猪瘟强毒单克隆抗体酶联免疫吸附试验对猪瘟血清抗体的检测

应用猪瘟强毒单克隆抗体酶联免疫吸附试验（ELISA）对青海省4个县的免疫猪场629份猪血样进行检测。结果，检出抗体阳性42份，平均阳性率为6.68%。提示经猪瘟疫苗免疫猪群感染了猪瘟强毒。     

三种猪瘟抗体检测技术的应用比较

应用猪瘟正向间接血凝法 (IHA)、斑点酶联免疫吸附试验 (Dot ELISA)以及猪瘟抗体免疫金标试纸条对规模化养猪场 1 38份不同阶段猪血清进行猪瘟免疫抗体水平的同步监测 ,检测结果 :IHA ,Dot ELISA ,金标试纸条测出经产母猪的猪瘟抗体阳性率分别为 83 3 %、80 0 %、80 0 % ,其平均值为 81 1 % ;三种方法测出后备母猪的猪瘟抗体阳性率分别为 53 3 %、53 3 %、50 0 % ,其平均值为 52 2 % ;三种方法测出 2 0日龄仔猪的猪瘟抗体阳性率分别为 69 2 %、76 9%、76 9% ,其平均值为 74 3 % ;测出 40日龄猪的猪瘟抗体阳性率分别为 76 9%、80 8%、80 8% ,其平均值为 79 5 % ;测出育肥猪的猪瘟抗体阳性率分别为 30 8%、30 8%、34 6 % ,其平均值为 32 1 %。经过统计学x2 检验 ,对于不同阶段猪三种方法两两之间检测结果均差异不显著 (P >0 0 5) ,表明上述三种方法均可用于猪瘟抗体的检测。     

猪瘟实验室诊断技术

猪瘟(HC)具有高度接触传染性，流行广泛，发病率、死亡率高，危害极大。国际兽疫局(OIC)将之列为A类16种法定传染病之一，我国亦将之列为一类动物传染病。20世纪60年代英国在扑灭HC的过程中就证明大部分HC病例属于温和型或隐性感染；我国在20世纪70年代后期也发现HC的流行形式发生了很大变化。病程由急性变为慢性过程，临床症状由典型     

2018年新疆部分地区规模化猪场猪瘟病毒抗体检测与分析

为了解2018年新疆部分地区猪瘟病毒抗体水平,笔者采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法对采自7家规模化猪场不同日龄猪的321份血清样品进行猪瘟抗体检测与分析。结果显示,猪瘟病毒抗体平均阳性率为84.11%(270/321),高于国家规定标准(70%),平均阻断率为66.60±24.44。各猪场间猪瘟病毒抗体水平差异极显著。各日龄段猪群抗体的阳性率在60%～100%之间,存在一定差异。保育猪阳性率最低(为60%),且低于国家规定标准(70%),其他各日龄段猪群抗体的阳性率均在80%以上。结果表明,在新疆地区7个规模化猪场中,有6个猪场的猪瘟病毒抗体阳性率能达到国家标准(70%),但离散度普遍较高,需要制定更加合理的免疫程序。     

猪瘟病毒单克隆抗体的制备及其免疫组织化学研究

通过杂交瘤技术制备猪瘟病毒单克隆抗体，对酶联免疫吸附试验筛选的阳性单克隆抗体进行免疫组织化学研究，从中发现1株单克隆抗体能与感染猪瘟病毒的猪肾、肝病理组织切片及PK15细胞产生特异性染色反应，与非感染猪的肾、肝组织切片和PK15细胞无染色反应。单克隆抗体与猪瘟病毒感染的PK15细胞或猪肝、肾小血管内皮细胞中的猪瘟病毒呈现较强的特异性棕色着染，表明该单抗是针对猪瘟病毒的单克隆抗体，对研究猪瘟病毒在宿主细胞中的生命活动和繁殖定位有非常重要的意义。该单抗命名为YNF，培养上清液和腹水的抗体效价分别为1：80和1：10000。抗体蛋白属IgG类，亚类为IgG2／κ。     

某猪场猪瘟强毒、弱毒抗体水平的检测

应用猪瘟单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验方法，对河南某猪场47份母猪血清进行猪瘟抗体检测，有5份血清呈猪瘟强毒抗体阳性，阳性率为10.6%，猪瘟弱毒抗体阳性率为95.7%，其群体保护率为93％。在9份仔猪血清中，猪瘟强毒抗体为阴性，猪瘟弱毒抗体阳性率为22％，只有17％的群体保护率。检测结果表明：该猪场可能有猪瘟强毒感染。     

