围产期相关激素对奶牛中性粒细胞功能调控及其与免疫抑制的相关性分析

围产期奶牛要经历妊娠、分娩和泌乳等生理过程,激素分泌模式和营养代谢模式均发生剧烈变化。由此导致的中性粒细胞功能低下是造成乳房炎、子宫炎等炎症性疾病高发的重要原因。妊娠末期、奶牛生殖相关激素分泌模式变化明显,而围产期相关激素如雌二醇、孕酮、催乳素等对奶牛中性粒细胞活化、趋化黏附、跨膜迁移、呼吸爆发、吞噬杀菌和胞外诱捕网形成等不同功能表型的影响和作用途径尚未完全明确。围绕这一科学问题,明确围产期相关激素对奶牛中性粒细胞不同功能表型的影响及相关调控机制,为全面认识围产期奶牛免疫抑制的形成机制、有效保障围产期奶牛健康提供研究基础和决策参考。     

奶牛中性粒细胞抗菌肽的提取及其对大肠杆菌的抑菌效果

[目的]从奶牛血液中性粒细胞中提取、分离抗菌肽,并对大肠杆菌进行初步抑菌试验。[方法]用5%乙酸提取奶牛血液中性粒细胞可溶性成分,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离奶牛血液中性粒细胞抗菌肽成分,回收抗菌肽各组分并对大肠杆菌进行抑菌试验。[结论]奶牛中性粒细胞可分离出2种抗菌肽蛋白,抗菌肽成分对大肠杆菌存在抑菌效果,其抑菌圈直径为:抗菌肽A为(16±2.6)mm,抗菌肽B为(12±2.8)mm。[结论]该研究为控制奶牛乳房炎的感染开辟了一条新途径。     

奶牛中性粒细胞功能活性研究进展

中性粒细胞(PMN)是奶牛乳房抵抗细菌感染的重要防御屏障,当乳腺感染后,PMN在细胞因子的诱导下向炎症部位聚集并发挥吞噬杀菌功能。然而,奶牛乳和血液中的PMN的功能活性却存在着差异。文章综述了PMN在奶牛体内的生长、迁移、凋亡、PMN的功能活性及其影响因素,对了解和防治奶牛乳腺炎具有一定的参考价值。     

奶牛中性粒细胞功能活性研究进展

中性粒细胞（PMN）是奶牛乳房抵抗细菌感染的重要防御屏障,当乳腺感染后,FMN在细胞因子的诱导下向炎症部位聚集并发挥吞噬杀菌功能。然而,奶牛乳和血液中的PMN的功能活性却存在着差异。文章综述了FMN在奶牛体内的生长、迁移、凋亡、FMN的功能活性及其影响因素,对了解和防治奶牛乳腺炎具有一定的参考价值。     

乙酰乙酸抑制脂多糖诱导的奶牛中性粒细胞炎症信号通路的激活

为研究乙酰乙酸(Acetoacetic acid,AcAc)对奶牛中性粒细胞炎症信号通路的影响,以脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的奶牛中性粒细胞炎症模型为研究对象,利用qRT-PCR、生化和酶联免疫吸附法(ELISA)测定IL-1β、IL-6、TNF-α和IKKβ激酶活性。结果表明:1)qRT-PCR结果显示,与对照组相比较,LPS处理组IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达显著增强(P0.01)。与LPS处理组比较,LPS+AcAc混合处理组,其表达量显著下调(P0.05);2)生化检测结果显示,与对照组相比较,LPS处理组中性粒细胞IKKβ激酶活性显著增强(P0.01)。与LPS处理组比较,LPS+AcAc混合处理组IKKβ激酶活性则显著降低(P0.05);3)ELISA结果显示,与对照组相比较,LPS增加促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β的释放。相对于LPS处理组,LPS+AcAc混合处理组促炎因子的释放则显著降低(P0.01)。综上,AcAc可以抑制LPS诱导的奶牛中性粒细胞炎症信号通路的激活,具有一定的抗炎功能。     

