东北红豆杉RAPD反应体系的优化

[目的]研究东北红豆杉RAPD反应体系的优化条件。[方法]以东北红豆杉叶片为材料,用改进CTAB法提取DNA,分别从模板DNA浓度、引物浓度、dNTP浓度,Taq DNA聚合酶量及镁离子浓度5个方面对东北红豆杉RAPD扩增效果的影响进行分析。[结果]通过各因子的比较分析,建立了东北红豆杉RAPD优化体系：20μl PCR反应总体积中含模板DNA 10 ng,Mg^2＋2.0 mmol/L,引物15pmolμ/l,dNTPs 0.2 mmol/L,Taq DNA聚合酶1.0 U,10×buffer缓冲液2μl,以双蒸水补充至20μl。[结论]为进一步探索与东北红豆杉性别鉴定相关的研究提供技术支持。     

东北红豆杉RAPD反应体系的优化（摘要）（英文）

[目的]研究东北红豆杉RAPD反应体系的优化条件。[方法]以东北红豆杉叶片为材料,用改进CTAB法提取DNA,分别从模板DNA浓度（10、20、30、40、50 ng）、引物浓度（5、10、15、20、25 pmol/μl）、dNTP浓度（0.1、0.15、0.2、0.25、0.3 mmol/L）,TaqDNA聚合酶量（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 U）及镁离子浓度（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mmol/L）5个方面对东北红豆杉RAPD扩增效果的影响进行分析。[结果]用改良的CTAB法提取红豆杉基因组DNA,所得DNA质量较好,无杂质存在,条带整齐一致,而且能够取得比较理想的RAPD扩增效果。通过各因子的比较分析,建立了东北红豆杉RAPD优化体系：20μl PCR反应总体积中含模板DNA10 ng,Mg2 ＋2.0 mmol/L,引物15pmol/μl,dNTP0.2 mmol/L,TaqDNA聚合酶1.0 U,10×buffer缓冲液2μl,以双蒸水补充至20μl。[结论]为进一步探索与东北红豆杉性别鉴定相关的研究提供技术支持。     

东北刺人参RAPD反应体系的优化

以东北刺人参试管苗叶片为材料,建立东北刺人参RAPD反应优化体系.结果表明:20.0μL反应体系含250.0μmol/L dNTP,2.0μmol/L MgCl2,1×Buffer,0.3μmol/L引物,10.0 ng DNA模板,1.5 U Taq DNA聚合酶,9.8μL ddH2O;扩增反应程序为:94℃预变性5min,94℃变性45 s,36℃退火1 min,72℃延伸1.5 min,40个循环,最后72℃延伸7 min时获得的RAPD指纹图谱带型清晰、重复性好.     

东北红豆杉抗寒性分析

[目的]分析东北红豆杉在引种地新疆石河子的抗寒性。[方法]通过5个低温处理试验,测定叶片叶绿素含量、丙二醛(MDA)、游离脯氨酸(Pro)、超氧物歧化酶(SOD)活性、质膜透性、可溶性糖(SS)指标。[结果]随着温度降低,东北红豆杉叶片内叶绿素含量和SOD活性依次降低,而质膜透性、Pro、MDA和SS含量递增。[结论]东北红豆杉对-30℃低温具有较好的抗逆性。     

东北红豆杉开花结实的规律

东北红豆杉雌雄异株，雌、雄花芽多着生于树冠外部1年生枝条叶腋处，在一定范围内较高的温，湿度有利于花芽的分化，在花粉形成过程中，尤其是减数分裂期遇到低温或持续低温，会导致大量花粉败育；而低温可以延长成熟后的风干花粉寿命，东北红豆杉结实量少，但不同年份间结实量的重复力却较高，单株间结实量重复力较小，说明年份间结实较稳定，而个体间结实量变异较大。     

