植物乳杆菌(LP HMX-3)对仿刺参生长、消化、免疫和肠道菌群的影响

为探究植物乳杆菌LP HMX-3对仿刺参生长性能、消化酶活性、免疫能力和肠道菌群的影响,选择初始体重为(4.22±0.05)g的仿刺参,随机分为对照组(C组)和LP HMX-3添加组即10⁵ CFU/g的LL组和10⁷ CFU/g的LM组,进行为期8周的养殖实验。结果显示,(1)LP HMX-3显著提高了仿刺参的终体重、增重率以及特定生长率,且LL组的生长指标更优;(2)LL组的肠道淀粉酶和LM组的肠道脂肪酶活性显著高于C组,说明LP HMX-3可能提高仿刺参的消化利用率;(3)LL组和LM组体腔液的碱性磷酸酶和过氧化氢酶活性以及LM组的酸性磷酸酶活性均显著高于C组,此外,LL组和LM组体腔细胞Aj-p105和Aj-catalase表达量以及LM组的Aj-C3表达量显著高于C组,说明LP HMX-3可增强仿刺参的免疫力;(4)由16S r DNA V4区测序可知,α多样性指数显示,LP HMX-3显著提高了仿刺参肠道微生物丰富度和均匀度,但LL组和LM组差异不大;β多样性分析显示,LL组和LM组的微生物种群结构相似,但明显不同于C组;(5)在...     

皇竹草粉对草鱼幼鱼生长、抗氧化反应和肠道健康的影响

为评估皇竹草(Pennisetum sinese Roxb)粉对草鱼(Ctenopharyngodon idellus)幼鱼生长、抗氧化和肠道健康的影响,配制3组分别含0% (对照组C)、10%和20%皇竹草粉(P1和P2)的等氮等能半精制饲料(蛋白质水平为36%,脂肪水平为9%),饲喂草鱼稚鱼[(28.51±0.04) g] 56 d。结果显示,相比C组,P1和P2组显著提高了草鱼幼鱼的增重率和成活率(P<0.05);P2组草鱼血清丙二醛(MDA)含量比C组草鱼显著降低(P<0.05);P1和P2组草鱼血清中谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)活性比C组草鱼显著降低(P<0.05);P1和P2组的草鱼血清中补体C3和C4的含量显著提高(P<0.05);同时,这2组肝脏的3-羟酰辅酶A脱氢酶(HOAD)和细胞色素C氧化酶(COX)的活性也显著高于C组(P<0.05);肠道显微结构显示,P1和P2组显著提高了草鱼幼鱼肠道的绒毛高度和皱褶深度,降低了肌层厚度(P<0.05);基因表达层面,相比C组,P1和P2组下调了肠道促炎细胞因子肿瘤坏死因子α (tnf-α)和白细胞介素1β (il-1β)的基因相对表达量。综上所述,饲料中添加一定量的皇竹草粉能增强草鱼幼鱼的生长,降低体内氧化应激和肠道炎症。     

不同碳水化合物和蛋白质水平膨化饲料对大规格草鱼生长、肠道消化酶及血清指标的影响

为探究不同碳水化合物和蛋白质水平膨化饲料对大规格草鱼生长、体成分、肠道消化酶和血清指标的影响,以初始体质量(398.6±5.9)g的大规格草鱼为研究对象,设置不同碳水化合物/蛋白质水平分别为C31P30、C34P28、C37P26、C40P24、C43P22、C46P20、C49P18的7组膨化饲料,养殖周期为16周。实验结果显示,各饲料组草鱼成活率(SR)差异不显著,随着蛋白质水平的下降、碳水化合物水平的升高,增重率(WGR)呈下降趋势,蛋白质效率(PER)呈升高趋势;肝体比(HSI)、脏体比(VSI)、肠体比(ISI)、肌肉和肝脏粗脂肪(CF)含量均有随饲料碳水化合物水平升高而升高的趋势。随着饲料中碳水化合物水平升高、蛋白质水平下降,各组间草鱼肌肉粗蛋白质(CP)含量无显著差异;肝糖原、肌糖原含量呈升高趋势,饲料中碳水化合物水平分别高于46%和40%时,肝糖原、肌糖原含量显著升高。肠道胰蛋白酶(PRS)和淀粉酶(AMS)活性随饲料中碳水化合物水平的升高呈先下降后升高趋势,脂肪酶(LPS)活性呈升高趋势;血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)含量及谷草转氨酶与丙转氨酶(GOT/GPT)比值都随饲料中碳水化合物水平升高和蛋白质水平下降而呈升高的趋势。本实验结果显示:当饲料碳水化合物水平高于37%、蛋白质水平低于26%时,将显著影响草鱼的生长,饲料中高碳水化合物水平将导致鱼体肝体比、脏体比、肠体比以及肌肉和肝脏脂肪含量升高。     