白芍制剂对中性粒细胞相关功能及磷酸二酯酶活性的影响

 【目的】以猪中性粒细胞为靶细胞,研究白芍制剂对其相关功能（呼吸爆发和弹性蛋白酶释放）及磷酸二酯酶活性的影响。【方法】中性粒细胞分离纯化后,以细胞色素C还原法检测中性粒细胞呼吸爆发,以弹性蛋白酶底物的减少反映弹性蛋白酶的释放量,以HPLC检测底物cAMP的变化反映磷酸二酯酶的活性等。【结果】白芍制剂呈剂量依赖性抑制中性粒细胞的呼吸爆发（P＜0.001）,3个不同浓度的抑制率分别为33.15%、45.96%和62.22%;对弹性蛋白酶的释放在低浓度时表现抑制作用（P＜0.05）,抑制率为23.22%,在高浓度时表现促进作用;对中性粒细胞磷酸二酯酶活性具有抑制作用,低、高浓度抑制率分别为13.24%和25.87%（P＜0.01）;HPLC指纹图谱分析表明白芍制剂主要存在5种成分。【结论】白芍制剂对猪中性粒细胞呼吸爆发具有明显的抑制作用,对弹性蛋白酶释放在低浓度有显著抑制作用,其作用机制可能与白芍制剂对磷酸二酯酶活性的抑制有关。     

大肠杆菌对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞bFGF及其受体FGFR2表达的影响

[目的]探讨大肠杆菌(Escherichia coli)对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)b FGF及其受体FGFR2表达的影响。[方法]取热灭活的0、105、106和108CFU/m L浓度的大肠杆菌作用于体外培养的奶牛乳腺上皮细胞,分别在作用后6、12、24和48 h,采用荧光定量PCR和Western blot方法检测b FGF和FGFR2的mRNA和蛋白的表达情况。[结果]b FGF mRNA表达与对照组相比随着大肠杆菌浓度的升高而显著上调(P0.01),24 h b FGF表达量最高。BMEC b FGF蛋白表达随着大肠杆菌浓度的增加而上调,24 h表达量达到最高;FGFR2 mRNA相对表达量除6 h组外随大肠杆菌浓度的增加而呈现降低、升高、降低的变化趋势,48 h表达量达到最高。各处理组与对照组相比FGFR2蛋白表达随时间的延长、菌液浓度的增加而上调。[结论]大肠杆菌刺激奶牛乳腺上皮细胞可以明显促进b FGF和FGFR2的表达,具有浓度和时间依赖性。     

中性粒细胞淋球菌感染模型的建立

目的 研究诱导型一氧化氮合酶（iNOS）及一氧化氮（NO）在中性粒细胞淋球菌感染模型中的表达。方法分离正常人外周血中性粒细胞,在10％胎牛血清DMEM培养液上培养3h,A组加入空白培养基,B组加入淋球菌菌液,随后在0、3、8、12h分别以实时定量荧光PCR测定iNOS mRNA表达,用镉还原法检测NO浓度。结果B组中iN08mRNA表达和NO水平均较A组升高（P〈0．01）,NO浓度在8h达到高峰。结论中性粒细胞淋球菌感染模型可成功模拟该菌体内微氧感染环境,可用于研究淋球菌致病机制。     

上腹部手术患者手术和麻醉对中性粒细胞凋亡及bc1-2基因表达的影响

目的：研究手术与麻醉对上腹部手术患者的中性粒细胞(PMN)凋亡及Bcl—2基因表达的影响。方法：分离围术期上腹部手术患者外周血中性粒细胞，采用流式细胞仪分析培养24h中性粒细胞凋亡及bcl-2基因表达的情况。结果：与健康人相比，手术患者术前中性粒细胞调亡被明显抑制(P＜0．01)，bcl—2基因表达明显上调(P＜0．01)。而与手术患者自身术前相比，硬外麻醉后中性检细胞凋亡抑制及bcl-2表达上调变化不明显，但手术切皮后3h、术后24h、72h变化有显著的差异(P＜0．01)，且以术后24h达峰值。结论：外科创伤可导致明显的PMN凋亡抑制，而bcl—2基因表达上调可能是创伤后PMN凋亡抑制的分子机制之一，硬膜外麻醉对PMN凋亡及bcl—2基因表达影响不大。     

