猪肺炎支原体基因组DNA文库的构建

将猪肺炎支原体Z菌株接种于A26液体培养基中培养，在收获菌体细胞后，提取和纯化其基因组DNA。并经EcoRI大量酶切获得4．0－8．0kb的DNA片段，与λgtll载体臂连接为重组λDNA，然后进行包装，感染于Y1090宿主菌，构建了猪肺炎支原体基因组DNA文库，并得以表达。     

湖羊瘤胃微生物Fosmid文库的构建和分析

为了开发瘤胃微生物酶资源,本研究以湖羊瘤胃为对象,构建瘤胃微生物的Fosmid文库,并对其库容量、稳定性和功能性进行分析.文库共获得克隆12704个.通过Xho I和BamH I限制性酶切分析发现,文库插入片断平均为30.9 kb(17～55 kb),主要集中于36～40 kb和26～30 kb 2个区间;所建文库容量为393 Mb.HindⅢ限制性分析证实,在连续传代100次时,文库仍保持很好的稳定性.通过刚果红染色分析获得18个具有木聚糖酶活性的阳性克隆.上述结果表明该文库具有较好的库容量、稳定性和功能性,可用于后续酶资源开发.     

云南大额牛瘤胃宏基因组Fosmid文库的构建与分析

为研究云南大额牛瘤胃中丰富的降解纤维素类物质的基因,采用包埋法和脉冲场电泳技术直接从云南大额牛瘤胃内容物提取总DNA,经不完全酶切获得DNA片段,大小为23~48 kb,与pcc2 FOS vector连接,转化至E.coli EPI 300宿主细胞,构建瘤胃微生物宏基因组Fosmid文库。该文库共保存38400个克隆,平均插入片段大小约35.5 kb,空载率小于2%,库容达1363 Mb。通过对该文库进行部分纤维素酶活力筛选,获得具有羧甲基纤维素酶活性的克隆95个,木聚糖酶活性的克隆52个,同时具有这2种酶活性的克隆23个,这为进一步研究大额牛瘤胃内纤维素酶基因奠定了基础。     

广西巴马小型猪1号染色体 DNA文库的构建和鉴定

研究利用玻璃针显微分离了巴马小型猪外周血淋巴细胞有丝分裂中期的1号染色体,然后将显微分离的染色体进行简并寡核苷酸引物PCR（DOP—PCR）扩增,通过PCR技术和荧光原位杂交（Florescence in situ hybridization,FISH）技术对扩增产物来源进行鉴定后,将DOP—PCR产物与pMD18-T载体连接、转化以构建1号染色体微克隆文库。结果表明：DOP—PCR扩增产物与猪的1号染色体DNA同源,并且得到了插入片段为100～600bp的巴马小型猪的1号染色体微克隆DNA文库。     

家蝇基因组文库的构建

从孵化 36 h的蝇蛆中提取基因组 DNA,用限制性内切酶 Bcl 随机酶切 ,回收 10～ 2 3kb的酶切 DNA片段 ,通过匹配粘性末端与磷酸化的 EMBL3Bam H 酶切载体臂连接 ,在体外经包装系统包装成活的重组噬菌体 ,成功地构建了家蝇基因组文库。重组噬菌体转染 KW2 51 宿主菌 ,测定文库效价为 5× 10 4 pfu/m L     

利用SMART技术构建猪血管内皮细胞酵母双杂交cDNA文库

本研究旨在建立猪血管内皮细胞酵母双杂交cDNA文库,进而为研究猪瘟病毒的基因功能及致病机理提供良好的试验体系。体外培养猪血管内皮细胞,提取细胞总RNA,并用Oligotex mRNA Mini Kit纯化PolyA+mRNA,利用SMART技术合成双链cDNA(ds cDNA)。经CHROMA SPINTM TE-400Column纯化后的dsDNA与线性化的pGADT7-Rec共转化酵母感受态细胞Y187中,以同源重组的方式在酵母细胞内构建猪血管内皮细胞cDNA文库。结果获得的文库容量在6×106 CFU/mL,随机挑选24个克隆进行PCR检测,插入的片段大小集中在400² 000bp之间,平均插入长度为1 000bp左右,文库重组率为100%。本研究为从文库中高通量地筛选出与猪瘟病毒互作的重组子,即寻找与该病毒相互作用的受体蛋白奠定了坚实的基础。     

