杉木子叶和下胚轴的器官发生与体胚发生

以杉木实生苗的子叶和下胚轴为起始外植体,研究了基本培养基、6-BA、TDZ、苗龄等因素对器官发生和体胚发生的影响.研究结果表明：基本培养基、6-BA、TDZ及苗龄对子叶和下胚轴不定芽发生和体胚发生均产生显著影响.DCR＋6-BA 1.0mg/L＋TDZ 0.003mg/L＋NAA 0.1mg/L是子叶和下胚轴诱导不定芽发生及下胚轴诱导体胚发生的最佳培养基;DCR＋6-BA 1.0mg/L＋TDZ 0.002mg/L＋NAA 0.1mg/L对子叶诱导体胚最有效;不定芽在DCR基本培养基中可有效伸长;1/4MS＋IBA 0.2mg/L＋NAA 0.1mg/L可有效诱导不定芽生根.     

大豆不同基因型胚尖不定芽的诱导及对抗生素的敏感性

以大豆胚尖为外植体,在MS+3.0mg/L6BA上培养诱导8个基因型产生不定芽,筛选适合于胚尖再生系统的大豆基因型。同时,测定吉林40在诱导胚尖不定芽时对卡那霉素和头孢霉素的耐受性。结果表明,在8个大豆基因型中,2个基因型的不定芽诱导率大于90%,综合考虑不定芽诱导率和芽数两个性状,吉林40和黑农37适合于大豆胚尖不定芽再生系统。在培养基中加入卡那霉素或头孢霉素时,随着抗生素浓度的增加,胚尖不定芽诱导率急剧下降。经方差分析,卡那霉素和头孢霉素对大豆胚尖不定芽诱导率和芽数均有明显的抑制作用。在培养基内加入200mg/L卡那霉素或300mg/L头孢霉素时,胚尖不定芽诱导率和芽数显著地低于对照。在胚尖再生系统遗传转化中,建议以200mg/L卡那霉素作为抗性筛选浓度,使用头孢霉素作为脱菌剂时,浓度低于300mg/L不会降低大豆胚尖不定芽的诱导率和芽数。     

不同黄瓜基因型子叶再生体系的建立

以6个不同黄瓜品种和自交系为试材,研究了基因型、激素(6-BA、ABA)对黄瓜离体子叶再生的影响。结果表明:不同基因型黄瓜之间的再生频率差异较大,吉林旱瓜为最佳基因型,在培养基M7(MS+1.5mg/L6-BA+0.5mg/LABA+2mg/LAgNO3)上再生频率最高达97%,平均每外植体再生芽数为5.2;与对照相比,6-BA、ABA和AgNO3组合能促进芽的再生,显著提高再生芽数,其中6-BA是黄瓜子叶再生的必要激素,而ABA是促进子叶高效再生的激素;此外,MS培养基添加0.1mg/L6-BA能显著促进再生不定芽的伸长。     

大豆子叶节再生体系的建立

以吉农28、吉农27、吉农17三个基因型大豆子叶节作为外植体,采用正交实验设计方法,对大豆的基因型和子叶节再生中植物生长调节剂浓度进行了研究。结果表明:适合大豆子叶节不定芽诱导的基因型是吉农27,最佳诱导培养基是MS+6-BA3.Omg/L+IBA0mg/L+2,4-D0mg/L。适合大豆子叶节不定芽继代的基因型是吉农17,最佳继代培养基是MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L。适合大豆子叶节不定芽增殖的最佳基因型是吉农27,最佳增殖培养基是MS+6-BA1.Omg/L+NAA0.1mg/L+GA31.Omg/L。     

花生不定芽分化及植株再生的研究

为进一步探索和完善高频植株再生体系并扩大基因型的研究,以8个花生品种为材料,对幼叶不同部位（叶片顶端、中间切段、叶片基部）的切段、子叶、上胚轴和下胚轴外植体,接种到添加1 mg/L NAA和6 mg/L BAP的MSB5培养基上,10天后将形成的愈伤组织转移至添加10 mg/L BAP或添加3 mg/L BAP和1 mg/L ABA的再分化培养基上进行培养,诱导不定芽分化。结果表明,6天叶龄叶片中间切段不定芽分化频率达到了91.4%,上胚轴26.7%,下胚轴12.5%和子叶0%;花生品种8823幼叶外植体获得了的91.4%不定芽分化率,生根植株经驯化后移至砂土中,正常开花结果。因此,幼叶外植体分化不定芽频率明显高于子叶、上胚轴和下胚轴;6天叶龄的叶片中间切段为最佳;不同基因型不定芽分化率存在明显差异。     