干乳期高能饲喂围产期健康奶牛肝载脂蛋白B100 mRNA表达的研究

为阐明载脂蛋白B100在围产期奶牛脂肪肝及相关代谢性疾病发生过程中的作用，以β-actin作为内对照，用RT～PCR方法测定了干乳期高能饲喂围产期健康奶牛不同时期肝组织的apoB100 mRNA表达。结果表明：高能饲喂的围产期健康奶牛肝组织的apoB100 mRNA表达从产前至产后呈先升高后降低的趋势，其中产后14d比产后1d降低了61．45％（P〈0．01），且产前apoB100 mRNA表达显著高于产后（产后1d除外，P〈0．01）。干乳期高能饲喂对围产期奶牛肝脏载脂蛋白B100 mRNA表达有显著影响。     

Effect of Hypoglycemia on Performances, Metabolites, and Hormones in Periparturient Dairy Cows

In this research work, 24 multiparous holstein cows were used to evaluate the effect of hypoglycemia on periparturient metabolism and lactation performance. The cows were arranged into two groups of hypoglycemia （L） and normal plasma glucose （N） based on plasma glucose level. The same diets were fed ad libitum from 28 days before expected calving date to 28 days after calving. The parameters relative to energy balance, such as dry matter intake （DMI）, body weight （BW）, milk yield （MY）, and concentrations of plasma glucose, nonesterified fatty acids （NEFA）, β-hydroxybutyric acid （BHBA）, insulin （INS）, glucagons （GLN）, leptin （LP）, neuropeptide Y （NPY） in plasma were measured at regular intervals. Incidence of hypoglycemia was higher prepartum than that of postpartum （88% vs. 50%）, and the recurrence of hypoglycemia was reversed （31% vs. 100%）. Hypoglycemia did not affect feed intake before and after calving. With the increase of postpartum feed intake, incidence of hypoglycemia decreased rapidly, even disappeared at 28 days of postpartum. Hypoglycemia had no impact on prepartum BW, but BW in L group was lower than that of cows in N group at 1 day and 14 days of postpartum （P〈0.05）. Milk yield was not affected by hypoglycemia. Cows in L group had higher plasma NEFA concentration than cows in N group. It reached a peak （1442 μmol L^-1 vs. 1052 μmol L^-1） at day 1 of postpartum （P〈0.05）. Plasma BHBA concentration of cows in L group was higher than that in N group, which reached a peak （2.01 mmol L^-1 vs. 1.34 mmol L^-1） at 14 days of postpartum （P〈0.05）. Plasma concentration of INS and GLN was unaffected by treatment, but postpartum plasma GLN concentration obviously increased, especially in L group. Plasma concentration of LP and NPY before calving was unaffected by treatment, but postpartum LP level in L group was slightly lower than that in N group, and NPY level in L group was significantly higher than that in N group （P〈0.05）. Overall, periparturient dairy cows are easy to develop hypoglycemia, which stimulates lipid metabolism. Adaptive changes of some metabolites and hormones, such as NEFA, BHBA, INS, GLN, LP, NPY are of benefit to increase feed intake and recovery of NEB in periparturient period, but there still are some issues on interaction of those endocrine factors in the energy balance of periparturient cows to be understood further.     

