鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗的研究：Ⅲ.二联苗免疫…

本文报道了鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗免疫不同品种成年鸭后，其血清中抗鸭瘟病毒和鸭肝炎病毒的ＥＬＩＳＡ抗体消长规律，从而为临床上合理地应用二联苗提供理论依据。试验结果表明，二联苗免疫鸭后抗体的消长与鸭的免疫力密切相关。     

鸭瘟弱毒疫苗诱导IgA、IgM和IgG产生规律的研究

【目的】探讨鸭瘟弱毒苗诱导鸭局部黏膜和系统免疫中抗体发生的规律。【方法】将DPV弱毒苗Cha株经皮下、口服和滴鼻途径免疫20日龄樱桃谷鸭后60 d内定时随机剖杀5只鸭,采集血清、气管和消化道（食道、十二指肠、空肠和直肠）分泌液,应用间接ELISA检测抗DPV的IgA、IgM和IgG抗体滴度（以lg表示）。【结果】所有免疫鸭检测样品中均可检测到DPV特异性IgG、IgM和IgA抗体。血清中抗体滴度由高到低均为IgG、IgM和IgA,其中IgM检出时间最早,IgG存留时间最长。皮下免疫DPV弱毒苗可更早诱导鸭血清中生成特异性IgG,且抗体滴度最高;气管和消化道分泌液中抗体滴度由高到低均为IgA、IgM和IgG,其中IgA和IgM检出时间最早,IgA存留时间最长。口服和滴鼻途径免疫鸭消化道和气管分泌液中IgA滴度较皮下免疫鸭高。【结论】不同途径免疫鸭瘟弱毒疫苗均可迅速诱导免疫鸭体液免疫介导的黏膜免疫和系统免疫。以DPV特异性IgA为主要抗体的黏膜免疫在预防DPV强毒早期对鸭消化道和呼吸道等局部黏膜的感染中具有十分重要的作用,使DPV弱毒疫苗快速产生免疫保护的机制从黏膜免疫的角度得到一定程度解释。     

鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗的研究 Ⅳ、疫苗的田间免疫试验

本文报道鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗的田间免疫试验。试验采用不同品种鸭群首次免疫（30日龄）后不同日龄和加强免疫（168日龄）后不同时间（天）的鸭抵抗1万倍最小致死置鸭瘟病毒（DPV）强毒攻击的能力以及鸭首次免疫后不同日龄鸭血清中抗DHV中和抗体液度和加强免疫后不同时间（天）所产的蛋孵出的1日龄雏鸭抵抗1万倍LD60鸭肝炎病毒（DHV）强毒攻击的能力。试验结果表明：30日龄的雏鸭进行首次免疫，其对鸭病毒性肝炎的免疫期达5．5－6个月，对鸭瘟的免疫期达9个月；产蛋前（23-24周龄）进行加强免疫，则对鸭瘟和鸭病毒性肝炎的免疫期均达到9个月。经过1990－1995年大面积对天府肉鸭（曾祖代、祖代和父母代）、樱桃谷鸭（祖代和父母代）四川麻鸭、建昌鸭和奥日星鸭（祖代和父母代）共1千余万羽份的免疫注射，免疫效果良好，深受使用单位的欢迎。     

鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗的研究：VI.二联疫苗对…

本文报道鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗对雏鸭进行早期免疫的试验结果。试验采用不含鸭瘟和鸭病毒性肝炎母源抗体和含不同滴度母源抗体水平的１日龄的四川麻鸭雏鸭，用鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫经皮下注射、饮水、滴鼻和喷雾进行免疫，探索不同免疫途径对鸭瘟和鸭病毒性肝炎的免疫效果及免疫持续期，选出最佳免疫途径。试验结果表明：１．对于没有母源抗体的１日龄雏鸭，用鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗进行免疫的最佳是皮下注射和     

鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗的研究

本文报道了规模化养鸭中应用鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗防制鸭瘟和鸭病毒性肝炎的适用的免疫程序。试验采用了测定血清中相应抗体滴度以及免疫鸭抵抗鸭瘟强毒攻击的能力和免疫鸭的下一代雏鸭抵抗鸭肝炎病毒强毒攻击的能力来进行判定。     

鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗的研究 Ⅱ、稳症性、保存条件及保存期的测定

本文报道了鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗的稳定性、保存条件和保存期。稳定性的测定是采用了不同保存条件、不同保存期（月）的二联苗，用抗鸭瘟高免血清或抗鸭病毒性肝炎高免血清中和掉二联苗中的相应弱毒后，测定剩下的鸭病毒性肝炎弱毒和鸭瘟弱毒（满度）分别对9日龄鸡压的半数致死置（LD60）和对鸡胚成纤维细胞（CEF）的半数感染量（TCID60）来判定二联苗的稳定性．保存期的测定是采用不同保存条件（℃）不同保存期（月）的二联苗免疫成年鸭，10天后采血测定抗鸭肝炎病毒中和抗体效价及抵抗1万倍最小致死量鸭瘟强毒攻击的能力．试验结果表明：非冻干二联苗子－15—25℃条件下可保存18个月，0℃冻冻结态下可保存1年，4－10℃可保存半年，15－25℃保存10天。疫苗冻干后，－15—25℃条件下可保存20个月，0℃保存问个月，4－10℃保存12个月，15－25℃保存20天．     

鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗的研究 Ⅵ.二联疫苗对雏鸭早期最佳免疫途径的研究

本文报道鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗对雏鸭进行早期免疫的试验结果。试验采用不含鸭瘟和鸭病毒性肝炎母源抗体和含不同滴度母源抗体水平的１日龄的四川麻鸭雏鸭，用鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗经皮下注射、饮水、滴鼻和喷雾进行免疫，探索不同免疫途径对鸭瘟和鸭病毒性肝炎的免疫效果及免疫持续期，选出最佳免疫途径。试验结果表明：１．对于没有母源抗体的１日龄雏鸭，用鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗进行免疫的最佳途经是皮下注射和饮水免疫，其中皮下注射效果比饮水稍好：①到３日龄产生对鸭病毒性肝炎部分免疫力，４日龄产生坚强免疫力；②皮下注射到３日龄、饮水免疫到４日龄均产生对鸭瘟的坚强免疫力，保护期持续２个月以上。２．对有母源抗体的雏鸭进行免疫的最佳途经是饮水免疫：①到３４日龄产生对鸭病毒性肝炎部分免疫力，５日龄产生坚强免疫力；②３４日龄产生对鸭瘟部分免疫力，５日龄产生对鸭瘟的坚强免疫力，其免疫持续期２个月以上。     

鸭瘟鸭病毒性肝炎二联纺毒疫苗的研究：Ⅱ,稳定性,保存条…

本文报道了鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗的稳定性、保存条件和保存期。稳定性的测定是采用了不同保存条件、不同保存期（月）的二联苗，用抗鸭瘟高免血清或抗鸭病毒性肝炎高免血清中和掉二联苗中的相应弱毒后，测定剩下的鸭病毒性肝炎弱毒和鸭瘟弱毒分别对９日龄鸡胚的半数致死量和对鸡胚成纤维细胞的半数感染量来判定二联苗的稳定性。     

鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗的研究 Ⅴ.规模化养鸭中对种鸭鸭瘟鸭病毒性肝炎免疫程序的研究

本文报道了在规模化养鸭中应用鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗防制鸭瘟和鸭病毒性肝炎的适用的免疫程序。试验采用了测定血清中相应抗体液度以及免疫鸭抵抗鸭瘟强毒攻击的能力和免疫鸭的下一代雏鸭抵抗鸭肝炎病毒强毒攻击的能力来进行判定。试验结果表明，种鸭鸭瘟鸭病毒性肝炎的免疫防制，使用鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗首次免疫的适宜时间为28－30日龄，二免时间为产蛋前即23－24周龄．这样在60周龄内可使种鸭不发生鸭瘟和下一代雏鸭不发生鸭病毒性肝炎。对于1－30日龄阶段的小鸭鸭瘟和鸭病毒性肝炎的防制主要是依靠母源抗体和环境的隔离、消毒来实现的。     

联合检测鸭瘟和鸭病毒性肝炎血清抗体的Dot-ELISA方法研究

本研究提取和纯化了鸭瘟病毒(DPV)和鸭肝炎病毒(DHV)的抗原作为Dot-ELISA的膜载抗原,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鸭IgG作为ELISA反应的第二抗体,建立了能够同时检测DPV和DHV抗体的Dot-ELISA方法。与中和试验相对比,本方法具有敏感、特异、快速的优点。     

应用ELISA检测鸭抗多杀性巴氏杆菌抗体的动态变化

应用ＥＬＩＳＡ间接法检测鸭抗多杀性巴氏杆菌抗体，具有快速及特异的优点。鸭免疫禽霍乱疫苗１周后，抗体滴度开始上升，４周后达到高峰。用巴氏杆菌Ｃ４８－１攻击不同抗体滴度的鸭只，抗体滴度为１：４００时，保护率为９０％，抗体滴度下降时，攻毒保护率也随即降低。     

