一株胶冻样芽孢杆菌培养条件的优化及其解钾活性

[目的]优化该胶冻样芽孢杆菌培养条件及测定其解钾活性。[方法]用火焰光度计法测定胶冻样芽孢杆菌的解钾量;通过大白菜的田间试验验证解钾功能;通过培养基成分及培养条件的优化,获得最佳培养基和培养条件。[结果]用火焰光度计法测定胶冻样芽孢杆菌的解钾量为121.3 mg/L,其解钾率为12.06%;将其应用到喜钾作物大白菜上,通过大白菜的田间试验,与K₀（空白对照）组相比大白菜产量增加了15.5%,与只加硫酸钾的K₁相比,产量差异不大;通过培养基成分及培养条件的优化,获得最佳培养基配比为蔗糖1.0%、酵母浸粉0.1%、硫酸镁0.02%、磷酸氢二钾0.05%,最适培养条件为温度30℃、pH 7.0、转速200 r/min,发酵结果有效活菌数达到17.5×10⁸ CFU/mL,芽孢率≥95%,解钾率提高到23.02%。[结论]该胶冻样芽孢杆菌可以将土壤中不可直接被作物吸收利用的钾素分解为作物可以直接利用的速效钾形态。     

胶冻样芽孢杆菌发酵中试研究

利用单因素筛选和正交试验,对胶冻样芽孢杆菌菌株NBF-266的发酵培养基进行了优化,得到其最佳培养基配方为甘油0.8%,淀粉0.6%,花生粕1.5%,碳酸钙0.1%。通过400 L和5 000 L发酵罐分别发酵,发酵液芽孢产量分别为18×10~8 CFU/mL和15.8×10~8 CFU/mL,发酵液经不同方式浓缩干燥,得到冻干粉和喷雾干燥粉芽孢产量分别为2 910×10~8 CFU/g和933×10~8 CFU/g。     

嗜气芽孢杆菌ZDXC-01产芽孢培养条件的优化

为了提高嗜气芽孢杆菌的有效活菌数和芽孢数,采用单因素筛选和正交试验法对菌株的发酵条件进行了优化。结果表明,优化后的最佳发酵条件为发酵时间30～36 h、接种量5%、温度37℃、转速200 r/min、起始p H值7.5、装液量25 mL/250 mL。优化后发酵菌液含菌量为5.8×10~9cfu/mL,与初始发酵工艺的发酵菌液含菌量(2.2×10~9cfu/mL)相比,提高了163.6%;优化后发酵菌液芽孢数为5.5×10~9cfu/mL,与初始发酵工艺的发酵菌液芽孢数(1.8×10~9cfu/mL)相比,提高了205.6%。     

防治辣椒疫病的生防菌培养条件优化与菌剂复配

为研制对辣椒疫病具有明显防治效果且田间稳定性好的生防菌剂,采用正交试验设计优化了美丽短芽孢杆菌NF2、多黏类芽孢杆菌J和枯草芽孢杆菌Q14的培养条件,并进一步筛选了3种芽孢杆菌组成的复合生防菌剂配比方式。结果表明,在优化后的培养条件下,3种芽孢杆菌的活菌数均可稳定在2.0×10~8CFU/mL以上,当菌株NF2、J和Q14的活菌数分别为1.0×10~8、1.0×10~7、1.0×10~6CFU/mL,按照1:1:1体积比配比制备时,与清水对照相比,复合生防菌剂可促进辣椒增产39.2%,对辣椒疫病的防效大于70%,并可在根际土壤中稳定存活和繁殖100 d以上。     