热应激对奶牛泌乳性能的影响及其机制

随着温室效应加剧,奶牛热应激问题日益凸显,对乳业造成巨大经济损失。热应激是一复杂的生理应答过程,奶牛在温热环境下表现为呼吸和心率加快,直肠温度升高,采食量下降,对其内分泌系统和免疫系统造成负面影响,严重降低奶牛泌乳性能。目前关于奶牛热应激的报道多集中于生产试验,特别是饲喂功能性饲料添加剂对应激的缓解作用,但其具体作用机制尚不清晰。文章介绍了热应激对国内外不同地区奶牛产奶量和乳品质的广泛影响,并从能量代谢、内分泌、氧化应激、细胞凋亡和自噬等方面综述了热应激对奶牛泌乳性能的影响机制。能量代谢方面,从奶牛采食量减少、脂质分解和能量代谢紊乱等内在分子学机理角度解释了奶牛在热应激下处于能量负平衡状态的原因;内分泌方面,介绍了热应激对奶牛下丘脑-垂体-肾上腺轴/甲状腺轴/性腺轴/生长轴的调控,分析了激素变化对机体的影响及其作用机制;氧化应激方面,重点阐述了热应激通过影响机体内ROS水平从而产生氧化应激的分子机制及激活的相关防御信号通路;细胞凋亡和自噬方面,介绍了高温胁迫引起奶牛乳腺上皮细胞损伤,细胞凋亡相关基因表达引发的内源性和外源性细胞凋亡,而过度自噬引发的细胞损伤也对乳腺泌乳起负面调控作用。笔者指出,在可预见的未来,热应激将是奶牛养殖业面临的最大难题,应建立可控的奶牛热应激模型运用于生产实践研究,并加强奶牛乳腺上皮细胞水平的基础研究,结合高通量数据分析技术,系统揭示热应激的发病机制,为缓解热应激提供全面的理论依据。     

日粮中添加复合益生菌对奶牛生产性能的影响

[目的]为探讨相同日粮条件下添加复合益生菌对奶牛生产性能的影响.[方法]选用胎次、体重、产奶量基本相似的荷斯坦奶牛120头,随机分为2组,试验组日粮中添加复合益生菌9 ×1012个/d·头,试验期100 d,预饲期10 d,试验期90d.[结果]试验组与对照组相比产奶量分别在60和90d提高了5.4;和5.24;,差异显著(P＜0.05).试验组乳脂率在60和90d分别提高了3.21;和3.83;,并在90d差异显著(P＜0.05);试验期内,试验组乳蛋白率略有提高但无显著差异(P＞0.05);试验期30 d时试验组的乳糖率和非脂固形物比对照组分别提高了1.41;和1.35;,差异显著(P＜0.05),60和90d无显著变化.与对照组相比,试验期30、60和90d试验组的奶牛体细胞数分别下降了8.98;、10.15;和21.14;.[结论]日粮中添加复合益生菌可以显著提高奶牛产奶性能和增强奶牛抗病能力.     

运输前后奶牛血清蛋白质组的变化

【目的】从血清蛋白组研究运输对奶牛机体的影响,充分理解运输对奶牛的生理病理影响及其潜在的作用机制提供理论依据。【方法】采用二维凝胶电泳（2-DE）结合MADIL-TOF-TOF串联质谱的方法对运输前第7天、运输后3 h和第7天奶牛的血清进行蛋白质组分析鉴定。【结果】运输可引起奶牛血清中14个蛋白点的表达丰度发生变化,有12个蛋白点得到有效鉴定。与运输前第7天相比,血清白蛋白、IgG1 重链恒定区、类型II细胞骨架I和转甲状腺素蛋白在运输后3 h表达量降低,而α1-酸性糖蛋白、结合珠蛋白、nesprin-2、微管微丝交联因子1、酪氨酸蛋白激酶Fps85D、输出蛋白5和一个未知蛋白点在运输后3 h的表达量升高;在运输后第7天,除α1 酸性糖蛋白外,上述蛋白的表达量与运输前第7天无显著差异。【结论】运输引起变化的蛋白主要涉及机体急性期应答和免疫反应、物质运输以及细胞内多个代谢途径,表明运输引起了奶牛应激。     

瘤胃稳定性脂肪对产后奶牛产奶量和血液生化指标的影响

40头荷斯坦高产奶牛采用配对分组设计分为对照组和试验组,每组各20头。试验组奶牛自分娩当日起在基础日粮中添加400g瘤胃稳定性脂肪,至产后90日龄时结束。统计奶产量,并分别于产后0、15、30、45、60、75和90d经尾静脉采血,检测血浆总蛋白、白蛋白、球蛋白、葡萄糖、尿素氮和非酯化脂肪酸(NEFA)浓度。结果:补充瘤胃稳定性脂肪后牛奶产量显著升高(P<0.05),对血浆总蛋白、白蛋白、球蛋白、葡萄糖、尿素氮无显著影响,但引起血浆非酯化脂肪酸(NEFA)产后30d内显著升高(P<0.05)。本研究结果表明在奶牛产后日粮中添加瘤胃稳定性脂肪可提高产奶量,并可能在短期内促进脂肪代谢,但对血液蛋白质和葡萄糖含量无显著影响。     