猪链球菌病二联灭活疫苗的研制

以马莲球菌兽疫亚种（Stretococcus equi subsp.zooepidemicus)ATCC35246株和猪链球菌2型（S.suis type2)HA9801株作为生产菌株，制备氢氧化铝胶二联灭活疫苗，经过无菌及安全检验合格，肌肉接种仔猪。每头2mL。免疫15d后，对HA9801和ATCC35246的保护率分别为100%（26/26）和92.3%(24/26)。用二联灭活苗免疫后4周内仔猪体内抗体水平持续上升，从第5周开始逐渐下降；再次免疫后，抗体水平迅速回升，120d后仍维持较高水平，攻毒保护试验和抗体消长规律的测定显示，制备的猪链球菌病二联灭活苗具有良好的免疫保护作用。     

鸭瘟病毒对SPF鸭的致病性研究

【目的】探讨鸭瘟病毒（Duck plague virus,DPV）对SPF鸭的致病性。【方法】将DPV分别通过点眼滴鼻和皮下注射接种途径人工感染SPF鸭,以未攻毒健康SPF鸭为对照,观察各组鸭的发病情况及症状,于感染后不同时间随机剖杀试验组和对照组SPF鸭,采集肝脏、脾脏、肾脏、肺、心脏、气管、食道、肠道、胸腺、法氏囊、脑和泄殖腔等组织,常规方法制备石蜡切片,HE染色,观察各器官病理组织学变化,同时利用间接免疫荧光染色法（IFA）对DPV抗原在鸭体内的分布进行检测,并进行血常规和血液生化指标检测,分析了DPV对SPF鸭淋巴细胞转化率的影响。【结果】DPV接种后,引起鸭高热、下痢,组织器官出血、坏死,食道、泄殖腔黏膜出血、溃疡并有灰黄色假膜覆盖;病理组织学变化以血管壁损伤为主,肝、脾细胞变性、坏死,消化道黏膜上皮细胞坏死脱落。DPV感染后,在鸭的脾脏、胸腺、法氏囊、肝脏、食道、泄殖腔、肠道、肾脏、肺及气管中均检测到DPV抗原,且以肝脏、脾脏等组织中荧光最强;在脑和心脏中均未检测到DPV抗原。DPV感染组鸭血清中白细胞总数（WBC）、红细胞总数（RBC）、血小板总数（PLT）和总蛋白（TP）、血红蛋白（HGB）含量及丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性、淋巴细胞转化率与对照组差异大多达显著或极显著水平。【结论】DPV感染主要引起SPF鸭各组织器官广泛性出血;脾脏、胸腺、法氏囊等免疫器官首先受到攻击和损害,并造成免疫抑制;皮下注射接种DPV比点眼滴鼻接种对SPF鸭的致病性强。     

不同佐剂PRV灭活菌免疫奶牛及山羊抗体消长规律研究

用间接ELISA检测伪狂犬病毒（PRV闽A株）自制的油乳剂灭活菌、氢氧化铝胶灭活苗免疫山羊和犊牛的抗体效价，并以市场购买的基因缺失油乳剂灭活苗作对照，依据山羊抗体的ELISA效价找出抗体消长规律，采集犊牛、山羊血清用中和试验测抗体，试验结果表明，⑴首次免疫后抗体上升幅度低，仅2-3个滴度，且维持时间短，仅为2周；二免后抗体上升可高达12个滴度，且维持时间长达4个月。⑵试验组油乳剂灭活苗免疫效果优于氢氧化铝胶灭活苗。⑶用同种疫苗免疫的犊牛与山羊具有相似的抗体水平和消长规律。     

鸭禽流感疫苗免疫程序研究报告

为了科学制定鸭的禽流感疫苗免疫程序,进行了以下三方面的试验:①不同品种雏鸭母源抗体消长情况测定.结果表明,5～7日龄雏鸭AI-HI抗体可维持较高水平,15～17日龄下降至4.0log2以下.②疫苗首免后抗体检测.结果表明,鸭首次免疫后2周可测出AI-HI抗体,4周时达到高峰;抗体水平持续4周后开始下降.肉鸭免疫一次抗体水平差异较大,不能完全预防禽流感的发生.③肉种鸭及蛋种鸭免疫程序及抗体消长规律的测定.结果表明,7～14日龄初免,60日龄二次免疫和120日龄加强免疫(三次免疫),种鸭的AI-HI抗体水平最高分别可达到9log2、11 log2,二次免疫后8个月其AI-HI平均抗体水平为5.6 log2,三次免疫后10个月其AI-HI平均抗体水平为7.6 log2以上.     

