番茄组织总RNA提取方法研究

从RNA的完整性、纯度和产量等方面比较了TRIzol,RNAplant,TRIpure等3种RNA提取试剂对番茄不同组织部位总RNA的提取效果.结果表明,RNAplant能从成熟组织中获得较高质量和产量的总RNA,用该方法提取的番茄老化组织总RNA经RT-PCR能成功进行内参检测.     

草莓不同组织RNA提取方法的改良研究

探讨一种适于草莓不同组织的RNA提取的改良方法。通过增加裂解液震荡强度、离心柱多次吸附、增加去蛋白液温育次数及漂洗次数等步骤对EASYspin RNA提取总RNA操作方法进行改进。结果表明,改良方法提取的草莓根、茎、叶、果实、花中的总RNA,电泳检测都出现清晰的28S和18S两条明显的条带,表明总RNA完整性较好;紫外分光计分析其OD260/OD280值在1.88至2.06之间,OD260/OD230值均大于2.0,RNA浓度含量为310~500μg/mL,表明提取的总RNA纯度好、含量高;基于RNA中mRNA反转录的RT-PCR扩增Actin基因分析结果表明,改良方法提取的草莓不同组织的总RNA质量高。总之,经过电泳、紫外、反转录分析结果证实,改良EASYspin适于草莓果实等不同组织总RNA的提取,是草莓类似果树种类总RNA提取的首选借鉴方法。     

草石蚕块茎总RNA提取及质量分析

采用3种方法提取草石蚕块茎的总RNA,以期筛选出适合草石蚕块茎总RNA提取的最佳方法。结果表明,RNAiso Reagent法提取草石蚕块茎总RNA的28S和18S条带清晰明亮,RNA无降解,无DNA污染,质量较好。王艳红法和TRIzolR Reagent一步提取法提取总RNA的28S和18S条带较暗,提取的总RNA有降解现象。根据紫外分光光度计检测结果分析,3种方法提取草石蚕块茎总RNA的纯度都较好。从提取RNA的产量来看,RNAiso Reagent法提取总RNA的浓度最高,为1112μg/mL,王艳红法次之,TRIzolR Reagent一步提取法最低。因此,RNAiso Reagent法是草石蚕块茎总RNA提取的最佳方法。     

木薯总RNA提取初步研究

为了筛选适合木薯不同部位总RNA提取的方法,采用常规CTAB法、TRIZOL和RNAplant试剂对木薯叶片和块根总RNA进行提取,并采用两步法进行RT—PCR检测。结果表明,采用常规CTAB法提取木薯总RNA耗时长、效率低,不利于提取大批量材料,但其RNA纯度较高,能产生理想的条带。TRIZOL有利于提取木薯叶片的总RNA而不能提取块根总RNA;RNAplant试剂可以提取木薯各部位的RNA,但纯度不高,且有DNA污染,需要用DNase I处理才能进行RT—PCR检测。TRIZOL和RNAplant试剂混合可以很好地提取木薯各部位总RNA,条带清晰,很少出现降解现象,但仍然无法消除DNA。因此,可根据木薯不同部位要求,选用合适的方法提取总RNA。     

一种从番茄果实中提取总RNA用于cDNA-AFLP分析的方法

番茄果实富含的次生物质严重干扰其总RNA的提取,本试验采用4种方法对番茄果实总RNA进行提取,筛选出一种适合于番茄后续的cDNA-扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)分析的高质量RNA提取方法,该方法排除了蛋白、多糖、以及多酚等次生物质的干扰,总RNA得率高、完整性好、纯度高.通过cDNA-AFLP分析方法的检测,得到了一组条带清晰和多态性丰富的图谱.     

豚鼠牙齿组织总RNA的提取研究

[目的]研究对RNA丰度值低、硬度大、处理困难的牙齿组织总RNA的提取和纯化技术。[方法]采集10只Hartley豚鼠的切齿和臼齿,分别对其进行了总RNA的提取和纯化,对所提纯的总RNA进行了琼脂糖凝胶电泳鉴定,以及浓度和纯度的测定。[结果]切齿和臼齿总RNA均可见明显的28S、18S和5S三条带,RNA浓度均大于100 ng/μl,A260/A280值均在1.7～2.0之间,A260/A230值在0.1～0.7之间,总RNA的提纯效果较好。[结论]为动物硬组织总RNA的提取提供了技术参考。     

马铃薯块茎总RNA提取方法比较

以马铃薯普通栽培品种“米拉”块茎为材料,对Trizol法、改良Trizol法、Logeman法和改良异硫氰酸胍法提取的总RNA进行比较与分析.结果显示,Trizol法提取的总RNA含有轻微蛋白质污染,经过改良后可完全除去,但成本高适合小量快速提取;Logeman法和改良异硫氰酸胍法均可提取得到高质量的RNA,而且成本较低适合大量提取.     