花椰菜高频离体再生体系的构建

以147花椰菜和庆农65天2个花椰菜品种为试材,研究了影响花椰菜不定芽再生的各个因素,建立花椰菜高效离体再生体系。结果表明:基因型、外植体类型、激素的类型和配比等是影响花椰菜再生的主要因子。品种对再生频率影响较大,庆农65天的外植体再生频率高于147花椰菜;不同外植体再生频率也存在差异,下胚轴的再生频率显著高于子叶。147花椰菜取用7 d龄无菌苗的子叶和下胚轴,培养在MS+6-BA1 mg/L+NAA 0.2 mg/L培养基上培养效果最佳,庆农65天则培养在MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L培养基上效果最佳;再生芽在MS培养基,生根率达100%。本研究为花椰菜基因遗传转化构建高效的再生体系奠定基础。     

不同基因型对白菜子叶培养不定芽再生的影响

探讨了基因型对白菜子叶培养不定芽再生的影响。结果表明，不同基因型的不定芽再生率和平均每子叶生芽数差异极大，在被检索的123个大白菜和20个小白菜品种中，芽再生率为0－97.5%，平均每子味生芽数为1.0-10.7个。17个大白菜和5个小白菜品种的不定芽再生率在80％以上。芽再生率与品种起源地、结球类型及熟性无相关。     

茄子高效离体再生体系的优化建立

为获得茄子高效再生体系,本试验以7份茄子材料的无菌苗子叶、下胚轴为外植体,研究了不同激素浓度配比以及不同基因型对茄子离体再生的影响。结果表明:子叶的再生效果优于下胚轴;下胚轴形态学上端再生能力显著高于形态学下端,下胚轴形态学上端出芽率为46%,出芽系数为1~3,下胚轴形态学下端出芽率为0;7份茄子子叶的最优愈伤和不定芽分化培养基均为MS+2 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂,出愈率和出芽率均为100%;最优不定芽伸长培养基为MS+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂,伸长率可达93%;7份材料中,徐州长茄和成都墨茄子叶的再生频率较高,分别为0.93和0.73。本研究获得了较高的茄子再生频率,成苗迅速,为利用组织培养技术进行茄子种质创新提供了科学依据。     

黄瓜子叶节离体体细胞再生体系研究

以华北类型自交系L04-203为材料,通过对外植体类型、不定芽诱导培养基、芽伸长培养基等进行研究,建立了以子叶节为外植体通过器官发生方式的黄瓜离体体细胞再生体系.研究表明:附带短下胚轴子叶节为最适外植体；BA/NAA比例对愈伤形成和再生频率有直接影响,NAA为零或低浓度时,在外植体切口处直接形成再生芽,随着NAA浓度增...     

杜梨子叶离体再生体系的建立

为梨树品种改良、遗传转化及功能验证奠定基础,以杜梨(Pyrus betulaefolia)子叶外植体为试验材料,研究了基本培养基、植物生长调节剂、暗培养时间、碳源、外植体等因素对其再生能力的影响,筛选出适合杜梨不定芽分化的培养及生根培养条件,建立杜梨子叶的再生体系。结果表明,子叶诱导不定芽生长最佳培养基为NN69+6-BA5mg/L+IBA0.05mg/L+蔗糖35g/L,再生频率为100%;出芽后最佳继代培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,平均再生芽数4.84;诱导不定芽生根最佳培养基为1/2MS+IBA1.0mg/L+蔗糖30g/L,生根率为80%。通过上述条件的优化,建立了杜梨子叶高效的再生体系。     