渭南市部分猪场猪瘟血清抗体调查及分析

猪瘟一直被认为是危害猪产业发展的主要传染病之一。为了解渭南市猪场猪瘟免疫情况,制定合理的防控措施,采集周边养殖场猪血清样品363份,采用酶联免疫吸附试验进行猪瘟病毒抗体检测,结果显示猪瘟病毒抗体阳性率82.92%,其中规模化养殖场猪瘟免疫效果较好,抗体阳性率为97.69%,适度规模场和散养户抗体阳性率分别为80.61%和70.37%,均高于部颁标准。同时分类统计不同生长阶段的检测结果,母猪抗体阳性率为91.78%,高于保育猪和育肥猪。从检测结果来看,虽然猪瘟退出国家强制免疫病种,但养殖场户防控并未松懈,猪瘟总体免疫效果较好,这为进一步做好猪瘟科学防控提供参考。     

用单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验监测猪瘟抗体发现隐性猪瘟

用单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验监测瘟血清抗体。测得该场母猪４０份血清样品中，猪瘟弱毒抗体效价ＯＤ值较高，有１００％保护率，测得仔猛进４０份血清样品中，猪瘟弱毒抗体效价ＯＤ值适中，有８７．６％的保护率。     

非典型猪瘟和隐性猪瘟的诊断和防制

疑某猪场发生非典型猪瘟，采取病死猪的脾、淋巴结，用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法检测猪瘟抗原，结果阳性，诊断为猪瘟。同时用ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ法对猪群开展猪瘟抗体的检测，先后采集７５头份仔猪血样（２０～２８日龄），８５０头份生产母猪血样。检测结果表明，猪瘟抗体水平低于保护值（ＯＤ＜０．３）的仔猪１１头，占抽检仔猪的１４．６％，母猪１０头，占生产母猪的１．１７％。为此对以上低抗体的猪用猪瘟兔化苗再次进行加强免疫接种，经１５天后检测其血清抗体的ＯＤ值，结果仍然没有升高。通过本试验证实，猪瘟低抗体的猪，对免疫的应答能力很差，低抗体的母猪还可能成为猪瘟的隐性感染者，并能垂直传播到下一代，是非典型猪瘟的传染源。淘汰低抗体的母猪，是控制和消灭非典型猪瘟的有效措施。     

猪瘟流行毒E2基因部分编码序列的分析与比较

利用PCT-PCR方法获得16个猪瘟流行毒株、5株弱毒疫苗株和外来的4株猪瘟E2基因部分编码序列的扩增片断，并对其进行测序，获得659bp含E2基因N段A、B、C、D四区域的编码序列。利用DNAstar软件对其中616bp的片段进行序列分析，并与Genebank中的Alfort、Brescia、HCLV、Shimen等毒株进行比较．结果20株病毒所测序列均为猪瘟E2基因序列，所有毒株碱基替换随机分布于整个序列．部分毒株出现碱基缺失现象。序列分析结果表明近期流行的毒株不仅与50年代流行的Shimen株、现用的疫苗株距离较远，而且流行毒株呈不同亚群方向演变。本研究所测的20株流行株E2基因N端6个与C端的2个半胱氨酸(Cys)均未发生变异．但其他位点的核甘酸变异与缺失．引起各区的抗原表位呈现不同程度的变异。     

猪瘟病毒E2基因部分核苷酸序列的遗传进化关系的研究

本研究利用RT-PCR及测序获得了16株猪瘟病毒E2基因部分核苷酸序列。利用DNAStar软件对其6株已发表的猪瘟病毒毒株序列进行了比较和分析，构建了猪瘟病毒遗传发生树。结果可以看出所绘制的遗传发生树分为2个组群，每个组群分为3个亚组群。13株猪瘟流行毒在2个组群中均有分布，猪瘟石门系强毒和C株属于同一组群、同一亚组群。70～80年代分离的4株猪瘟病毒755和Alfort株（法国）在同一组群，25%和Brescia株（意大利）是同一组群，90年代分离的9株猪瘟病毒33.3%和Alfort株（法国）在同一组群，66.7%和Brescia株（意大利）是同一组群。13株猪瘟流行毒株中7株和C株在同一组群，其中70～80年代的1株，90年代的6株。其余的6株猪瘟流行毒株均在另一组群。不同地区及不同材料C-株疫苗的E2基因的核苷酸序列有一定的差异，GPE株与中国的C株有较近的遗传进化关系，而法国的Thiverval株则与中国C株的遗传进化关系较远。本研究的结果对了解我国猪瘟分子流行病学的特点具有重要的意义。     

RT-PCR技术诊断猪瘟的应用研究

应用反转录—聚合酶链反应(RT-PCR)对猪瘟进行诊断应用研究。应用RT-PCR况对来自广西不同地区的135份疑似猪瘟病料进行检测，以份诊断为阳性，阳性率62．2％。从百色、柳州地区等采集的健康猪扁桃体和淋巴结共276份，经RT-PCR检测，37份为阳性，阳性率为13．4％。其中健康猪扁桃体带毒较高，246份扁桃体中有35份阳性，占14．2％。采自柳州健康猪的26份淋巴结材料全为阴性，只有邕宁县的1份健猪淋巴结阳性。结果表明，RT-PCR技术可应用于猪瘟的临床诊断。     

达康灭毒灵对猪瘟病毒的杀灭试验

采用直接荧光法进行了达康灭毒灵对猪瘟病毒的杀灭效果试验.分别将有效氯浓度为100 mg/L和50 mg/L的达康灭毒灵消毒液与含有104 FA-TCID50猪瘟病毒Thiverval株病毒液的混合物于20 ℃水浴作用10 min和20 min,均可以完全将病毒杀灭.     