枯草芽孢杆菌对草鱼生长性能、肠道消化酶及抗氧化酶活性的影响

为研究饲料中添加枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis WTC019)对草鱼生长性能、消化酶活性和抗氧化功能的影响,选取平均体重为(146.23±14.56)g的健康草鱼,对照组(A组)只投喂基础饲料,试验组(B、C、D组)分别投喂含106、107、108CFU/g B.subtilis WTC019的基础饲料,试验60 d。结果显示:试验组草鱼的增重率和特定生长率均显著高于对照组,草鱼肠道中的淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶的活性均显著高于对照组,其中D组的草鱼肠道淀粉酶和脂肪酶活性最高,C组的草鱼胰蛋白酶活性最高。添加组过氧化氢酶、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽含量均显著高于对照组,谷胱甘肽过氧化物酶的活性变化不显著。由此得出,B.subtilis WTC019可提高草鱼的消化酶的活力和抗氧化功能,进而可促进草鱼生长。     

植物乳杆菌发酵对牡蛎成分的影响

试验结果表明,加入4%食盐能在一定程度上抑制挥发性盐基氮(TVBN)的产生,接种植物乳杆菌后牡蛎浆pH在发酵第2 d迅速下降并一直处于酸性状态(pH≈4)。蛋白质由于牡蛎自溶酶作用、微生物的利用而不断被分解,氨基酸不断地增加,而可溶性蛋白表现出波动变化。还原糖逐渐被消耗,至第10 d时所剩仅为0.07 mg/ml。表明植物乳杆菌对牡蛎的发酵过程有重要作用。为牡蛎的深加工利用提供科学依据。     

黑水虻油替代豆油对草鱼生长性能、抗氧化能力和肠道菌群的影响

为研究黑水虻油替代豆油在草鱼生产实践中的效果,本实验以黑水虻油替代草鱼基础饲料中0（SO）、25%（BSO25）、50%（BSO50）、75%（BSO75）和100%（BSO100）的豆油并配制成5种等氮等脂的饲料,饲喂草鱼[初始体质量（13.37±1.07 g）]56 d后检测生长性能、体成分、血清生化指标、抗氧化能力、肠道和肝脏组织结构及肠道菌群组成等变化。结果显示,各组之间草鱼增重率（WGR）、特定生长率（SGR）、饲料系数（FCR）、肥满度（CF）、脏体比（VSI）和肝体比（HSI）变化均不显著。与SO组相比,BSO25和BSO50组血清超氧化物歧化酶（SOD）活性显著增加,SM75和SM100组的丙二醛（MDA）含量均显著降低,BSO50、BSO75和BSO100组的过氧化氢酶（CAT）活性均显著上升。BSO100组肝细胞呈现为不规则形状,血清中谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）及低密度脂蛋白（LDL-C）的水平均显著高于SO组。BSO100组群落多样性指数Sobs、Shannon和丰富度指数Chao、Ace均显著高于SO组。研究表明,在本实验条件下,黑水虻油替代饲料中100%的豆油虽然不会影响草鱼的生长,能提高草鱼抗氧化能力及肠道菌群的丰度和多样性,但在BSO100组中,草鱼肝脏受损,长期饲喂会对机体产生不利影响,因此在草鱼饲料中黑水虻油不应全部替代豆油,建议替代比例不超过75%。     