凝结芽孢杆菌对肉鸡免疫功能的影响

[目的]探讨凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)对肉鸡免疫功能的影响.[方法]取健康3日龄肉鸡随机分空白对照组(基础日粮),抗生素组(基础日粮加杆菌肽),BC低剂量组(基础日粮加凝结芽孢杆菌活菌数为2×107 CFU/mL)、BC中剂量组(基础日粮加凝结芽孢杆菌活菌数为2×108 CFU/mL)、BC高剂量组(基础日粮加凝结芽孢杆菌活菌数为2×109 CFU/mL).试验期35 d,试验结束肉鸡称量体质量、采血、剖检,分析免疫器官指数、血液T淋巴细胞转化、血液生化指标、测定IL-10和IgG含量.[结果]试验期第14天之后抗生素组与BC低剂量组、BC中剂量组、BC高剂量组肉鸡平均日增体质量显著提高,且随着试验期延长BC中剂量组肉鸡日增体质量最明显;试验期BC低剂量组、BC中剂量组、BC高剂量组肉鸡法氏囊指数均高于抗生素组,试验期14～28 d时BC中剂量组肉鸡脾脏指数均显著高于空白对照组,试验期7～28 d时BC中剂量组胸腺指数显著高于空白对照组;试验期14～35 d时BC低剂量组、BC中剂量组、BC高剂量组肉鸡血液T淋巴细胞转化率显著提高,明显高于空白对照组和抗生素组,2×108 CFU/mL凝结芽孢杆菌促进T淋巴细胞转化显著;试验期第14天时BC低剂量组、BC中剂量组、BC高剂量组肉鸡血清IL-10和IgG含量较高;试验期间BC低剂量组、BC中剂量组、BC高剂量组肉鸡生理生化指标与对照组差异不显著.[结论]凝结芽孢杆菌能增强T淋巴细胞转化,促进细胞因子分泌及免疫抗体产生,提高免疫器官指数,其中以凝结芽孢杆菌为2×108 CFU/mL时提高机体免疫功能效果最显著且优于杆菌肽.     

枯草芽孢杆菌添加剂对生物絮团菌群结构和营养成分的影响

为探究枯草芽孢杆菌添加剂对生物絮团菌群结构、添加菌在絮团上的富集效果、絮团营养以及系统构建过程水质的影响。生物絮凝系统构建过程中,枯草芽孢杆菌的添加剂量分别为A组106 CFU/mL、B组105 CFU/mL、C组104 CFU/mL和D组0 CFU/mL,添加周期为3 天/次。结果表明：生物絮凝系统构建过程中,枯草芽孢杆菌添加剂量对絮团总悬浮颗粒物(Total suspended solids, TSS)、5 分钟内絮团沉降体积(Floc Volume, FV)影响显著(P＜0.05);对三态氮浓度变化趋势影响较明显;对絮团氨基酸含量、粗蛋白含量、絮团碳氮比影响显著(P＜0.05),对絮团粗脂肪,粗灰分含量影响不显著(P＞0.05);添加枯草芽孢杆菌絮团中氨基酸、粗蛋白含量高于不添加枯草芽孢杆菌组;枯草芽孢杆菌添加剂量对絮团门、属水平菌群差异物种相对丰度有显著影响(P＜0.05),增加枯草芽孢杆菌添加剂浓度,絮团中芽孢杆菌浓度也随之升高。综上所述,枯草芽孢杆菌能在生物絮团上得到有效富集,在生物絮凝系统构建过程中添加枯草芽孢杆菌能提高絮团粗蛋白和氨基酸含量,有利于为养殖对象提供蛋白源。     

微生物菌剂对芳樟枝精油主成分芳樟醇的影响

以芳樟195#一年生扦插苗为研究对象,通过二次正交回旋组合设计试验研究接种固氮菌、巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌对芳樟枝精油主成分的影响。结果表明,试验组芳樟枝精油主成分芳樟醇含量显著提高,樟脑、1,8-桉叶油素含量显著降低;试验组14(固氮菌=40×10⁸ CFU/盆、巨大芽孢杆菌=40×10⁸ CFU/盆、胶冻样芽孢杆菌=60×10⁸ CFU/盆、枯草芽孢杆菌=40×10⁸ CFU/盆)的芳樟枝精油主成分芳樟醇含量最高(87.09%),高出对照组7.80%。     

解磷芽孢杆菌YC４液体培养基及发酵条件的优化

对从养殖池塘中筛选出的一株具有解磷特性的芽孢杆菌YC4进行液体培养基和发酵条件的优化实验.在摇床培养条件下,研究了各营养源和主要影响因子对菌株YC4生长和芽孢形成的影响,并建立了菌株的生长曲线.结果显示:解磷芽孢杆菌YC4最佳发酵培养基配方为糖蜜10‰、大豆蛋白粉5‰、酵母膏5‰、磷酸二氢钾5‰、硫酸镁1.5‰、氯化钠15‰、玉米浆5‰;最适发酵条件为温度30℃,初始pH值为7.0～7.5,接种量1％,摇床转速200r/min;最适收获时间为24 h.优化后总菌量达1.23×109 CFU/mL,芽孢产量达1.01×109 CFU/mL,明显高于基础培养基发酵结果.     

