生物发酵饲料高效菌株的筛选

<正>近几年来,发酵饲料成为了当前饲料研究的热点,人们越来越多的开始利用益生菌通过固态发酵的方法处理一些饲料原料,如豆粕、棉籽粕、菜粕、花生饼粕、玉米等,益生菌固态发酵的方法不仅能够降解饲料原料中的某些毒性成分,改善饲料品质,而且还     

苜蓿青贮饲料中优良乳酸菌菌株的筛选

本研究从苜蓿（Medicago sativa L.）青贮饲料中分离得到若干株乳酸菌,对所有菌株进行生长曲线和产酸速率测定,发现其中8个菌株产酸速率较快,能于24h内将培养基pH值降至4.0以下。根据形态、生化鉴定及16S rDNA同源性序列分析,鉴定4株为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,2株为戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）,1株为类植物乳杆菌（Lactobacillus paraplantarum）,1株为副干酪乳杆菌（Lactobacillusparacasei）。通过适当的工艺处理其有望作为乳酸菌添加剂单独或混合添加入青贮中以提高青贮饲料品质。     

高产乳酸菌的筛选、鉴定及抑菌性研究

试验旨在从动物肠道中筛选产酸能力较好的乳酸菌,采用MRS培养基对菌株进行分离、纯化,运用16S rDNA序列分析及生理生化特征进行鉴定,通过溶钙圈法和高效液相色谱法筛选得到一株产酸能力稳定较优的菌株,并探究其抑菌性能。结果显示：本试验筛选得到产酸能力较强的L-2菌株为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,其对大肠杆菌、沙门氏菌、痢疾杆菌三种食源性病原菌均有显著抑制效果,抑菌圈直径分别为19.5、18.3、17.8 mm;对尖孢镰孢菌、禾谷镰孢菌、拟轮枝镰孢菌等真菌也具有明显抑制,抑菌圈直径分别为15.6、15.2、14.3 mm。     

青贮饲料中乳酸菌的分离鉴定及优良菌株筛选

为研究青贮饲料中乳酸菌的分类及形态学与生理生化特性,从苜蓿(Medicago sativa L.)及玉米(Zea maysL.)青贮饲料中分离得到5株乳酸菌。经16S rRNA序列分析,2株(GI7,GI24)为乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici),其余3株(GI11,GI44,GI62)分别为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)、弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum);5株菌均为同型发酵乳酸菌,除弯曲乳杆菌GI44在pH3.0,4.0,8.0等条件下不能生长外,其余菌株均可在5,10,40,45℃等不同温度条件下、pH3.0~8.0等环境下以及3.0%和6.5%NaCl溶液中良好生长或微弱生长。同时,通过产酸速率和生长曲线等指标筛选出产酸较快、生长迅速的GI62可作为制备乳酸菌青贮饲料添加剂的优良菌株。     

牦牛犊牛益生乳酸菌的分离鉴定及其体外筛选

以牦牛犊牛胃肠道内容物作为菌源,筛选出3株同时对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌起抑制作用的乳酸菌,编号分别为A1、A2和A8。经16S rRNA序列分析鉴定,A1、A2为乳酸片球菌,A8为戊糖乳杆菌。经体外评价其益生特性,在培养液pH=4时,所有乳酸菌的活菌数均较高;培养液胆盐浓度在3 g/L时,菌株的存活率均在50%。筛选的3株具有潜在益生性抑菌特性的乳酸菌,可为青海地区牦牛犊牛预防腹泻复合益生菌制剂的研发提供参考。     

一株具有产酸能力的芽孢杆菌的筛选及性能检测

 为了分离具有产酸能力的芽孢杆菌,使用菌种分离培养基从牛粪中分离得到一株具有产酸能力的芽孢菌,命名为GF1。根据该菌株的生理生化特性鉴定和16S rDNA序列测定分析, 初步鉴定该菌为蜡样芽孢杆菌。对GF1发酵液中的代谢产物进行液相色谱分析,发现GF1可代谢产生乳酸、乙酸等有机酸。对GF1进行液体发酵,通过在沸水中加热10 min灭活菌体,检测GF1最终芽孢率可达到90%以上,对GF1进行耐热、耐酸和耐胆盐处理,发现GF1具有良好的耐热性能和较强的耐酸耐胆盐特性,以小鼠做安全性试验,结果成活率为100 %,表明GF1安全无毒。GF1不仅能够产酸,还可以产生芽孢,可以突破乳酸菌在颗粒料中添加的瓶颈。     