呋喃唑酮对草鱼肠道菌群的影响

研究了水体泼洒呋喃唑酮使其浓度为０５ｍｇ／Ｌ后,草鱼肠道内好氧及兼性厌氧细菌的数量及组成变化。用药后,草鱼肠道细菌数量在２４ｈ降至最低,４８ｈ或７２ｈ后恢复至用药前的水平。用药后草鱼肠道优势菌群发生了较为明显的变化,出现了比较大的弧菌,而假单胞菌属和产碱菌属则未能检测到。     

芽孢杆菌对草鱼生长和肠粘膜抗氧化功能及养殖水质的影响

本试验研究了饲料中添加芽孢杆菌对草鱼生长、肠粘膜抗氧化功能及养殖水体水质的影响。选取平均体重为（51.0±2.3）g的健康草鱼300尾,随机分成3组（对照组、处理组1和处理组2）,每组3个重复,每个重复50尾鱼。其中对照组饲喂基础日粮,处理组1和2分别饲喂含复合芽孢杆菌（105 cfu/克饲料,枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌以1:1比例混合）和枯草芽孢杆菌（105 cfu/克饲料）的基础日粮。试验期为45d。结果表明,饲料中添加芽孢杆菌对养殖水体pH和硝酸盐氮含量无显著影响,但显著降低了从第21d到试验结束期间水体中亚硝酸盐氮的含量（处理组1第35d除外）。芽孢杆菌的添加同时显著降低草鱼的死亡率（P<0.05）,并提高了草鱼的增重率和特定生长率。与对照组相比,处理组1和2草鱼的增重率分别提高了52.93%（P<0.01）和21.78%（P<0.05）,特定生长率分别提高了44.44%（P<0.01）和16.67%（P<0.05）;而且处理组1草鱼增重率和特定生长率分别比处理组2提高了25.58%（P<0.01）和23.81%（P<0.01）。肠粘膜抗氧化活性研究表明,与对照组相比,饲料中添加芽孢杆菌能提高草鱼肠粘膜超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）的活性。以上结果提示,饲料中添加芽孢杆菌可以改善养殖水质和草鱼肠粘膜抗氧化功能,并显著促进草鱼生长并降低死亡率。     

瑞士乳杆菌对泥鳅肠道转录组基因表达的影响

为探究饲料添加瑞士乳杆菌HML037对泥鳅生长和抗病性基因表达的影响,分别对对照组和添加组的泥鳅肠道组织进行双端测序,获得40877个平均长度为1218 bp、N50为1942 bp的unigenes,序列比对分析后均得到注释.通过DEGseq进行基因表达差异分析,获得差异基因604个,其中326个基因显著上调,278...     

微生态制剂对草鱼生产性能和肠道菌群的影响

在水温25～30℃下,将体质量为(110.23±0.43) g的草鱼饲养在3.0 m×2.0 m×1.2 m的加盖网箱中,分别投喂添加0%(对照组)、0.5%和2%的由芽孢杆菌、乳酸菌以及酵母菌复配且以麸皮为载体制成的微生态制剂(8.0×10⁹ cfu/g)的膨化饲料饲养60 d,探究微生态制剂对草鱼生产性能和肠结构、菌群及酶活性的影响。试验结果显示,饲料中添加2%微生态制剂显著提高草鱼质量增加率、特定生长率(P<0.05),显著降低饲料系数、脏体比(P<0.05);饲料中添加2%微生态制显著提高肠伸展率、中肠肌层厚度和绒毛高度(P<0.05),提高中肠淀粉酶和脂肪酶活性(P<0.05)。饲料中添加微生态制剂增加草鱼肠道菌群α多样性、丰富度;改变草鱼肠道微生物组成,门水平上,对照组的草鱼肠道微生物中梭杆菌门和厚壁菌门含量最高(63.56%、32.52%)。0.5%添加组的草鱼肠道微生物中梭杆菌门和厚壁菌门含量最高(61.82%、20.27%)。2%添加组的草鱼肠道微生物中厚壁菌门含量最高(64.20%)。属水平上,2%添加组草鱼肠道优势菌属...     