鹅基因组微卫星富集文库的构建与分析

为分离鹅(Anser cygnoides)微卫星序列片段,提取鹅基因组DNA,用Hae III和Rsa I内切酶消化并连接接头,再用接头特异引物进行PCR扩增。扩增产物与生物素标记的(AC)12探针杂交,杂交复合物用链霉亲和素包裹磁珠进行结合,得到单链DNA目标片段。再经PCR扩增,连接pMD19-T载体,转化入感受态大肠杆菌,得到微卫星富集小插入片段DNA文库。用Colony-PCR法筛选获得318个阳性克隆,并进行测序分析。结果表明,所测的318个序列有242个含微卫星序列,197个为有效微卫星序列,其中完全型(perfect)占60.9%,非完全型(imperfect)20.8%,混合型(compound)18.2%。(CA)n重复最为常见。文章为鹅种资源遗传多样性、分子进化、遗传图谱的构建及重要经济性状基因座定位等研究奠定了基础。     

SSH法构建奶牛乳房炎抗性相关基因的cDNA文库

以经产荷斯坦奶牛的乳腺组织为材料,抽提总的RNA,分离提纯Poly(A)+RNA,反转录并合成单链和双链的cDNA,经酶切形成200～800 bp的片段.将患乳房炎奶牛的cDNA分成2组,分别与不同的接头连接,再与正常奶牛的cDNA进行2次消减杂交和2次抑制性的PCR扩增;第2次PCR产物与pGEM-T载体连接,转化大肠杆菌TOP10感受态细胞进行文库扩增,构建了具有高消减效率的奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库.文库扩增后得到361个白色阳性克隆,随机挑选克隆进行PCR签定,插入片段主要分布在200～800 bp.文库的成功构建为进一步筛选、克隆与奶牛乳房炎抗性相关基因奠定了基础,对研究奶牛乳房炎抗性的分子机制以及乳房炎的综合防制具有重要意义.     

猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型抑制消减杂交文库的构建和分析

为了研究猪传染性胸膜肺炎放线杆菌（APP）不同血清型之间的差异表达基因,采用抑制消减杂交（SSH）法,以APP血清7型DNA作为测试方（Tester）、APP血清1型DNA作为驱动方（Driver）,进行2轮杂交和2轮选择PCR扩增,将PCR扩增产物连接pMD18-T载体,筛选阳性克隆后进行测序和序列比对.结果显示,15个阳性克隆中的13个为已知序列,其同源性为88%～100%,2个为未知序列,其结构和功能还需进一步研究.首次构建了APP7的抑制消减杂交文库,为APP感染和致病机制的研究奠定了基础.     

一株偶发分支杆菌基因组文库的构建

对一株致病性的非结核分支杆菌(NTM)即偶发分支杆菌(M.fortuitum)建立基因组文库,选用同尾酶Sau3 A I和BamH I分别酶切基因组DNA和载体pUC18,回收1 kb～7 kb大小范围的插入性DNA片段,与已经酶切去磷酸化的载体用T4连接酶连接,并转化入DH5а感受态细胞中,进行蓝白斑和氨苄抗性筛选,...     

家猪起源的研究进展

家猪作为重要的家养动物,它的起源、驯化、扩散是依赖于人类的活动与迁移而实现的。研究家猪的起源和驯化具有重要的意义。本文介绍了家猪和野猪的特点,以及家猪起源和驯化的考古学发现,并着重综述了家猪驯化的分子生物学证据的研究进展。     

