大肠杆菌K88、K99、987P纤毛抗原提纯及抗血清制备

采用加热法和盐析法对大肠杆菌K88、K99、987P纤毛抗原进行了提取、纯化,并通过SDS—PAGE凝胶电泳对提纯效果进行了检验。将纯化的纤毛抗原免疫家兔,制备了K88、K99、987P纤毛抗原抗血清,用琼脂扩散试验检测了抗血清的效价。结果表明,纯化的K88、K99、987P纤毛为高纯度的纤毛抗原,其分子量分别约为26、18、20kD。K88、K99、987P抗血清的琼扩效价依次为1：32、1：32、1：128,且特异性高。本研究为K88、K99、987P纤毛抗原定量检测及产纤毛大肠杆菌菌株的鉴定奠定了基础。     

大肠杆菌K88纤毛抗原的提纯和抗血清的制备

以5％绵羊血改良Minca琼脂筛选和克隆表达良好的K88^＋菌株，改良Minca琼脂培养获得K88菌液。用加热法及高速匀浆法使K88纤毛从菌体上脱下。饱和硫酸铵沉淀粗提，用Sepharose CL-4B凝胶过滤纯化K88抗原。提纯的抗原经SDS—PAGE电泳测定其分子量约为25000，且仅此一条蛋白带；与K88抗血清进行琼脂扩散试验只出现一条沉淀线。用提纯的抗原经多次免疫家兔制备了K88抗血清。抗血清在玻板凝集试验中只凝集K88菌株，不凝集K99，987P或F41菌株；在琼扩试验中，只与K88粗提抗原出现一条沉淀线，且效价为1：64，而不与K99，987P抗原出现沉淀线；在免疫电泳试验中，与无细胞K88纤毛液只出现一条沉淀线。鉴定结果表明，所制备的K88血清特异性强、效价高，可作为单因子血清用于凝集试验、琼扩试验等血清学试验，对K88菌株进行鉴定，对K88纤毛抗原进行定性和定量检测。     

产肠毒素大肠杆菌987P抗原的纯化

猪产肠毒素大肠杆菌987P阳性菌株,在胰酶大豆肉汤培养基中于37℃生长18—20小时,离心收集细菌。通过高速搅拌使987P纤毛从菌体上脱落。用差速离心除去菌体和大的细胞碎片后,以硫酸铵盐析法初步纯化上清液中的987P纤毛。再经制备电泳进一步分离纯化即可得纯化的987P抗原。纯化的987P抗原在电镜下是均质的,强烈地聚集成束。显示出刚硬、中空的纤毛结构。在10%的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈现出单一的蛋白带,测出其蛋白质亚单位的分子量为20128。以初步纯化的抗原高免兔子制得高效价的抗血清。     

桑萎缩病病原类菌原体的提纯、致病性及抗血清制备研究

用0．3mol／L甘氨酸缓冲液从病桑嫩叶提取病原类菌原体（MLO）,提取液上清经硅藻土柱层析分离,其洗脱液用高速离心浓缩,制备成部分纯化的病原MLO提纯物。采用显微注射技术,将提纯病原注射到介体昆虫体内,使病原在昆虫体内繁殖,再将获毒虫放饲在健桑苗上传毒接种,获得表现典型萎缩病症状的病株。病柔韧皮部筛管细胞的超薄切片在电镜下观察到大量病原MLO粒子,证实提纯MLO具致病性。同时用提纯病原为免疫抗原制备兔抗血清,抗血清用健桑提取液吸收后,获得仅与病桑抗原产生反应的特异抗血清,免疫电泳测验、仅产生一条沉淀带。     

肠毒性大肠杆菌菌毛抗原987P和F41的提纯及部分特性分析

肠毒性大肠杆菌(ETEC)C83917(987P~+)、C83919(F41~+)分别在 TSB 和 Minimal 液体培养基中培养,菌体表面能产生丰富的菌毛.用加热搅拌法使菌毛从菌表面脱落,通过酸沉淀和 MgCl_2反复沉淀提纯菌毛,经负染后用电镜观察。987P 菌毛较粗大。F41菌毛较纤细,两种菌毛都保持完整,呈长丝状,纵横交错或束状排列.用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,987P 菌毛的分子量为20000,F41菌毛的分子量为28000。用提纯的987P 和 F41菌毛分别免疫家兔,得到高效价的抗血清,经琼扩试验检测,抗血清滴度最高可达1:128～1:256.琼扩试验证明,987P 与 F41之间无交叉免疫反应.     