Effect of Different Roughages on Milk Protein and Milk Fat Synthesis in Dairy Cows

The main purpose of this study was to determine the effect of a corn straw or mixed diet on milk production, milk composition and the expression of genes associated with lactation in mid-lactation Chinese Holstein cows. In this study, 10 healthy Chinese Holstein cows were randomly assigned to two groups and fed with different diets respectively, corn straw(CS) or mixed forage(MF) diet. CS group was fed roughage consisting of 53.8% corn straw only and the forge to concentrate(F : C) ratio [dry matter(DM)] was about 40: 60. MF group was fed roughage consisting of 3.7% Chinese wildrye and 23.4% alfalfa hay, the forge to concentrate(F : C) ratio(DM) was 70: 30. All the cows were fed 8 weeks and body weight, dry matter intake, body condition score, fat, protein, lactose, milk yield, total solid and somatic cell count(SCC) were recorded. Quantitative real-time PCR(q RT-PCR) was used to analyze cow mammary gland samples representing two different diets. The results suggested that different diet types had significant effects on milk yield, lactose, milk fat, milk protein, dry matter intake and somatic cell count in dairy cows, and cows fed MF diet improved milk production and lactation performance clearly(P0.05). In addition, m RNA expression of genes ACC, m TOR, STAT5, CSN2, PPARγ, FABP3 and PTEN in MF group was extremely significantly higher than that in CS group(P0.05). m RNA expression of AKT1, FAS, SCD and SREBP1 c in MF group was significantly higher than that in CS group(P0.01). In summary, the milk yield and composition in mixed forage group were significantly improved than those in corn straw group.     

不同泌乳阶段和产奶水平对奶牛淋巴细胞凋亡的影响

选择48头奶牛,分为6组,每组8头,分别为泌乳盛期,泌乳中期和泌乳末期,每个泌乳期设高产组和低产组,研究不同泌乳阶段和产奶水平下奶牛外周血淋巴细胞凋亡情况。结果表明:随着泌乳阶段的延长淋巴细胞凋亡率显著升高,其中泌乳末期最高为2.95%,显著高于泌乳盛期(P0.05),泌乳中期淋巴细胞凋亡和各阶段差异不显著;在泌乳盛期和泌乳中期,高产奶牛的外周血淋巴细胞凋亡率极显著地高于低产奶牛(P0.01),泌乳末期低产组淋巴细胞凋亡率升高为3.02%,高产组低产组,但差异不显著(P0.05)。由此可见,随着泌乳时间的延长,奶牛外周血淋巴细胞的凋亡率逐渐上升,并且高产奶牛更易于发生淋巴细胞的凋亡。     

黑龙江省奶牛养殖户经营调查

近年来,黑龙江省的畜牧业生产蓬勃发展,尤其在农村,畜牧业成为农业和农村经济的支柱产业,在某些村屯,可以说奶牛养殖是农民增收的重要渠道。为了解黑龙江省奶业发展情况和存在的问题。经过实地考察调研,从扶持奶业发展,规范奶业管理,实现规模化养殖等方面提出了政策建议。     

超数排卵对奶牛产奶量及繁殖能力的影响

用FSH+PGF_(2)对16头黑白花奶牛进行超数排卵处理。超排前4d和超排1～10d日均产奶量差异不显著(P>0.05)。超排采胚后1头因年老淘汰,1头冲胚时发现患有慢性卡他性脓性子宫内膜炎进行治疗未配,其余14头冲胚后发情正常,人工授精后均妊娠,和正常牛发情配种妊娠率无差异。超数排卵对奶牛产奶量及繁殖能力无影响。