凝结芽孢杆菌BC-HYI对肉鸡生长及肠道形态结构的影响

[目的]通过分析平均日采食量、料重比、屠宰指数、肠道绒毛高度/隐窝深度比值,探究凝结芽孢杆菌BC-HY1对肉鸡生长性能及肠道形态结构的影响.[方法]选取3日龄健康、体质量110～140 g的肉鸡75只,随机分为对照组(基础日粮);抗生素组(基础日粮加杆菌肽);凝结芽孢杆菌低剂量组(基础日粮加凝结芽孢杆菌BC-HYI,细菌数2×107 CFU/mL);凝结芽孢杆菌中剂量组(基础日粮加凝结芽孢杆菌BC-HYI,细菌数2×108 CFU/mL);凝结芽孢杆菌高剂量组(基础日粮加凝结芽孢杆菌BC-HYI,细菌数2×109 CFU/mL).试验期为35 d,每7 d为一个周期对试验肉鸡称量体质量、采血和剖检.[结果]凝结芽孢杆菌低剂量组、凝结芽孢杆菌中剂量组可以显著提高肉鸡生长性能与屠宰指数;凝结芽孢杆菌中剂量组、凝结芽孢杆菌高剂量组提高十二指肠绒毛高度/隐窝深度比值作用的效果显著且持久;凝结芽孢杆菌中剂量组促进乳酸菌的生长,抑制大肠杆菌的生长效果更优.[结论]2×108CFU/mL凝结芽孢杆菌BC-HYI可以改善肠道形态结构,调节盲肠内乳酸菌和大肠杆菌的生长;对肉鸡具有显著促生长作用.     

一株油菜根际促生菌的产芽孢发酵条件优化

[目的]提高从油菜根际分离筛选得到的促生菌蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)QZB24-6的芽孢数量和芽孢产率,为进一步该苗株在复合生物肥中的应用打下基础.[方法]采用单因素和正交试验,研究不同的氮源、碳源、pH、温度、培养时间对蜡状芽孢杆菌形成芽孢的影响.[结果]确定蜡状芽孢杆菌产芽孢培养基的最佳组分为(g/L):乳糖2;、酵母膏1.5;、硫酸锰0.07;、磷酸氢二钠0.4;、磷酸二氢钠0.2;.对发酵条件进行了研究,温度35℃、pH值7.0、接种量4;、装液量100 mL、转速为180 r/min下发酵72 h.[结论]通过优化培养基组分和培养基条件,最终发酵液中活菌数、芽孢数、芽孢产率分别为2.27×108 cfu/mL、2.05×108 cfu/mL、90.31;.     

芽孢杆菌NY3的鉴定及其对鸡毛菜的促生效果

在形态分类的基础上,结合分子鉴定手段对芽孢杆菌NY3进行分类鉴定;并将芽孢杆菌NY3进行液体发酵培养,在温室条件下,研究NY3菌株对鸡毛菜(Brassica chinensis)的促生效果。依据NY3的培养性状、显微特征描述和系统发育分析,显示菌株NY3属于蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus);在温室盆栽试验中,添加NY3菌剂的各处理生物量、叶绿素均比CK增加,其中,添加1.0 mL(T_3,有机无机复混肥+NY3菌剂1.0 mL,含芽孢杆菌1.0×10~9 CFU)增产最高,鲜重、干重比对照组分别提高20.28%、14.34%。     

含解淀粉芽孢杆菌LTBA02的复合微生物肥料对柑橘红蜘蛛的防效研究

本文研究了含解淀粉芽孢杆菌LTBA02的复合微生物肥料中脂肪酶和淀粉酶的活性,以及对柑橘红蜘蛛的田间防治效果。结果表明,含解淀粉芽孢杆菌LTBA02的复合微生物肥料的脂肪酶活性和淀粉酶活性分别达到3.77、18.14 U/g,酶活力没有因肥料高盐环境而失活,仍具有较高的生物活性;施后1、3、7、20 d,含解淀粉芽孢杆菌LTBA02的复合微生物肥料100、150、200倍液处理都表现出很好的防治柑橘红蜘蛛的效果,都显著高于110 g/L乙螨唑悬浮剂4 400倍液处理和不添加解淀粉芽孢杆菌LTBA02的复合微生物肥料100倍液处理;含解淀粉芽孢杆菌LTBA02的复合微生物肥料200倍液处理喷后1 d防治效果达到90.28%,喷后20d防治效果达到了97.39%,表现出了良好的速效性和持效性。     