阜平大枣无芽茎段再生不定芽的初步研究

以MS为基本培养基,幼嫩的阜平大枣无芽茎段为试材,研究了灭菌时间、暗培养、以及植物生长调节剂对无芽茎段诱导不定芽再生的影响。结果表明：无芽茎段以灭菌8-10分钟为宜,暗培养21天最佳,在MS基本培养基上附加6-BA 1.0mg.L-1,,IBA 0.1mg.L-1再生率和平均出芽数显著高于其它处理, 分别为85.42%和 3.23,而且不定芽经培养后生长成枣头一次枝。     

杏叶片离体繁殖研究

杏叶片培养可以产生不定芽，ZT与2，4－D配合能诱导出愈伤组织，其培养基为MS＋ZT4．0mg/L 2,4-D 3.0mg／L，但只有在KT与NAA配合使用时才能从叶愈伤组织中分化出少量不定芽，30g/L山梨醇对叶片愈伤组织分化不定芽的作用比同浓度的蔗糖强，愈伤组织第11次继代培养中，在NAA浓度一定（5．0mg/L)的情况下，随着KT浓度的增加，新愈伤组织产生率逐步增加，且愈伤组织幼嫩，茂密，第13次继代培养时，只有MS＋NAA6．0mg/L KT2.0mg/L 山梨醇30g/L及MS＋NAA5．0mg/L KT4.0mg/L＋蔗糖30g/L的培养基可以产生不定芽，产生率分别为6．67％和13．33％，叶片正铺与反铺对愈伤组织的诱导率均达100％，不仅正铺所产生的愈伤组织比反铺的重量大，而且只有正铺才能诱导出不定芽。     

影响长寿花离体培养及植株再生的几个因素

对长寿花茎段培养7～8d,部分茎段腋芽萌动。30d培养结果表明,芽诱导的最佳培养基是：MS+6-BA1.0mg?l-1+NAA0.5 mg?l-1;芽伸长的最佳培养基是：1/4MS;形成有效节的最佳培养基是：MS。继代培养中各培养基上无叶茎段均较带叶茎段萌芽率高。在5、6、7号培养基上,叶片培养9d时,从叶柄基部开始形成不定芽,在其它培养基上,14d才开始有不定芽形成。30d培养结果还表明,诱导叶片再生不定芽的最佳培养基是：1/2MS+6-BA1.0 mg?l-1。诱导根生长的最佳培养基是：1/4MS。     

大丽花叶片离体再生体系的建立

为了建立大丽花高效遗传转化体系及解决今后通过植物基因工程选育新种质的问题,以大丽花为试材,研究光照条件、叶片生理状态、激素浓度等因素对叶片再生的影响,建立以大丽花离体叶片为外植体的高频再生体系。研究结果表明：以顶部充分展开的25天叶龄的无菌苗叶片为外植体,在含KT 7 mg/L+NAA 0.05 mg/L的MS分化培养基上,暗培养15天后转到光下培养,20天后开始有不定芽直接从叶片上分化产生,出现的高峰期在接种后30~35天,芽分化率最高可达86%,平均叶片再生芽位点数为5.0。待不定芽长至2 cm以上时,将其剪下转到生根培养基1/2MS+ NAA 0.1 mg/L上培养后得到生根的完整植株。     

安祖花愈伤组织再生体系的建立及染色体检变

试验以安祖花幼嫩叶片和无菌苗叶柄为外植体,通过愈伤组织诱导途径,建立快速高效的安祖花再生体系。结果表明：最适宜的诱导叶片和叶柄愈伤组织的培养基分别为1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D和1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2,4-D;诱导出愈伤组织在1/2MS+2.0 mg/L KT+0.1 mg/L NAA培养基上能很好的分化不定芽苗;1/2MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培养基可对再生芽实现增殖与复壮;最适宜的生根培养基为1/2MS+0.05 mg/L NAA。试验通过观察安祖花继代过程中愈伤组织细胞染色体变异的情况,发现随着继代次数的增多染色体变异细胞的频率也随之上升,并且染色体变异多为非整倍体变异。     