鸡减蛋综合症——新城疫二联苗的研制与应用

用减蛋综合症（ＥＤＳ‘７６）ＡＶ－１２７和新城疫（ＮＤ）Ｌａｓｏｔａ毒株，分别接鸭胚和鸡胚，收获尿囊液，福尔马林灭活，用白油佐剂乳化成二联灭活疫苗。本苗接种产量鸡后１４天产生ＮＤ和ＥＤＳ’７６抗体，１个月持续升高，而ＮＤＨＩ抗体产生时间略早。二联苗物单苗有相同的免疫效果，两者无干扰性，免疫剂量以０．５ｍｌ／只为宜。接种后９个月ＨＩ抗体仍维持在较高水平，并能经受强毒的入击，疫苗在４－８℃条件下贮存１     

禽霍乱·新城疫二联油乳剂灭活疫苗研究(Ⅲ报)——疫苗对鸭和鹅的安全性及免疫效力试验

[目的]为禽霍乱、新城疫二联油乳剂灭活疫苗免疫鸭和鹅等水禽提供理论依据。[方法]将禽A型多杀性巴氏杆菌接种固体培养基收获的菌液与鸡新城疫病毒弱毒株La Sota接种易感鸡胚收获的感染鸡胚液混合,用甲醛溶液灭活后制备成5批二联油乳剂灭活苗,用于鸭和鹅的安全性及免疫效力试验。[结果]5批二联苗对鸭和鹅的安全性试验表明,免疫鸭和鹅均未出现任何不良反应;免疫效力试验表明,免疫后3周,鸭和鹅的新城疫血凝抑制抗体效价均≥4 log2,新城疫攻毒保护率均为100%,禽霍乱攻毒保护率为66.7%~83.3%。[结论]该二联苗用于免疫鸭和鹅安全可靠,免疫效果良好。     

鸭坦布苏病毒病灭活疫苗（HB株）母源抗体的消长规律

【目的】评价鸭坦布苏病毒病灭活疫苗母源抗体的效力,制定疫苗的最小免疫日龄。【方法】随机采集鸭坦布苏病毒病灭活疫苗（HB株）二免后135日樱桃谷种鸭的种蛋孵化,随机取5、7、10和15日龄免疫种鸭后裔雏鸭10只和相对应日龄非免疫种鸭后裔雏鸭5只,采血,分离血清,测定母源抗体,并以0.1mL/羽（含100DID₅₀）的剂量经腿部肌肉攻毒。观察雏鸭攻毒后的临床表现（采食量、粪便、精神和死亡情况）,观察至攻毒后10d。攻毒后2d经颈静脉采血,分离血清进行病毒分离。每份血清接种5枚6日龄SPF鸡胚,0.1mL/枚,37℃孵化,24h以内死亡鸡胚视为非特异死亡,孵化至168h。只要有1枚及以上鸡胚死亡则判该鸭感染。计算母源抗体雏鸭组的攻毒保护率和无母源抗体组的发病率。攻毒后5d,分别称量雏鸭的体重,计算平均日增重。对成对样本进行T检验,分析母源抗体对雏鸭增重的影响。通过试验鸭中和抗体、增重变化和病毒分离的方法评价母源抗体的效力。【结果】（1）1日龄雏鸭的母源抗体阳性率最高,1、5、7、10和15日龄雏鸭的母源抗体阳性率分别为56.1%（37/66）、40%（4/10）、50%（5/10）、30%（3/10）和0%（0/10）,5-7日龄抗体阳性率处于平台期,15日龄时母源抗体降低至全阴性;（2）攻毒后对照鸭表现精神沉郁（20/20）、仰翻和侧翻等神经症状（6/20）及死亡（2/20）,有母源抗体的雏鸭临床症状明显轻于对照组。（3）5、7、10和15日龄免疫种蛋孵化雏鸭攻毒后5d平均增重115.5、142.8、177.8和162.2g。5、7、10和15日龄非免疫种蛋孵化雏鸭攻毒后5d平均增重54.5、91.0、165.0和118.8g。（4）5、7、10和15日龄免疫种蛋孵化雏鸭的攻毒保护率分别为50%（5/10）、60%（6/10）、20%（2/10）和0%（0/10）; 5、7、10和15日龄非免疫种蛋孵化雏鸭的发病率均为100%。（5）5和7日龄雏鸭平均增重和攻毒保护率最高,分别为50%（5/10）和60%（6/10）,10和15日龄雏鸭的母源抗体尽管低（20%和0%）或阴性,仍然有明显的保护作用。【结论】（1）鸭坦布苏病毒病灭活疫苗母源抗体能够保护10日龄内雏鸭;（2）疫苗首次免疫的时间以7-10日龄为最佳。     