谈东北红豆杉扦插繁殖技术

根据东北红豆杉生物学特性,运用常规及非常规无性繁殖手段进行育苗试验,较全面地研究了影响东北红豆杉愈伤组织形成、生根的因子及育苗的繁殖技术。     

东北红豆杉抗炎作用研究

[目的]研究东北红豆杉的抗炎作用。[方法]采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、甲醛致小鼠足肿胀的方法,以阿司匹林为阳性药对照,将东北红豆杉水煎液分为低、中、高剂量组（0．5、1．0、2．0g／ml）,观察东北红豆杉水煎液对小鼠的抗炎作用及其与剂量的关系。[结果]东北红豆杉水煎液低剂量组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀及甲醛致小鼠足肿胀没有显著抑制作用（P〉0．05）;中、高剂量组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀及甲醛致小鼠足肿胀均有显著抑制作用（P〈0．05）。[结论]东北红豆杉水煎液具有一定的抗炎作用。     

谈东北红豆杉扦插繁殖技术的研究

根据东北红豆杉生物学特性，运用常规及非常规无性繁殖手段进行育苗试验，较全面地研完了影响东北红豆杉愈伤组织形成、生根的因子及育苗的繁殖技术。     

东北红豆杉组织培养的研究

以东北红豆杉（Ｔａｘｕｓｃｕｓｐｉｄａｔａ）的不同外植体进行愈伤组织诱导、继代和再分化培养,结果发现在ＭＳ培养基上,幼叶的出愈率最高,达７８３％,在Ｂ５培养基上,幼基的出愈率最高,达７６０％。诱导愈伤组织最适２,４－Ｄ浓度为２－３ｍｇ·Ｌ－１。经抗氧化剂处理,愈伤组织在改良ＭＳ培养基上经多次继代培养,褐化现象减轻或消失,生长速率最高可达００９０ｇ·ｋｇ－１·ｄ－１（鲜重）。在分化培养基上,由愈伤组织诱导出绿芽点。     

中国境内东北红豆杉天然群体紫杉醇含量变异规律

利用高效液相色谱仪（HPLC）检测了中国境内东北红豆杉天然群体和同一群体内不同单株的紫杉醇含量,以及不同树龄或不同季节的紫杉醇含量变化。 结果表明,不同群体之间紫杉醇含量存在显著差异,群体间差异高达2.7倍; 群体内个体间紫杉醇含量的变异与群体间相当,同一群体（汪清）内不同单株之间紫杉醇含量差异高达4.3倍. 说明紫杉醇含量变异来自于群体间和群体内,其变异组成是群体间为84.6%,个体间为15.0%, 并且东北红豆杉紫杉醇含量的广义遗传力(H[[sup]]2[[/sup]])为82%。 因此,群体选择或单株选择可望获得较大的遗传增益。 同时,紫杉醇含量随着树龄的增大而升高;在生长旺季植株内紫杉醇含量较低,进入休眠期含量较高。 紫杉醇含量与生长量、积温、无霜期、降雨呈负相关（－0.646 8、－0.479 6、－0.240 5、－0.119 2）,与针叶长度显著正相关（0.717 7）,与经度和纬度正相关（0.277 8和0.332 1）。 随着纬度升高,生长量降低,紫杉醇含量呈现增加的趋势。      

东北红豆杉种子休眠机理与解除技术探讨

采用酶联免疫吸附分析法测定了东北红豆杉种子内源激素 (赤霉素、脱落酸、玉米素、吲哚乙酸 )含量 ,并结合形态解剖、变温层积、种子吸水性和种皮透气性等试验 ,探讨了东北红豆杉种子的休眠机理及解除休眠的技术 .秋季采收的东北红豆杉种子 ,虽然种胚结构完整 ,但体积小 ,不具备萌发能力 ,需要后熟 .风干种子形成大量脱落酸(ABA) ,种皮角质化、坚硬 ,阻碍了水气交换 ,幼小种胚被迫进入深度休眠状态 .解除休眠的技术是 ,机械磨损种皮 ,可通气、透水和减少萌发障碍 .流水冲洗 1周 ,将种子内的ABA含量降低到可以萌发的程度 .用赤霉素或赤霉素与细胞分裂素混合处理种子 ,可提前萌发 ,提高发芽率 .变温 (15～ 2 0℃ 3～ 5℃ )层积 ,可缩短种子休眠时间 ,层积前期暖温可加速胚的发育 ,低温是萌发成苗的必要条件 .经过 4～ 6个月暖温和 3～ 4个月低温层积 ,种子萌发     