应用ELISA双抗体夹心法诊断鸭冠状病毒性肠炎的研究

将电镜检查鸭冠状病毒阳性的病鸭肠管及粪便,经PEG沉淀及蔗糖线性梯度超速离心提纯抗原。用其免疫豚鼠制备抗血清,经饱和硫酸铵粗提,再经QAE-ScphadcxA50离子柱纯化提取IgG。纯化IgG与辣根过氧化物酶(HRP)用过碘酸钠法进行标记,制备酶标抗体,建立ELISA了双抗体夹心法,以诊断鸭冠状病毒性肠炎抗原,对发病鸭及回归试验、人工感染试验中收集的55份粪便样品,用本试验检测,并用电镜检查作为对照,证明该法具有特异、敏感、快速、简便之优点,解决了仅靠电镜检查的局限性。     

兔抗鸡IgG-HRP酶标抗体的制备与检测

将经多种方法提纯的鸡IgG与从美国Sigma公司购买的纯鸡IgG产品进行对比研究证实 ,用辛酸沉淀 50 %SAS 离子交换层析方法可获得纯度很好的鸡IgG产物。运用该产物成功制备了兔抗鸡IgG抗血清以及抗鸡IgG重链抗血清。用辛酸沉淀 50 %SAS 35 %SAS盐析提纯的兔抗鸡IgG与用NaIO4 作用 1 6～ 2 0min的已氧化辣根过氧化物酶 (HRP)结合 6h,获得了优质可靠的兔抗鸡IgG HRP酶标抗体     

ELISA双抗体夹心法诊断犬冠状病毒肠炎

将电镜检查犬冠状病毒阳性的病犬粪便，经ＰＥＧ沉淀、蔗糖线性梯度超速离心，用提纯的抗原免疫豚鼠制备抗血清，经饱和硫酸铵粗提、ＱＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ａ５０层析柱纯化提取ＩｇＧ。将提纯的ＩｇＧ与辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记，建立了诊断犬冠状病毒的ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法。对收集的４５份粪便样品进行检测，并以电镜检查作为旁证，证明该法具有特异、敏感的特点，可在４小时内报告结果。     

牛生长激素抗独特型抗体促生长作用机理研究--兔抗牛生长激素抗体纯化与鉴定

选用８只新西兰白兔来制备牛生长激素抗独特型抗血清，初次免疫以完全弗氏佐剂乳化抗原，加强免疫用不完全弗氏佐剂乳化，最后一次加强注射后１０天采血，采用酶联免疫吸附试验来测定抗血清滴度和血清阻断率：３只兔血清抗体滴度分别为１１２８０００，１５１２０００和１１２８０００，而血清阻断率在血清稀释率为１２０００到１２５６０００时处于２７．７％到９２．９％范围。随后用硫酸铵沉淀结合ＤＥＡＥ纤维素层析对血清抗体进行了纯化，醋酸纤维素薄膜电泳试验结果表明ＩｇＧ成分获得了纯化。     

用ELISA改良双夹心法检测大肠杆菌3P抗原

用参考菌株建立了大肠杆菌K88、K99和987P三种纤毛(3P)抗原的ELISA改良双夹心检测法。通过对分离菌株、仔猪粪便样品中三种抗原的检测,对已知阳、阴性菌株和部分腹泻病原、正常肠道菌的试验以及对抗原的定量测定,证明本方法具有较高的特异性和敏感性。     