饲料中添加丁酸钠对草鱼生长、消化酶活性、血清生化指标和肠道组织学的影响

为了探究饲料中补充不同水平丁酸钠对草鱼生长性能、肠道消化酶活性、血清生化指标和肠道组织形态的影响,分别添加0 mg/kg (SB0)、1 000 mg/kg (SB1)、2 000 mg/kg(SB2)和3 000 mg/kg (SB3)的微囊丁酸钠(含50%丁酸钠)至基础饲料中,设计4组等氮等脂的实验饲料。选取300尾体质健康的草鱼(10.0±0.1) g,分成4组,每组3个重复,每个重复25尾鱼,放置在水泥池中养殖8周。结果显示,各组草鱼增重率为273.7%～279.9%,饲料系数为1.55～1.60,饲料中补充丁酸钠对草鱼生长性能和体成分无显著影响。与对照组相比,添加不同水平的丁酸钠均显著提高了肠道蛋白酶活性和血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,降低了血清谷草转氨酶(AST)活性,SB1组血清碱性磷酸酶(AKP)活性显著升高,而SB2和SB3组血清谷丙转氨酶(ALT)活性显著降低。各组肠道淀粉酶活性、血清酸性磷酸酶(ACP)、甘油三酯(TG)、葡萄糖(GLU)、总蛋白(TP)和D-乳酸(D-LA)无显著差异。在肠道组织学方面,各丁酸钠补充组肠道绒毛高度和SB1、SB2组肌层厚度显著...     

抗菌素对草鱼肠道免疫和菌群的影响

为探究抗菌素对草鱼免疫和肠道菌群的影响,本实验以草鱼为研究对象,设置基础饲料(对照组)、基础饲料添加恩诺沙星或氟苯尼考3组饲料,投喂草鱼2周后,通过肠道酶活检测、荧光定量PCR (qRT-PCR)和高通量测序技术分析饲料中添加抗菌素对草鱼肠道免疫及肠道菌群多样性影响。分析结果显示,(1)饲料中添加恩诺沙星和氟苯尼考降低了草鱼肠道谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量,提高丙二醛(MDA)的含量,导致草鱼肠道氧化应激。(2)氟苯尼考组中的TNF-α、IL-1β、IL-12、NF-κB-P65、MHCⅡ、s IgM等免疫因子和ZO-1、ZO-2、occludin、CLDN-1、JAM3等黏膜相关蛋白的mRNA表达量显著下降,恩诺沙星组的免疫因子TNF-α、IL-1β、IL-12、TLR4、MHCⅡ和黏膜相关基因ZO-2、occludin、CLDN-1、JAM3的mRNA表达量显著下降。(3)通过16S rRNA高通量测序来揭示拌食投喂抗菌素对草鱼肠道微生物群落结构的影响,分析结果显示,饲料中添加恩诺沙星或氟苯尼考对草鱼肠道α多样性无显著差异,但对...     

拉曼光谱检测脆肉草鱼肌肉脆度

脆度是脆肉草鱼品质重要检测指标之一,过度脆化的脆肉草鱼会出现溶血、缺氧和一些器官的病变。为研发出一种检测脆肉草鱼脆度的方法,实验提出一种基于拉曼光谱技术检测脆肉草鱼脆度的方法。首先,通过对不同脆化时间的脆肉草鱼拉曼光谱进行PCA分析,结果显示,拉曼光谱能够应用于不同脆化时间脆肉草鱼脆度鉴别。肌肉总蛋白质结构中的α-螺旋随着脆化时间增加而减少,β-折叠随着脆化时间增加而增加,无规则卷曲在脆化初期变化较大,脆化后期变化不明显。其次,采用SG、SNV、MSC和Normalize这4种方法预处理拉曼光谱数据,发现Normalize的预处理效果最好,预测集RMSEP为2.33,R²P为0.73。再次,采用PLSR、SVR和BPNN方法建立脆肉草鱼脆度与拉曼光谱信息关系模型,预测集RMSEP分别为2.33、2.26和1.96,R²P分别为0.73、0.78和0.83,其中BPNN预测模型效果最好。研究表明,采用拉曼光谱技术和Normalize-BPNN建立的预测模型可以检测脆肉草鱼脆度。本研究将为脆肉草鱼脆度检测提供新的思路。     