东北矮紫杉组织、细胞培养及其紫杉醇生成的研究

 东北矮紫杉系灌木型东北红豆杉人工栽培品种 ,其株形矮、分枝多、生长快 ,可采收大量红豆杉枝条 ,也是园林常绿观赏树种 ,但其繁殖困难。本研究通过茎段腋芽培养建立了试管苗再生体系 ,为快速繁育红豆杉苗木创造条件。从茎、叶诱导出愈伤组织 ,建立了细胞悬浮培养系 ,为生物反应器生产紫杉醇打下基础。实验中对矮紫杉茎、叶、愈伤组织及细胞悬浮培养物中的有效成分进行薄层层析和高效液相色谱检测 ,发现它们中均有紫杉醇存在 ,而且细胞培养物中的含量高于茎、叶。该研究结果表明 ,东北矮紫杉是理想的解决紫杉醇来源的红豆杉人工栽培品种 ;研究还观察到 PVP是组培中解除培养物褐化的较好抗氧化剂     

东北红豆杉种胚形态发育调控技术和育苗研究

以东北红豆杉(Taxus cuspidata Sieb.et Zucc.)果实成熟后的种子为供试材料,通过多因子交叉重复试验对影响东北红豆杉种胚发育的主要因素及其水平进行了探讨,旨在筛选并确定调控东北红豆杉种胚形态发育的主要因素及其适宜水平。结果表明,东北红豆杉种胚发育的调控方法和主要因素及其水平为以饱和碳酸钠溶液浸泡种子20~30 min除油脂后用粗沙去除部分种皮,再用1.80 mg/L 6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、2.20 mg/L赤霉素(GA3)和0.30 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)混合溶液浸泡36 h,将种子与河沙(1∶3)混合,进行155 d的变温处理,变温幅度和时间:白天温度为(23±2)℃,处理10 h,夜间温度为(15±2)℃,处理14 h,子叶胚完全分化率98.0%,种子发芽率95.0%以上。     

超低温保存下东北红豆杉种子的活力

为建立东北红豆杉种质资源保存体系及种质资源库的建立提供科学依据,采用 TTC法对经过超低温保存的种子进行活力测定,比较了4种不同处理对种子生活力的影响。结果表明,超低温可以应用于东北红豆杉种子的贮藏,解冻方式是影响东北红豆杉种子超低温贮藏的重要因素,DMSO 的保护作用不明显,保存效果较好的解冻方式为快速解冻。     

东北红豆杉内生真菌的分离和筛选

从长白山自然保护区原始森林200多年生东北红豆杉（Tasxus cuspidata Siebet Zucc.)树皮中分离出21种内生真菌，经鉴定：1种属于子囊菌，20种属于半知菌。用薄层层析技术，测定了各菌种发酵代谢产物，经筛选发现：链格孢（Alternaria sp.,1011)、葡萄孢（Botrytis sp.,1014)、散囊菌（Eurotium sp.,1001)、曲霉（Aspergillus sp.,1003)4种内生真菌的代谢产物可与紫杉烷类物质显色剂－香草试液发生较明显的颜色反应。其中，链格孢（Alternaria sp.1011)菌种的代谢产物中有一种含量较大的组分还可与烯碘化铋钾生物碱试剂发生反应，经过光谱分析，该组分化合物I为紫杉烷类二萜Ⅲ型化合物，说明该菌能高产紫杉烷类物质。     

不同培养基对东北红豆杉愈伤组织诱导的影响

[目的]研究不同培养基对东北红豆杉（Taxus cuspidate Sied.et Zucc.）愈伤组织诱导的影响。[方法]研究了不同基本培养基、不同植物生长调节剂种类及水平对东北红豆杉愈伤组织诱导的影响。[结果]东北红豆杉愈伤组织诱导最好的基本培养基是WPM培养基,其次是B5培养基;生长素2,4-D的诱导效果在MS培养基上优于NAA,而在B5培养基上不如NAA;在MS培养基上,细胞分裂素KT对愈伤组织诱导起促进作用,2,4-D＋0.1mg/L KT、NAA＋1.0mg/L KT的诱导效果最好,6-BA不利于东北红豆杉叶片愈伤组织的诱导。[结论]该研究可为进一步研究东北红豆杉的组织和细胞培养以及快速繁殖提供依据。