蜡状芽孢杆菌TS-02防治草莓白粉病研究

在室外条件下进行了蜡状芽孢杆菌TS-02防治草莓白粉病的药效试验,并在室内条件下探讨了其防病机理.结果表明:蜡状芽孢杆菌TS-02可以防治草莓白粉病,活菌数大于3×107CFU/ml可达到理想的效果.抑制作用是活菌和菌分泌的抑菌物质共同作用的结果.其中活菌的作用更强;蜡状芽孢杆菌可抑制白粉病菌的定殖,从而达到防治草莓白粉病的效果.     

解淀粉芽孢杆菌在葡萄叶片上的定殖能力研究

为探究解淀粉芽孢杆菌在葡萄叶片上的定殖能力,本研究先后采用利福平和链霉素对解淀粉芽孢杆菌N24进行双抗诱导,获得了菌落特征与野生菌相同且抗药性稳定的双抗菌株(抗利福平320μg/m L、抗链霉素150μg/m L)。此双抗菌株在葡萄叶片上的定殖试验结果表明:浓度为1×104cfu/m L和1×106cfu/m L的菌液喷施叶面后,5~10 d菌量快速增加,10 d达到最高峰,此时其定殖和繁殖能力最强,尤其是起始菌液浓度为1×106cfu/m L时,叶片上的定殖量可达1.7×103cfu/g。浓度为1×108cfu/m L的菌液喷施叶面时,在喷雾后5 d菌量达到最高峰。综合来看,生防菌N24的最适喷施菌液浓度为1×106cfu/m L。添加增效因子后有利于双抗菌株在葡萄叶片表面的定殖,其中,添加壳聚糖的效果最好,其次为苏氨酸。添加磷酸氢二钾后的菌量与对照相比,没有显著差别。     

复合益生菌芽孢杆菌发酵培养基及条件的优化

为了获取活菌数高、抗性强、经济效益好的益生菌制剂,对复合益生菌芽孢杆菌制剂的培养基配方及各项发酵工艺参数进行了优化。选取枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌进行联合培养,并采用单因子试验和正交试验对其发酵培养基成分进行了优化,在此基础上对其发酵条件做了进一步优化。优化后最佳培养基成分为:废糖蜜初始pH值7.5,转速160 r/min,接种量8%,装液量40%。经优化后活菌数得到显著提高,达到6.62×1010CFU/mL。     

海洋细菌GM-1-1产芽孢发酵培养基和摇瓶发酵条件优化

[目的]优化海洋解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)GM-1-1的产芽孢发酵培养基和摇瓶发酵条件,为该菌株的开发和应用提供理论依据.[方法]以GM-1-1菌株发酵液中的细菌总数和芽孢产率为检测指标,采用单因素和正交试验对该菌株产芽孢发酵培养基和摇瓶发酵条件进行优化;GM-1-1菌株发酵完成后喷雾干燥制成菌粉,加入不同助剂制成有效含量为1010 CFU/g的可湿性粉剂用于水稻纹枯病田间防治试验.[结果]GM-1-1菌株产芽孢最佳发酵培养基配方为麦麸0.75%、花生饼粉2.5%、CaCO30.05%;最佳发酵条件为pH 7,温度30℃,250 mL三角瓶装液量60 mL,接种量8%,转速200 r/min,培养时间54 h.优化后GM-1-1菌株发酵培养基的细菌总数和芽孢产率分别达7.40×109个/mL和89.42%.田间防治试验结果表明,GM-1-1可湿性粉剂对水稻纹枯病的防治效果最高可达82.06%.[结论]优化后的培养基和发酵条件可有效提高GM-1-1菌株的细菌总数和芽孢产率,且培养基成本低、来源广泛.GM-1-1可湿性粉剂对水稻纹枯病有较好的防治效果,可用于生产菌剂并推广应用.     