Dietary supplementation of sodium butyrate may benefit growth performance and intestinal function in juvenile grass carp (Ctenopharyngodon idellus)

A 49‐days feeding trial was conducted to study the effects of sodium butyrate on growth performance, gut morphology of juvenile grass carp. Five isoenergetic and isonitrogenous experimental diets were compounded by the supplementation in the basal diet with gradient sodium butyrate at 0, 500, 1000, 2000, 3000 mg kg^?1 respectively. A total of 375 juvenile grass carp (with initial body weight of 3.8 g) were randomly allocated into five diet treatments, and each treatment has three replicates. The results showed that the specific growth rate (SGR) of SB1000 and SB2000 group was significantly higher (P < 0.05) than that of the other groups. Moreover, the lowest SGR was observed in SB3000 group. Feeding rate and the whole‐body proximate composition including moisture, crude lipid, crude protein and crude ash were not affected by sodium butyrate (P > 0.05). Total superoxide dismutase activities in hepatopancreas in the experimental groups were significantly higher than those in the control group (P < 0.05). Glutathione peroxidase activity in hepatopancreas was significantly upregulated by dietary sodium butyrate level (P < 0.05). However, the activity of total antioxidant capacity and the contents of malondialdehyde were not significantly different among groups. The expression levels of mRNA encoding PepT1 and LAT2 in the foregut both showed a first increasing and then decreasing tendency as dietary sodium butyrate level increased (P < 0.05), and peaked in SB1000 and SB2000 groups respectively. The results indicated that appropriate dietary supplementation of sodium butyrate at 2000 mg kg^?1 could improve the growth, antioxidant ability and intestinal absorption capacity of the juvenile grass carp.     

草鱼IgM的表达及B淋巴细胞的抗菌活性

为了更加了解草鱼B淋巴细胞吞噬活性,本研究采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)检测了IgM在胚胎发育中的表达量,并且检测了IgM在不同组织中的分布以及细菌刺激下IgM的转录情况。结果显示,IgM在卵裂期到出膜前期的表达量变化不明显,在出膜后开始显著增加;IgM在检测的组织中均有分布,在头肾中表达量最高,并且其表达量在不同细菌的刺激下均显著上调。从草鱼外周血中分离纯化得到B淋巴细胞,并通过吉姆萨染色、qRT-PCR和间接免疫荧光进行了验证。细菌吞噬实验结果显示,B淋巴细胞对嗜水气单胞菌具有一定的吞噬能力,并随孵育时间增加而逐渐增强。细菌刺激B淋巴细胞后活性氧(reactive oxygen species, ROS)和一氧化氮(nitric oxide,NO)释放量显著上升;血清调理实验结果显示,通过血清调理可以显著促进B淋巴细胞ROS的释放,然而对NO的释放水平没有显著影响。研究表明,草鱼B淋巴细胞对细菌具有一定的吞噬能力,并且可以通过呼吸爆发等非特异性免疫的方式直接参与抗菌免疫。     

Effects of dietary glutamine supplementation on growth performance,antioxidant status and intestinal function in juvenile grass carp (Ctenopharyngodon idella)