芸芥（E.Sativa Mill.）柱头总RNA提取方法比较研究

为了确立一种适合于芸芥柱头总RNA的提取方法,以芸芥柱头为材料,在常规异硫氰酸胍法的基础上提取和纯化总RNA.结果表明.采用常规异硫氰酸胍法提取的芸芥柱头总RNA,28 S RNA和18S RNA条带的亮度之比接近于1:1,而不是所要求的2:1,产生了明显的降解.改进异硫氰酸胍法提取的芸芥柱头总RNA,28S RNA和18S RNA条带的亮度之比接近于2:1,提取的RNA完整性好,但存在痕量DNA污染.用DNase降解痕量DNA,发现DNA去除较干净,且RNA没有发生降解,可作为反转录底物进行第一链cDNA合成.确立了一种适合于芸芥柱头总RNA的提取与纯化方法,为芸芥自交亲和基因的克隆及功能分析奠定了基础.     

一种从平菇菌丝中提取总RNA的方法

本实验建立了一种从平菇菌丝中提取总RNA的方法。对利用该方法提取的总RNA进行凝胶电泳、紫外分光光度检测,结果显示:所提取RNA的条带清晰,无降解,具有较高的纯度。RT-PCR分析结果进一步表明,所提取的RNA质量较好,能够用于后续的分子生物学研究。     

甜高粱总RNA提取方法的比较研究

以LTR102甜高粱为材料,比较改良TRIzol法、CTAB法和SDS法提取甜高粱总RNA的效果.利用普通琼脂糖凝胶分析3种不同方法所提取的RNA的完整性,并用紫外分光光度计分析RNA的纯度.结果表明:改良TRIzol法能有效去除多糖和蛋白,提取的RNA中28S rRNA亮度约为18S rRNA的2倍,D260 nm/D280 nm值介于1.8～2.0;CTAB法提取的RNA泳道模糊不清,杂质多,有污染现象;SDS法提取的RNA中28S rRNA有缺失现象,降解严重.改良的TRIzol法适合甜高粱总RNA的提取.     

墨兰舌瓣总RNA提取方法比较研究

为获得墨兰舌瓣总RNA最佳提取方法,以墨兰"南菊"舌瓣为材料,利用CTAB法、华舜植物叶总RNA提取试剂盒、Trizol法、天根RNAsimple总RNA提取试剂盒、Bioteke通用植物总RNA提取试剂盒、Bioteke通用植物总RNA提取试剂盒DNaseI过柱消化法、宝生物RNAiso-mate for Plant Tissue及宝生物RNAiso-mate for Plant Tissue改良法提取舌瓣总RNA。通过RNA产率、纯度、电泳图谱和RT-PCR等分析,确立适用于墨兰舌瓣RNA分离的方法。结果表明:宝生物RNAiso-mate for Plant Tissue改良法提取的RNA除了28S,18S,5SrRNA清晰条带外,RNA的得率和纯度优于其他供试方法。RT-PCR结果进一步证实宝生物RNAiso-mate for Plant Tissue改良法提取的总RNA可用于进一步的分子生物学试验。     

棉纤维总RNA提取方法的比较与分析

【目的】筛选适合棉纤维总RNA的提取方法,并对其进行改良,以满足转录组和表达谱测序要求。【方法】采用三种方法提取棉纤维总RNA,即改良的热硼酸法、Trizol法和离心柱试剂盒法。【结果】改良的热硼酸法提取的棉纤维总RNA质量最好,同时对该方法的改良更适合不同时期相同棉花品种和相同时期不同棉花品种棉纤维总RNA的提取。【结论】通过比较棉纤维总RNA的提取方法,发现改良的热硼酸法提取棉纤维总RNA质量最好,且对该方法的改良提取的总RNA更能够满足转录组和表达谱测序的要求。     

水稻抑制差减杂交技术中叶片总RNA提取方法的探讨

为建立水稻抑制差减杂交技术中叶片总RNA最佳的提取方法,以5叶期水稻品种合江19为提取总RNA的材料,对Trizol法和两种改良Trizol法提取的水稻叶片总RNA纯度和完整性进行了比较研究。基因定量仪检测结果表明,Trizol法、改良Trizol法Ⅰ和改良Trizol法Ⅱ提取的RNAOD（260／280）分别为1．529、1．755和1．991;琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,改良Trizol法Ⅱ提取的RNA具有28s、18s和5s3条清晰的条带,且无降解,而其他两种方法提取的RNA质量较差,均有降解。该研究结果说明改良Trizol法Ⅱ提取的RNA完整性好和纯度较高,该方法优于Trizol法。     