杨树叶片高效离体再生系统的构建

利用速生杨树（Populus.tomentosa Car）叶片为外植体建立离体培养体系,结果表明,叶脉处和叶柄处,极易发生不定芽;芽大多是从叶片上直接产生;培养基中BA浓度是影响不定芽形成的关键;BA浓度在05~2.0mg/L范围内均有不定芽发生,BA 1.0mg/L与NAA 0.05mg/L搭配有利于不定芽的形成,培养基中添加GA3 0.1~0.2mg/L可以提高不定芽的发生频率,增殖培养基采用MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.05mg/L+GA3 0.05mg/L,不仅能够快速增殖,而且芽苗粗壮,玻化率降低。生根过程采用过渡培养效果较好,ABT3生根粉的加入,使试管苗质量大为提高,在此基础上建立起杨树叶片离体再生系统,利用该体系能够获得高的芽苗再生频率,但是不同品种间略有差异。     

Plant regeneration from in vitro cultures of cotyledon explants and anthers of Sinapis alba and its implications on breeding of crucifers

Summary Protocols for plant regeneration from cotyledon explant and anther cultures of Sinapis alba have been developed for creating doubled-haploids and somaclonal variation. Among the several cultivars tested in this study, only Arda responded well to in vitro plant regeneration both from anther-as well as cotyledoncultures. Multiple shoot formation in cotyledon explants, which always followed a brief callusing phase, was found to be the best on MS medium with ZEA (1.0mg/l) and NAA (0.1mg/l). Regeneration frequency declined sharply in the absence of auxin or presence of other cytokinins and/or auxin. The frequency of shoot regeneration also declined with reduction in the photoperiod to 16h. On MS + BAP (1.0mg/l) + NAA (1.0mg/l) medium, cotyledonary explants showed profuse callusing, which could regenerate shoots on high ZEA + low NAA/IAA medium. However, it declined with progressing time in culture. Anthers, excised from fresh as well as cold pretreated buds, cultured on 10% sucrose containing MS media with different hormonal constitution, developed calli and/or embryos. Initial culture temperature was important with embryogenesis occurring only in anthers cultured at 30°C for 3 weeks. A high temperature (35°C) treatment was lethal for both callus as well as embryo formation. While BAP + NAA and ZEA + NAA/IAA supported embryogenesis, further plant regeneration from anther-or embryo-callus could be achieved in ZEA + NAA/IAA media. Some of the regenerants flowered already in vitro and had small and sterile flowers. Cytological examination of some of the root differentiating calli indicated the presence of haploid as well as diploid cells. Shoots were rooted during prolonged incubation on the same medium or on transfer to MS (reduced)/ B5 + ZEA + NAA media.     

葡萄叶盘法基因转化中抗生素种类和浓度的筛选

本研究以优良无核葡萄品种莫利莎葡萄试管苗为试材,研究了卡那霉素（Kan）、潮霉素（Hyg）对葡萄继代苗生长和离体叶片再生的影响,以确定叶盘法基因转化的选择压和转化体的筛选浓度;同时研究了不同浓度的头孢霉素（Cef）和羧苄青霉素（Carb）对葡萄离体叶片再生的影响,以确定侵菌共培养后合适的抑菌抗生素种类和浓度。试验结果表明葡萄继代苗对Hyg的敏感性强于Kan,葡萄遗传转化更适合使用潮霉素磷酸转移酶基因作为选择标记。Hyg 3.0mg/L即达到继代苗致死浓度,可作为转化后抗性苗的筛选浓度,Hyg 0.8mg/L完全抑制叶片不定芽的分化,可作为叶盘法转化时抗性芽的选择压。葡萄叶盘法基因转化中抑制农杆菌生长的抗生素可选用Cef 300mg/L或Carb 400mg/L,但对不定芽的分化有抑制作用。     

影响番茄子叶再生的因素

本试验以番茄"中蔬四号"品种为试材,对不同激素组合、不同种类外植体、子叶不同部位及接种方式对番茄不定芽再生的影响进行了研究,同时还筛选了种子消毒的最佳方法和不定芽生根的最佳培养基。研究结果表明,番茄种子表面消毒宜采用70%乙醇浸泡30s,然后再用20%的次氯酸钠加土温消毒20min;子叶中间段为最佳外植体,茎段次之,真叶的诱芽率最低;子叶诱芽的最佳培养基为MS+ZT2mg/L+IAA0.1mg/L,且背面朝上放置更有利于不定芽的分化;不定芽生根的最佳培养基为1/2MS+IAA0.3mg/L。这项研究为番茄转化体系的建立奠定了基础。