猪源乳酸菌的分离、筛选、鉴定及产酸性能的研究

试验旨在分离、筛选出具有强抗逆性、产酸能力强的同源菌株。从28日龄断奶健康仔猪粪便分离得到30株乳酸菌,应用体外筛选法,筛选出在pH值2.5处理2h后的菌株13株;将此13株菌株通过浓度为0.2%胆盐后剩7株。采用牛津杯法进行抑菌试验,从7株菌中筛选出对大肠杆菌、沙门氏菌有较强抑菌作用的4株,分别为R11、R15、R18、R22,对此4株菌株进行产酸试验验证,都表现出强的产酸能力。对这4株菌进行鉴定性试验,结果R11为屎肠球菌,R15为鸡肠球菌,R18为嗜酸乳杆菌,R22为口乳杆菌。     

弯曲杆菌中具有高抑菌活性乳酸菌的筛选

使用微生态制剂来替代抗生素用于动物疫病防制是未来的发展趋势,而乳酸菌是目前微生态制剂最主要的成分。试验旨在筛选弯曲杆菌中具有高抑菌活性并耐受动物胃肠道环境的乳酸菌。从广东不同地区采集家禽粪便样品,对分离的乳酸菌进行生化鉴定、PCR鉴定及16S rDNA测序。同时,对分离菌株进行鸡源空肠弯曲杆菌、鸭源空肠弯曲杆菌和鹅源结肠弯曲杆菌的抑菌试验,以及模拟胃肠道环境的耐酸、耐胆盐和耐胰蛋白酶试验。结果表明,唾液乳杆菌R3对不同禽源的弯曲杆菌都具有高抑菌活性和耐受能力。因此,唾液乳杆菌R3为开发防控家禽弯曲杆菌疾病的微生态制剂提供了候选株。     

乳制品中具有降胆固醇功能乳酸菌的体外筛选

用改良的o-phthalaldehyde法对pH3．0和0．3％牛胆酸钠有一定耐受性的10株乳酸菌的体外降胆固醇活性进行了测定。这些菌在含0．3％胆盐的培养基中,37℃厌氧培养24h后,均表现出较强的降胆固醇活性。胆固醇脱除率从30．4％～43．6％不等。其中鸟肠球菌WZ38—2对胆固醇的脱除率最高;其次为植物乳杆菌WHl3—1和WH23—1。     

乳酸菌的分离与筛选试验

本试验对复筛得到的3个乳酸菌菌株LS-3、LS-9、LS-15进行抑菌效果、耐药性和产酸能力试验。结果表明,3种乳酸菌对有害微生物有拮抗作用,耐酸性强,有较强的存活力,受抗生素药物的干扰小,无毒无副作用,具有较好的应用前景。     

开菲尔粒中乳酸菌的筛选与发酵特性

以大肠杆菌ATCC25922和金黄色葡萄球菌ATCC25923为抑菌对象筛选开菲尔粒中具有抑菌功能的乳酸菌,将该乳酸菌株发酵上清液制成冻干粉,未纯化的抗菌肽质量浓度大于6.250 mg/mL时,对大肠杆菌ATCC25922和金黄色葡萄球菌ATCC25923抑菌效果显著,利用16S rDNA方法,鉴定该菌株为干酪乳杆菌。以该菌株制备发酵剂,添加量2、3、4 g/100 mL发酵全脂乳,4 ℃冷藏保存30 d,结果表明,发酵剂添加量越多,酸乳pH值越低,滴定酸度、硬度、黏度和持水率越高,脱水收缩率越低;发酵剂添加量3 g/100 mL和4 g/100 mL酸乳的感官评分无明显差异,且均高于发酵剂添加量2 g/100 mL酸乳。     

健康动物肠道源产窄谱细菌素乳酸菌的筛选鉴定

从健康猪、鸡、兔新鲜粪便及鸡肠道内容物等78份样品中分离乳酸菌,以大肠杆菌、李氏杆菌、金黄色葡萄球菌作为指示菌筛选有明显抑菌活性的菌株,同时进行产细菌素的乳酸菌筛选,并测定抑菌谱;进一步通过生化试验,并结合16S rRNA基因测序结果确定菌株的种类,采用溶血试验和动物试验确定分离菌株的安全性。结果表明,在分离得到的30株乳酸菌中,共有8株对指示菌有抑制作用,其中1株为产窄谱细菌素的短乳杆菌。本研究为下一步探讨产细菌素短乳杆菌作为天然防腐剂和抗菌剂提供了材料。     