Glutamine (Gln) is a conditionally essential free amino acid that has been widely used in aquaculture. The present study showed that appropriate levels of dietary Gln could significantly improve growth performance and increase lipase and trypsin activity, mucosal thickness (MT) and the number of lymphocytes. The levels of glycine (Gly) in the 6 g/kg Gln group, threonine (Thr) in the 12 g/kg group and lysine (Lys) in the 6 and 9 g/kg group were increased significantly, while glutamate (Glu) and serine (Ser) concentrations decreased significantly with increasing dietary Gln levels from 3 to 12 g/kg. Moreover, the 12 g/kg dietary Gln level could improve the concentration of malondialdehyde (MDA), glutathione (GSH), glutathione peroxidase (GSH‐PX) and the total antioxidant capacity (T‐AOC). In addition, 3 g/kg Gln upregulated the gene expression of aminopeptidase N (APN), caudal‐related homeobox gene (CDX2), L‐type amino acid transporter 2 (LAT2), oligopeptide transporter 1 (PEPT1), specificity proteins 1 (SP1) and 3 (SP3), and peroxisome proliferator‐activated receptor α (PPAR‐α) but downregulated PPAR‐γ gene expression compared to that in the control group. Taken together, these findings suggest that Gln could improve the growth performance, antioxidant status and intestinal function of grass carp.     

草鱼呼肠孤病毒纤维蛋白VP56与草鱼GRP78蛋白互作诱导内质网应激

为了阐明草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的感染机制,深入探究VP56 (Ⅱ型和Ⅲ型GCRV特有的纤维蛋白)与宿主细胞蛋白的相互作用。实验通过免疫共沉淀(co-IP)发现,VP56与细胞内定位于内质网的分子伴侣蛋白葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)发生相互作用。而后,VP56与GRP78的互作通过基于远红外红色荧光蛋白mNeptune的双分子荧光互补系统(BiFC)得到验证。在VP56稳定表达的草鱼肾细胞系(CIK)中,相较于CIK细胞,内质网则形态发生巨大变化,产生肿胀、扩张、脱粒等现象,说明VP56激活内质网应激。通过对内质网应激下游转录因子的mRNA水平检测,发现VP56激活活化转录因子6 (ATF6)介导的信号转导途径,激活非折叠蛋白反应。研究表明,GCRV-Ⅱ感染过程中破坏了细胞稳态、激活内质网应激。本研究为GCRV感染机制和抗GCRV病毒研究提供了新思路,揭示了一种新的病毒逃逸机制,有助于淡水养殖产业中草鱼出血病的防控。     

草鱼mst2在免疫应答中的作用机制

为了初步阐明草鱼哺乳动物STE20样蛋白激酶2基因(mammalian sterile 20-like kinase 2, mst2)在机体免疫中的作用机制,实验采用RNA-Seq技术对干扰mst2后经脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)应激的草鱼肾细胞系(Ctenopharyngodon idella kidney cell lines,CIK)进行了转录组测序与验证分析。测序原始数据经De novo拼接与组装后共获得22 374个独立功能基因(unigenes),其中已知功能基因为21 199个,预测的新基因为1 175个。干扰mst2后经LPS应激的unigenes表达差异分析表明,对照组与实验组之间共存在38个差异基因(differentially expressed genes,DEGs),其中上调基因16个,下调基因22个。利用实时荧光定量PCR技术(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)对38个DEGs的RNASeq结果进行验证,结果显示,qRT-PCR和RNA-Seq分析一致,说明RNA-Seq分析结果可靠。采用RNA干扰技术干扰mst2后经LPS处理,CIK细胞转录组中DEGs参与免疫代谢的途径主要有MAPK信号通路、内吞作用途径、自噬途径和细胞因子受体相互作用途径。凋亡相关基因检测结果显示,干扰mst2并经LPS处理后,促凋亡基因(fas、bad1、bad2、caspase-3、caspase-8和caspase-9)转录水平上调,抗凋亡基因(bcl2)转录水平下调,证明干扰mst2后经LPS处理会诱发细胞发生凋亡。综上所述,mst2可通过调控凋亡相关过程参与机体免疫反应。本研究结果初步阐明了草鱼mst2参与机体免疫应答的分子机理,可为草鱼细菌性疾病防控提供一定的基础理论参考。