饲用地衣芽孢杆菌TS-Ⅱ菌株发酵培养基及发酵条件优化

[目的]地衣芽孢杆菌规模化发展.[方法]采用碳、氮源及微量元素的筛选实验和正交实验.[结果]确定地衣芽孢杆菌TS-Ⅱ菌株发酵培养基的最佳组分为(g/L):蔗糖60、蛋白胨30、NaCl 30 、K2HPO4 2、MgSO4 1、FeSO4 0.02、MnSO4 0.01.对发酵条件进行了研究,发酵的最适初始pH值为5.5,最适培养温度为35℃,最适装液量为10 mL(250 mL三角瓶).[结论]通过优化培养基组分和培养条件后,菌株TS-Ⅱ活菌数达到了6.58×10~(10) CFU/mL,为以后的工业化生产奠定基础.     

抗肉桂醛益生菌的筛选、鉴定和益生特性评价

为了筛选适合添加于含肉桂醛饲料的水产益生菌,从饲喂肉桂醛的半滑舌鳎肠道中筛选5株芽孢杆菌,同时选用笔者所在实验室保存的35株潜在益生菌,以定性定量法筛选具有高水解酶活性且抗肉桂醛的菌株并鉴定。通过福林-酚法、3,5-二硝基水杨酸法定量测定各菌株的蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶活性;进一步以生长抑制法确定各菌株耐受肉桂醛的能力,以16S rDNA序列鉴定优势菌株。结果表明,9种芽孢杆菌具有较强的益生特性,其中菌株1-D的蛋白酶活性最强,为(10.137±0.046) U/mL,菌株8-D的淀粉酶活性最强,为(5.739±0.018) U/mL,菌株9-D的纤维素酶活性最强,为(63.436±0.006) U/mL,且这9株菌分别属于枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌,最高能够耐受浓度为2.5μmol/mL的肉桂醛。研究筛选的菌株,有作为益生菌应用于含肉桂醛饲料的潜力。     

胶冻样类芽孢杆菌PS04产抗真菌物质培养条件的优化

以胶冻样类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis)PS04为试验材料,运用传统的单次单因子法,筛选得到适合胶冻样类芽孢杆菌Ps04生防菌株生长及其拮抗物质产生的最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为NaNO3,并在逐因子试验的基础上进行正交试验,得到该培养基各组分的最佳含量:蔗糖3%,NaNO30.15%,K2...     

蟹源弗氏柠檬酸杆菌拮抗菌PNB3的分离鉴定与安全性分析

摘 要：筛选和鉴定抗水产致病性弗氏柠檬酸杆菌的优良芽孢杆菌,并分析其安全性。以一株蟹源致病性弗氏柠檬酸杆C1作为筛选指示菌、抑菌圈直径和抑菌效果作为指标进行抗菌芽孢杆菌优良菌株的分离与筛选,综合生理生化鉴定与16S rRNA序列分析对抗菌芽孢杆菌优良菌株进行鉴定,并参照《HJ/T 415—2008 环保用微生物菌剂环境安全评价导则》、《NY/T1444-2007微生物饲料添加剂评价通则》等国家标准,从毒力基因、耐药性、对小球藻生长的影响以及对斑马鱼和中华绒螯蟹的致病性等方面分析抗菌芽孢杆菌优良菌株的安全性。结果显示,从养殖淤泥中分离并筛选出一株抗菌芽孢杆菌优良菌株PNB3,其在1.0×105 CFU/mL时与蟹源致病性弗氏柠檬酸杆菌C1共培养处理120 h的最高抑菌率达到了99.99%。结合生理生化鉴定以及16S rRNA序列分析,菌株PNB3被鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),不含溶血素BL基因、肠毒素Nhe基因、肠毒素T基因、肠毒素FM 基因、细胞毒素 K 基因、呕吐基因、多效调控因子等毒力基因,对复方新诺明、氨苄西林、诺氟沙星、卡那霉素、多粘菌素B、氟苯尼考、庆大霉素、依诺沙星、头孢拉定、青霉素等10种抗生素高度敏感,对多西环素、四环素等2种抗生素中度敏感,对链霉素耐药,在终浓度为2.0×104~2.0×108 CFU/mL时对小球藻的生长有促进作用,对斑马鱼的半数致死浓度（LC50）大于2.0×108 CFU/mL,对中华绒螯蟹的半数致死浓度（LC50）大于2.0×108 CFU/g。地衣芽孢杆菌PNB3是一株具有潜在安全性的弗氏柠檬酸杆菌拮抗菌,具备应用于中华绒螯蟹弗氏柠檬酸杆菌病生物防控的安全基础。