鸭疫里默氏菌一个可能新型的鉴定

用玻片凝集试验、试管凝集试验和琼脂扩散沉淀试验，对13个鸭疫里默氏菌分离株进行了血清型鉴定。玻片凝集试验中，这些菌株只与8型抗血清发生强凝集反应，试管凝集试验中，其代表菌株C882与8型参考菌株之间仅存在单向低度交叉凝集反应，且与1～19型中的其他18个血清型参考菌株无可见的交叉凝集反应；用C882吸收可消除8型抗血清与C882等菌株之间的交叉凝集反应，但不影响8型抗血清的同源凝集反应和沉淀反应能力。琼扩试验中，C882与1～19型参考菌株之间不产生可见的交叉沉淀反应。沉淀反应模式表明，以C882为代表的13株细菌的热稳定抗原具有同一性。结果表明，13株待检菌株可能属于一个新的血清型。     

鸡产蛋下降综合症病毒快速纯化及其多抗血清制备

为研制鸡产蛋下降综合症病毒(EDS-76)检测用标准抗原及标准多抗血清,以EDS-76国际通用毒株AV-127株为抗原,进行了EDS-76病毒抗原纯化及多抗血清制备。研究表明,经氯仿抽提,并经PEG浓缩处理病毒的尿囊液可获得良好的纯化效果,纯化病毒背景干净,血凝效价达19Log2。以此研制出的鸡抗EDS-76多抗血清血凝抑制效价达13Log2,间接免疫荧光效价达1∶2000,Western-blot试验分析表明该多抗血清可以识别两个分子大小在50 kD至85 kD之间的蛋白抗原,HI及IFA试验发现所制备的特异性,多抗血清与12种常见禽病病原(NDV、AIV-A、ALV-J、ALV、GPV、REV、MDV、IBV、CAV、IBDV、TMUV、REOV)均不反应。本研究建立的快速简便的EDS-76病毒纯化方法以及获得的抗EDS-76多抗血清,为进一步研制EDS-76标准抗原以及标准多抗血清提供了有效的方法与材料。     

鸡产蛋下降综合症病毒快速纯化及其抗血清制备

为研制鸡产蛋下降综合症病毒（ EDS-76）检测用标准抗原及标准多抗血清,以EDS-76国际通用毒株AV-127株为抗原,进行了EDS-76病毒抗原纯化及多抗血清制备。研究表明,经氯仿抽提,并经PEG浓缩处理病毒的尿囊液可获得良好的纯化效果,纯化病毒背景干净,血凝效价达19Log2。以此研制出的鸡抗 EDS-76多抗血清血凝抑制效价达13Log2,间接免疫荧光效价达1∶2000,Western-blot试验分析表明该多抗血清可以识别两个分子大小在50 kD至85 kD之间的蛋白抗原,HI及IFA 试验发现所制备的特异性,多抗血清与12种常见禽病病原（ NDV、AIV-A、ALV-J、ALV、GPV、REV、MDV、IBV、CAV、IBDV、TMUV、REOV）均不反应。本研究建立的快速简便的EDS-76病毒纯化方法以及获得的抗EDS-76多抗血清,为进一步研制EDS-76标准抗原以及标准多抗血清提供了有效的方法与材料。     

家蚕微粒子的荧光抗体检验技术获初步成效

1980年华南农学院蚕桑系对家蚕微粒子胞子用荧光抗体技术检验获得初步成效。分别用提纯的家蚕微粒子胞子、微粒子胞子匀浆及感染微粒子病的母蛾血液作抗原,注射于家兔以制备抗血清。在琼脂糖凝胶对流电泳时与感染微粒子病的蚕血、蛹血及蛾血均能形成沉淀带。说明兔抗微粒子胞子的血清对染病的血液可能具有共同抗原性。将兔抗血清经盐析、透析后再与荧光染料 FITC 结合,通过萄聚糖 G—50凝胶过滤     

弓形虫循环抗原诊断试剂的研制

浙江省医学科学院寄生虫病研究所傅翠娥等,对弓形虫循环抗原诊断试剂进行了研究。首先制备弓形虫的细胞质抗原(C)、代谢抗原(S)。然后用抗原C、C S、S及活虫各免疫2只家兔,收集抗血清经纯化而获得IGg抗体(多抗)并制备酶标记抗体;用上述4种多抗与多抗-HRP组合成16种双抗体     