浙江6个地方猪种的mtDNA控制区多态性分析

本研究对淳安花猪等6个浙江地方猪种的116条mtDNA序列进行了多态性分析,参照猪群为长白猪和皖南花猪。结果显示,浙江地方猪种581 bp mtDNA控制区序列中共存在14个变异位点,群体的核苷酸多样度Pi值为0.00403±0.00036;单倍型多样度Hd值为0.835±0.018。地方猪的单倍型从Hap_5至Hap_19共15种,而长白猪为Hap_1至Hap_4。淳安花猪和皖南花猪的单倍型频率均以Hap_8为主(0.680和0.833);嘉兴黑猪以Hap_5(0.625)为主;嵊县花猪和碧湖猪均以Hap_6为主(0.500和0.375);岔路黑猪以Hap_5、Hap_8居多(0.429和0.429);金华猪有11种单倍型,频率最高的是Hap_5(0.241)。NJ系统发生树中,浙江地方猪种大致可分为5支(编号A~E),其中,淳安花猪主要出现在E支,个体数占淳安花猪样本数的68.0%(17/25);C支全为金华猪,个体数占金华猪样本数的29.3%(17/58);D支金华猪个体数占金华猪样本数的24.1%(14/58)。本研究结果表明,浙江地方猪种的mtDNA多态性较为丰富,且与长白猪在基因序列上存在明显差别。地方猪种的单倍型组成和频率与其地理分布及品种的形成特点有密切关系。     

养猪场生物安全体系的建设

近年来中国养猪企业疫病频发,给养猪业带来很大的经济损失。为了减少养猪场猪的发病,保证猪场的正常生产秩序,猪场生物安全体系的建设尤为重要。笔者根据猪场的生产实际,总结出相应的实施方案,供广大养殖户参考使用。     

猪蛔虫雄虫cDNA文库的构建

采用Tripure Isolation Reagent抽提猪蛔虫雄虫成虫的总RNA,用poly(A)PuristTM纯化试剂盒分离mR-NA。分离mRNA后,用Clontech公司的CreatorTMSMARTTMcDNA文库构建试剂盒构建了猪蛔虫雄虫成虫的cDNA文库。结果获得了7.26×105独立克隆,重组率达96.7%,插入片段的平均长度约为1 kb。猪蛔虫雄虫cDNA文库的成功构建为利用文库筛选雄虫差异表达基因提供了材料来源,为研究猪蛔虫性别发育的分子机制奠定了基础。     

五指山猪背最长肌和半腱肌DNA甲基化检测分析

DNA甲基化作为真核生物基因组重要的表观遗传学修饰,对生物体基因的表达有重要的调控作用。为了研究五指山猪肌肉组织基因组DNA的甲基化程度,试验利用MSAP技术,使用筛选的10对引物扩增,检测五指山猪背最长肌和半腱肌的甲基化程度。结果显示:1月龄、2月龄、4月龄五指山猪背最长肌的平均甲基化率分别是44.78%、41.58%、38.92%;1月龄、2月龄、4月龄五指山猪半腱肌的平均甲基化率分别是41.70%、39.39%、38.81%。研究结果为五指山猪生长发育规律、系统选育及矮小机制等方面的研究提供表观遗传学依据。     

猪线粒体DNA研究应用进展

线粒体DNA是分子生物学研究中的重要分子标记之一,目前在进化遗传学、动物生产性能及医学等多个领域展开研究并取得相关成果。论文简要阐述了猪线粒体DNA的基本组成和特征、研究方法及研究进展概况,并对其研究前景进行了展望,期望对猪线粒体DNA的相关研究提供一定的理论依据和参考。     

《家畜环境卫生学》的课程建设

《家畜环境卫生学》作为一门必修课,是动物科学专业、动物医学专业的专业基础课。一门课程的课程建设目标就是将其建设成为精品课程,这就要求《家畜环境卫生学》在课程建设过程中应按精品课程的要求,紧紧围绕师资队伍、教学内容、教学方法与手段、教材、教学管理等方面进行完善,最终实现教学内容科学、教学方法与手段合理,教材先进,教学管理高效,师资队伍高素质的建设目标。     

家猪13/17罗伯逊易位染色体遗传规律的研究

本研究采用微量全血培养法对１３／１７ 染色体易位猪的５ 种交配组合所产３４２ 头后代的染色体组型进行了分析。结果表明,家猪１３／１７ 罗伯逊易位染色体的遗传符合孟德尔遗传规律,且具有稳定的遗传性。１３／１７ 易位纯合子互交后代仍然为１３／１７ 易位纯合子;１３／１７ 易位杂合子互交后代出现１３／１７ 易位纯合子（２ｎ ＝ ３６） ,１３／１７ 易位杂合子（２ｎ ＝ ３７） 和正常核型家猪（２ｎ ＝ ３８） 三种核型,经卡方检验符合１ ２ １ 的理论比值。本文还讨论了家猪和野猪的染色体进化,１３／１７ 罗伯逊易位染色体的应用。