猪瘟病毒流行株与疫苗株主要抗原编码基因差异研究

从全国7个省市1200多份可疑猪瘟病料中分离出9个猪瘟病毒（HCV）野毒株，编号分别为HCV－01－09。将9株野毒分别通过PK15细胞分别通过PK15细胞传6代，测其毒价，并提纯做电镜观察，结果表明：毒价范围在10^2-10^7TCID50，电镜观察均可清晰地见到直径为25－70nm，略呈圆形的病毒颗粒，具有较完整的囊膜和纤突结构。从9株野毒中选取5株经猪瘟阴性猪各传3－4代，测其毒力、病原性、致死性，结果表明：各毒株在传代中其上述生物学特性上有变化和差别。用猪瘟兔化弱毒疫苗分别对这5株野毒做免疫保护相关性试验，结果证明：攻毒后的疫苗接种猪100％保护，而攻毒对照猪100％死亡，且对照猪在攻毒1周后便出现猪瘟野毒感染，而免疫猪在整个观察期均未见到野毒感染。用不同剂量的猪瘟兔化弱毒，表明猪瘟兔化弱毒不通过胎盘垂直感染仔猪。将猪瘟野毒株、石门系强毒株、兔化弱毒株及1982年分离的郑州野毒等毒株进行主要抗原编码基因差异研究，结果表明：猪瘟病毒可分2个基因组6个基因亚组，HCV－02、03、06、07等4个野毒株与国内的C株、石门强毒株、国外的C株、日本GPE株、ALD株、意大利Brescia株均属同一基困组，而HCV－08株及郑州株等2个野毒与法国的Alfor株同属另一个基因组。     

以重组mE2蛋白为抗原建立检测猪瘟病毒抗体间接ELISA方法的研究

以在Ｅ．ｃｏｌｉ高效表达的猪瘟病毒Ｅ２基因主要抗原编码区（ｍＥ２）为抗原,以辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记的兔抗猪ＩｇＧ为二抗,建立了检测猪瘟病毒抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法。经检测筛选出最佳反应条件为：１２μｇ／孔纯化的Ｅ．ｃｏｌｉ表达的ｍＥ２重组蛋白包被酶标板,用１０％的兔血清或马血清进行封闭,以正常Ｅ．ｃｏｌｉ裂解上清液稀释待检血清。试验表明应用重组ｍＥ２蛋白作为诊断ＨＣＶ抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点。     

RT-PCR检测健康猪扁桃体和流产死胎猪瘟病毒的应用及RFLP分析

本研究用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术对广西部分猪场的健康猪扁桃体材料以及流产胎儿和死胎中的猪瘟病毒(HCV)进行检测.70份健康猪扁桃体材料中阳性11份,阳性率达15.7%;52份流产胎儿及死胎材料中检出阳性9份,阳性率达17.3%.表明广西猪场中有比较严重的健康带毒情况.用限制性片段长度多态性分析法(RFLP)对25份阳性材料、HCLV和石门毒的引物A1/A2的PCR产物进行分析,发现HCLV、石门强毒和广西流行野毒的RT-PCR扩增产物中均有Rsa工的一个识别序列,但HCLV上的识别序列所在位置不同.本研究表明,用引物A1/A2作RT-PCR检测,并结合RFLP分析技术可把兔化弱毒和流行野毒区分开来,这将对预防猪瘟起到十分重要的作用.     

两种脾毒浓度对猪瘟活疫苗原料兔利用率的影响

将原料兔随机分成两组（A、B）,每组各4772只。 A组接种猪瘟活疫苗种毒,每毫升含0.05 g猪瘟兔化脾毒;B组接种的种毒,每毫升含0.02 g猪瘟兔化脾毒。每组分成30个批次,每个批次确定一个反应率。结果表明,A组30个批次的平均反应率（等同利用率）为90.49%,变动幅度为±7.0%;B组的平均反应率为67.71%,变动幅度为±16.24%,差异极显著。同时,A组的变异系数低于B组,表明A组利用率批间稳定性优于B组。     

RT-PCR技术检测猪瘟病毒的应用研究

本试验应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对猪瘟进行诊断应用研究.应用RT-PCR对来自广西不同地区的135份疑似猪瘟病料进行检测,84份诊断为阳性,阳性率62.2%.从百色、柳州地区等采集的健康猪扁桃体和淋巴结共276份,经RT-PCR检测,37份为阳性,阳性率为13.4%.其中健康猪扁桃体带毒较高,246份扁桃体中有35份阳性,占14.2%.采自柳州健康猪的26份淋巴结材料全为阴性,只有邕宁县的1份健猪淋巴结阳性.结果表明,RT-PCR技术可应用于猪瘟的临床诊断.