鸭疫里默氏菌6型、12型与16型之间的交叉反应

鸭疫里默氏菌6型和12型仅在玻片凝集试验中存在较弱的交叉反应，这一交叉反应可经血清吸收试验得到消除；12型和16型在玻片凝集试验和试管凝集试验中均表现较强的双向交叉反应，但在琼扩试验中表现为较弱的单向交叉反应；6型和16型之间没有交叉反应。12型和16型之间的交叉反应和交叉沉淀反应均可经血清吸收后得以消除，但经过16型参考菌株吸收过的12型抗血清，还与6型菌株存在交叉凝集反应，只有同时用6型和16型菌株吸收，12型抗血清才具有血清型特异性。血清吸收对6型和12型抗血清的同型凝集反应能力和沉淀反应能力没有影响，但对16型抗血清的同源凝集能力和沉淀反应能力均有较大的影响，经、2型参考菌株吸收后，16型抗血清与同型抗原之间的凝集效价下降2个滴度，而且不再形成清晰的沉淀线。结果表明，6型和12型之间、12型和16型之间均存在ab-bc的抗原关系。     

猫血清IgG的纯化及酶标兔抗猫二抗的制备

采用辛酸-硫酸铵法和Sephadex G-150分子筛层析法纯化猫血清IgG,SDS-PAGE电泳检测;用纯化的IgG免疫新西兰兔,制备兔抗猫IgG抗血清,并用上述方法提纯兔抗猫IgG,改良过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶,即获得兔抗猫IgG的酶标抗体。     

牛肌红蛋白的纯化及其抗血清检测

纯化了牛的肌红蛋白(Mb)并制备了特异性抗血清。Mb是由牛的骨骼肌通过硫酸铵分级分离,经两次结晶而纯化,从而获得相当纯的牛正铁肌红蛋白结晶。用纯化的Mb所制备的抗牛Mb血清可用于检测患营养性肌病的小牛血清和尿液中的Mb。     

制备R-PHA致敏羊红细胞的经验

反向间接血凝法(R-PHA)以其灵敏度高、特异性强、方法简易而广泛应用于各类疾病的诊断。我们从1972年起即自制 R-PHA 致敏红细胞,并用来检测百万人次甲胎蛋白,乙型肝炎抗原等。本文就数年来的工作经验,谈谈制备 R-PHA 致敏羊红细胞的一些体会。一、致敏用抗血清处理的改进纯化抗血清是制备致敏红细胞过程中关建的一步。经反复实践,在抗血清盐析处理后,省去胃酶消化或柱层析纯化的步骤,直接将其以不同温度加热裂解(如:马抗血清66℃30分钟;小鼠抗血清或腹水62℃30分钟),用以致敏红细胞。经加热处理的抗血清比经柱层析纯化的抗血清致敏效能提高60～100倍,与胃酶消化     

传染性法氏囊病毒VP2蛋白抗原表位多肽P22的免疫原性及生物学功能鉴定

为鉴定lBDV VP2蛋白线性B细胞抗原表位肽P22的免疫原性及生物学功能,作者采用固相多肽合成方法合成多肽P22,经纯化后用SMCC法分别与牛血清白蛋白(BSA)和细胞穿膜肽(PNT)进行偶联,得到免疫抗原P22-BSA和检测抗原P22-PNT;用P22-BSA免疫BALB/c小鼠3只,经3次免疫后得到多抗血清3份.应用ELISA检测了抗P22抗体的特异性,并通过抗P22多肽抗体作为特异性抗体检测了P22多肽结合CEF细胞的特性.结果经鉴定3份多抗血清均与P22多肽特异性反应,效价均达到1:105,且能特异性检测P22多肽与CEF细胞的特异性结合.本试验成功制备了P22免疫原,获得了效价高、特异性较好的鼠源抗P22多抗血清,并证明P22多肽与CEF细胞能够特异性结合,为进一步研究多肽疫苗的设计或试纸条的研制及表位单抗的制备提供了新的思路和基础.