甘蔗尾中乳酸菌的分离筛选和鉴定

该研究利用传统培养法从0–90 d打包青贮发酵的甘蔗(Saccharum sinense)尾中分离得到20株乳酸菌。通过形态学观察、API 50 CH生化试剂盒鉴定及16S rDNA基因序列分析法对分离纯化的菌株进行鉴定,并测定其产酸能力。结果显示,菌株Y42是干酪乳杆菌(Lactobacillus casei),菌株Y32、Y59是副干酪乳杆菌(L. paracasei),其余的17株是植物乳酸杆菌(L. plantarum);分离的20株菌株在培养18 h后,菌株发酵液的pH可降低至3.70以下,Y67菌株的pH最低,为3.57。从甘蔗尾中分离的20株乳酸菌产酸能力均较强,具备良好的青贮潜力,可作为制备青贮饲料发酵剂的菌种。     

产共轭亚油酸乳酸菌菌株的筛选及其最佳发酵条件的研究

通过测定乳酸菌发酵液中共轭亚油酸的含量筛选出具有高共轭亚油酸转化能力的乳酸菌菌株并探讨其最佳的发酵条件。分别对15株分离于猪胃肠道的乳酸菌发酵培养后,采用紫外分光光度法筛选出具有转化亚油酸生成共轭亚油酸能力强的菌株。以2株产共轭亚油酸能力较强的菌株为出发菌株,探讨温度、时间、p H、接种量和葵花籽油添加量等不同发酵条件对代谢产物中共轭亚油酸的影响。结果发现乳酸菌W1和W2(分离自胃)具有较高的生产共轭亚油酸的能力,其共轭亚油酸的产量分别为2.58和9.44μg/m L。并获得这株菌生成共轭亚油酸的最佳发酵条件:W1产生共轭亚油酸最佳发酵条件为37℃,p H6.0,培养时间120 h,菌种接种量为5.5 m L/100 g,葵花籽油接种量为2.5%,W2产生共轭亚油酸最佳发酵条件为37℃,p H5.5,培养时间120 h,菌种接种量6.5 m L/100 g,葵花籽油接种量3.0%。     

苜蓿青贮乳酸菌的筛选及其对苜蓿青贮发酵的影响

为获得苜蓿青贮用乳酸菌,本研究从苜蓿附生乳酸菌中通过抑菌活性、酸化苜蓿粉及结构性糖代谢中间产物的性能指标筛选优良菌株,并研究其对苜蓿(Medicago sativa)青贮发酵的影响。结果表明,1)筛选到抑菌活性较高、酸化苜蓿粉及结构性糖代谢中间产物综合性能较好的菌株ZZU A341,被鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum);2)青贮90 d,添加该菌株的处理组pH、氨态氮含量低于添加商业菌株(YX)的处理组,显著低于自然青贮(P <0.05)。综上所述,使用该筛选方法获得的优良乳酸菌可有效改善苜蓿发酵品质。     

全株水稻表面优势乳酸菌的筛选与鉴定

本试验旨在对全株水稻表面的优势乳酸菌进行分离、筛选与鉴定，以期挖掘出青贮优良菌种资源。利用平板涂布法对全株水稻上的乳酸菌进行分离，以生长速度和产酸能力进行初筛，以抗氧化能力（H2O2耐受能力、DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基清除率）进行复筛，对筛选出的优势乳酸菌进行生理生化特性分析和分子生物学鉴定。结果表明，从水稻植株表面共分离得到154株乳酸菌，培养48 h后，有16株OD600nm值>2且pH值<4的乳酸菌，其中有9株乳酸菌具有抗氧化能力，综合表现最好的菌株是YMA3，对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基清除率分别为72.23%、72.46%、86.33%。YMA3表现出较强的高温或酸性环境适应性，鉴定为粪肠球菌。     

产植酸酶真菌的初步筛选

本文报道两株产植酸酶真菌ＳＯ１１和ＳＯ２１的筛选及有关性质的初步研究。结果表明ＳＯ１１和ＳＯ２１１均能产生植酸酶，其中ＳＯ１１是米曲霉（Ａｓｐ．ｏｒｙｚａｅ），ＳＯ２１特定。ＳＯ２１在３０℃，１２０～１５０ｒｐｍ／ｍｉｎ条件下摇瓶发酵１６８h酶活力达到高峰，ＳＯ１１则缓慢上升。两种发液的最适温度均为５０℃，最适ＰＨ为５ ．０。