鸭出血性卵巢炎病毒血症研究

【目的】阐明鸭出血性卵巢炎病毒（DHOV-HB株）感染鸭后的病毒血症,为深入了解鸭出血性卵巢炎的发病机理、诊断和疫苗研究提供依据。【方法】24只250日龄北京鸭芯片标记后分别经口感染100倍稀释的DHOV-HB株（3×10⁴ELD₅₀）,并设空白对照组15只,同等条件下分别在隔离器内饲养,逐日观察10日,各组每日经翅静脉采集10只鸭血液（尽可能采集同一只鸭血液）,用于病毒分离和抗体测定。将攻毒后1-10 d的血清样本经卵黄囊途径接种6日龄SPF鸡胚,每份血清以0.1 mL/胚的剂量接种5枚SPF鸡胚,鸡胚接种后置于37℃条件下继续孵化,每日定时照胚2次,及时收获并统计24-168 h之内死亡的鸡胚,死亡鸡胚胚体经剪碎,研磨,离心后采用RT-PCR的方法检测病毒核酸,有1枚及1枚以上死亡鸡胚,且DHOV病毒核酸检测阳性,即将该鸭判为病毒分离阳性。同时采用中和试验测定攻毒后4-10 d的血清抗体,每个血清稀释度接种5枚SPF鸡胚。鸡胚接种途径及特异性死亡的判定方法同上。判定标准如下：血清原液保护80%（4/5）以上的鸡胚判为抗体阳性,保护20%-60%（1/5-3/5）的鸡胚判为抗体可疑,不保护鸡胚（0/5）判为抗体阴性。【结果】试验鸭感染DHOV后的病毒血症和免疫反应密切相关。感染后1-3 d,病毒血症出现并达到高峰,病毒分离均100%（10/10）阳性;4-6 d病毒分离率开始下降,分别为90%（9/10）、70%(7/10)和30%（3/10）阳性;7-10日血清中不再存在病毒,均为阴性(0/10)。中和试验结果表明攻毒后4 d,血清中病毒分离率下降的同时血清中即可能存在较低滴度的抗体,鸡胚死亡时间延后,此时抗体100%（10/10）阴性;攻毒后6 d的血清抗体80%（8/10）阴性,20%（2/10）可疑;攻毒后7 d 70%（7/10）阳性,10%（1/10）阴性,20%（2/10）可疑;攻毒后9 d 90%（9/10）阳性,10%（1/10）可疑;攻毒后10 d 100%（10/10）阳性。空白对照组血清病毒分离（1-10 d）和抗体检测（4-10 d）均为阴性。【结论】（1）DHOV口服感染成年鸭后,1-3 d日血清病毒分离率最高,感染后4 d 病毒分离率开始下降,感染后7 d血清病毒分离阴性。感染后7 d抗体70%（7/10）阳性,感染后10 d 100%（10/10）阳性;（2）病毒血症的持续时间与特异性免疫应答密切相关。     

免疫增强剂提高禽用二联苗免疫效力的研究

为评价免疫增强剂(VA5)对禽用联苗的免疫增强作用,将VA5分别与市售鸡新城疫-传染性法氏囊(新法)二联苗合用免疫SPF鸡和蛋鸡、与新城疫-H9亚型禽流感(新流)二联苗合用仅免疫SPF鸡,评价免疫后的抗体效价和SPF鸡攻毒后的保护效力。结果显示,SPF鸡或蛋鸡免疫含VA5的新法二联苗、新流二联苗后,新城疫血凝抑制(HI)抗体效价比常规苗组提前1周达到6 log2,禽流感HI抗体效价比常规苗组提前1周达到7 log2,法氏囊血清琼扩抗体和中和抗体比常规苗组均提前1周合格,且3种抗体持续高于常规疫苗组。免疫含VA5疫苗组的SPF鸡对新城疫强毒攻毒,以临床症状判断,可达全保护;以囊病变和临床症状判断,对法氏囊的攻毒提供全保护;H9变异株攻毒后不排毒。对上述3种病毒的保护力均高于常规苗。上述结果表明,VA5免疫增强剂能够提高鸡新法二联苗、新流二联苗对鸡的免疫效力,具有很好的应用前景。