,将要开发的直接ELISA法用于检测猪血清中PEDv抗体。血清检测中获得最佳ELISA结果的蛋白或蛋白融合物将进一步优化,以用于粪便和口液样本中病毒抗体的检测。     

科技前沿

<正>1.哈尔滨兽医所创新团队发现可诱导降解艾滋病病毒的细胞分子近日,从中国农业科学院哈尔滨兽医研究所获悉,该所基础免疫创新团队研究发现,"内质网I型α-甘露糖苷酶"能够诱导艾滋病病毒囊膜糖蛋白降解,继而抑制艾滋病病毒的复制,最终有望达到治疗的目的。该研究结果发表在近期美国出版的《生物化学杂志(The Journal of Biological Chemistry)》上。这是该团队继去年首次揭示人体内存在降解艾滋病病毒囊膜糖     

膜联蛋白A2参与流感病毒感染的研究进展

流感病毒感染宿主细胞是一个病毒入侵、遗传物质释放、病毒基因组转录和复制、病毒组装和出芽的过程。这个过程无论对于病毒的生存还是病毒致病力都是非常重要的,而这一过程的完成,必须依赖宿主细胞蛋白的参与。宿主蛋白膜联蛋白A2(Annexin A2, ANXA2)是一个多功能蛋白,在内吞、胞吐等与囊膜病毒复制相关的生物膜活动中发挥重要作用,并且被证实能够参与许多病毒的感染过程。文章综述了ANXA2在流感病毒的入侵、复制、组装、出芽等致病过程中发挥的功能,以期为从分子水平上阐明流感病毒与宿主细胞相互作用的机制,揭示ANXA2在抗流感病毒感染中的潜在价值提供参考。     

日本从蚕丝中提取出抗HIV物质

最近,日本农业生物资源研究所科学家玉田靖和圣玛利亚医科大学教授中岛秀喜合作,使用丝蛋白硫酸化的方法研制出具有抗艾滋病病毒的物质。艾滋病病毒的英文缩写为“HIV“,由于它附在免疫细胞——T细胞的表面蛋白质上不断感染、增殖,致使人体免疫细胞死亡而发生艾滋病。据这两位科学家向新闻媒体提供的科研信息介绍,他们在把丝蛋白硫酸化的过程中,制造出一种新的     

中国流行的PEDV:共感染和遗传多样性

猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种肠道传染病,对哺乳仔猪致死率可达100%,是导致我国哺乳仔猪高死亡率的“头号杀手”。PEDV属于冠状病毒科、冠状病毒属,是一种具有囊膜的单股正链RNA病毒,其基因组由4个结构蛋白和17个非结构蛋白组成。其中,S蛋白在病毒侵入宿主细胞和诱导机体产生中和抗体过程中发挥重要作用,因此S蛋白的突变与病毒的致病性高度相关。PEDV的变异以及PEDV与其它病原的共感染是难以防控PED的重要因素。     

禽白血病病毒衣壳蛋白单克隆抗体研制及其双夹心ELISA的建立

为制备禽白血病病毒(ALV)核衣壳蛋白p27的单克隆抗体,本研究以原核表达的融合蛋白GST-ALV p27免疫小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,通过间接免疫荧光(IFA)和间接ELISA进行筛选,制备了5株能够稳定传代并分泌抗p27单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为5D3、4F12、5B10、1C5和3C6,亚类鉴定3C6为IgG2b,其余为IgG1.通过IFA、Western-blot及竞争抑制ELISA,表明该5株单抗与J亚群禽白血病病毒(ALV-J)呈阳性反应,而与其他常见禽源病毒无交叉反应.利用5D3和4F12单抗建立了双抗体夹心ELISA方法,经663份临床样本验证,该方法与商品化试剂盒的符合率达到95.17％,证明所研制的针对ALV p27蛋白的单抗及建立的双抗体ELISA方法具有较高的应用价值.