两种马铃薯块茎总RNA提取方法的比较

以马铃薯普通栽培品种"大西洋"的试管薯为材料,针对马铃薯块茎富含多糖和酚类化合物的特点,分别采用Chan法和Trizol法提取马铃薯块茎总RNA。结果表明,Chan法比Trizol法更适宜提取马铃薯块茎总RNA,该法提取的总RNA的28S、18S和5S rRNA条带清晰可见,无降解现象,未被蛋白质、多糖、酚类物质以及残余试剂所污染,且通过RT-PCR技术可以成功扩增出马铃薯腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶AGPase小亚基基因。     

几种植物组织总RNA提取方法的特点及疑难对策

植物组织总RNA的提取方法较多,在提取过程中会遇到酚类物质、多糖和蛋白质的干扰及外源RNase污染等问题,笔者对几种植物组织总RNA提取方法的特点、提取过程遇到的问题及解决问题的对策进行了简要介绍。     

Trizol试剂法快速高效提取3种作物不同组织总RNA

[目的]建立适用于禾本科作物不同组织总RNA的快速、高效提取方法,为进行后续的分子生物学研究奠定基础.[方法]采用Trizol试剂法,通过改变抽提上清液吸取量、沉淀方法及沉淀漂洗次数,对甘蔗、玉米和水稻的叶片、茎尖和根尖的总RNA提取方法进行优化.[结果]与吸取0.4 mL上清液相比,吸取0.2 mL上清液的总RNA OD260/OD280、OD260/OD230值分别在1.95~2.00和2.11~2.44,所获得的总RNA纯度较高.沉淀漂洗两次的OD260/OD230值(2.11~2.47)明显高于沉淀漂洗1次的总RNA OD260/OD230值(1.01~1.61),总RNA纯度较高.经异丙醇沉淀所得的各材料的总RNA 28S、18S和5S谱带清晰,无拖尾现象,总RNA完整性较好;LiCl沉淀法的RNA条带较模糊粘连,5S条带明显弥散,总RNA产率相对较低.以Trizol-异丙醇法提取的甘蔗总RNA为模板进行GAPDH基因片段扩增,所获甘蔗的叶片、茎尖和根尖的GAPDH基因表达丰度很强,无特异扩增,目的片段长度为153bp.[结论]改良Trizol-异丙醇法提取甘蔗、玉米和水稻不同组织的总RNA带型清晰、完整性好、纯度和产率高,适用于快速、高效提取禾本科植物不同组织总RNA.     

几种提取液对苹果成熟叶片总RNA提取质量的影响

[目的]筛选一种快速有效地提取高质量的苹果成熟叶片总RNA的提取液。[方法]以红富士苹果成熟叶片为材料,用3种不同的提取液提取苹果成熟叶片的总RNA,并通过分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和RT-RCR检测RNA质量。[结果]3种试剂中2种可以提取出总RNA。[结论]用RNAiso-mate for Plant Tissu和RNAiso Plus搭配使用和RNAiso for Polysaccharide-rich Plant Tissue单独使用均可提取出质量较好的RNA,前者质量优于后者。     

濒危南药白木香愈伤组织总RNA提取方法研究

分别采用SDS-酸酚法、CTAB法、异硫氰酸胍法提取白木香愈伤组织总RNA,通过比较发现,异硫氰酸胍法提取白木香愈伤组织总RNA的效果比其他两种方法更好。利用异硫氰酸胍法提取的白木香愈伤组织总RNA具有较好的完整性,OD260/OD280介于1.8～2.0之间。成功建立了白木香愈伤组织总RNA快速提取方法,可为其他药用植物总RNA提取提供借鉴。     

辣椒叶片总RNA提取与质量分析

用3种不同方法提取辣椒叶片的总RNA,研究辣椒叶龄和基因型对总RNA提取的影响和筛选辣椒总RNA提取的最佳方法.结果表明,方法2为辣椒叶片总RNA提取的最佳方法;从新叶中提取的总RNA的亮度高,完整性最好,中龄叶次之,老叶最差;辣椒材料0860-1总RNA的28 S和18 S条带明亮,质量浓度最高,材料0876和08122的这些条带较暗,质量浓度低.