猪附红细胞体病家兔感染模型的免疫指标检测

[目的]观察家兔人工感染猪附红细胞体后的免疫指标的变化。[方法]采用猪附红细胞体阳性血样,以腹腔注射的方式人工感染家兔。模型建立后,通过血液压片镜检及PCR方法检测。感染家兔进行红细胞免疫功能的测定、T淋巴细胞百分率检测,并利用淋转实验等对家兔感染后的免疫指标进行监测。[结果]家兔感染附红细胞体后,RBC-C3b和RBC-IC花环率明显下降,外周血ANA;E+T淋巴细胞百分率显著降低,淋巴细胞的转化功能差异不明显。[结论]猪附红细胞体人工感染家兔后可引起家兔的细胞免疫,造成红细胞免疫功能下降。     

猪附红细胞体小鼠感染模型的建立及相关指标检测

构建了猪附红细胞体小鼠感染模型,研究了感染后血液常规指标,红细胞免疫功能和脾淋巴细胞转化功能,旨在为附红细胞体病跨种间感染机制研究以及免疫功能变化研究提供借鉴。研究采用分离纯化的猪附红细胞体为感染源,以尾静脉注射方式人工感染SPF小鼠,感染后通过血液压片镜检,PCR检测及透射电镜检测鉴定模型建立成功。同时检测对照组和试验组小鼠的血液常规指标变化,红细胞免疫黏附功能和脾淋巴细胞转化功能变化,发现试验组小鼠红细胞总数减少,血红蛋白含量降低,红细胞比容降低,红细胞免疫黏附功能下降,其他指标没有显著变化。     

猪附红细胞体小鼠感染模型的建立及相关指标检测

构建了猪附红细胞体小鼠感染模型,研究了感染后血液常规指标,红细胞免疫功能和脾淋巴细胞转化功能,旨在为附红细胞体病跨种间感染机制研究以及免疫功能变化研究提供借鉴。研究采用分离纯化的猪附红细胞体为感染源,以尾静脉注射方式人工感染SPF小鼠,感染后通过血液压片镜检,PCR检测及透射电镜检测鉴定模型建立成功。同时检测对照组和试验组小鼠的血液常规指标变化,红细胞免疫黏附功能和脾淋巴细胞转化功能变化,发现试验组小鼠红细胞总数减少,血红蛋白含量降低,红细胞比容降低,红细胞免疫黏附功能下降,其他指标没有显著变化。     

猪附红细胞体对红细胞免疫水平的影响

为了探讨附红细胞体对红细胞免疫水平的影响,从河南省新乡市某猪场选取了4头感染附红细胞体阳性猪和4头无附红细胞体感染的健康猪,进行血涂片染色镜检,测定红细胞C3b受体花环率和红细胞免疫复合物花环率.结果显示:红细胞出现凹陷或变形,甚至形成空洞,这就有可能使其结构和功能发生改变,甚至出现破裂溶血现象.感染附红细胞体病猪红细胞C3b受体花环率和红细胞免疫复合物花环率都显著下降,说明附红细胞体侵袭红细胞的同时,破坏了红细胞膜表面的C3b受体,游离状态的C3b受体数量明显减少,导致机体红细胞的免疫黏附活性降低,红细胞免疫功能低下.红细胞免疫功能的破坏将直接或间接地影响到整个免疫系统功能的协调,从而使机体的抵抗力下降,为其他病原菌的侵入打开了门户.     

羊附红细胞体小鼠模型的建立

[目的]用人工感染的方法构建羊附红细胞体小鼠模型,并对其进行鉴定。[方法]将注射地塞米松的昆明小鼠以腹腔注射方式人工感染羊附红细胞体,通过镜检、巢式PCR检测、临床症状观察、剖检及病理形态学观察对感染情况进行鉴定。[结果]羊附红细胞体小鼠模型已成功建立。[结论]可以用昆明小鼠建立羊附红细胞体实验动物模型,不仅有助于该病的诊断,而且为羊附红细胞体流行病学、致病力、免疫学以及有效药物筛选等方面的研究提供了一种合适的动物模型。     

附红细胞体及附红细胞体病的研究现状和展望

根据笔者在上海首次在奶牛、仔猪和犬中发现附红细胞体病的病原体及参考其他文献，本文综述了该病的病原体、流行病学、临床症状、病理、诊断和防治等生物学特征，对该病的同状和发展趋势也作了一一论述。     

猪附红细胞体病诊治初探

根据临床经验,探讨了猪附红细胞体病诊治措施。     

猪附红细胞体病的诊断与防治

综述了猪附红细胞病的历史与分布、病原学、流行病学和病理变化,阐述了该病的临床诊断与防治措施。     

猪附红细胞体特异性PCR检测方法的建立

从猪血中分离附红细胞体,提取其基因组DNA,用EcoRI对基因组DNA进行酶切,将酶切片段进行琼脂糖电泳,得到一个1.8 kb的DNA片段,根据DNA序列分析与GenBank已知基因比较和PCR方法确定该片段具有特异性,以该片段为模板进行PCR,并将其扩增产物与其它猪的其他细菌DNA扩增产物相比较,建立一种检测猪外周血中附红细胞体的特异性PCR检测方法,并通过斑点杂交试验检测该产物特异性,通过临床应用检验该法的适用性。结果表明:扩增产物大小为782 bp,其序列与已知附红细胞体序列同源性为100%,斑点杂交试验证实该产物为附红细胞体特异性产物,将该方法应用于检测10头临床症状典型的感染猪和10头健康猪的血液,所有感染和隐性带菌猪的PCR检测结果为阳性,健康猪为阴性。猪外周血中附红细胞体的特异性PCR检测方法适用于检测无临床症状的隐性带菌动物。     

猪附红细胞体病的防治

猪附红细胞体病是由附红细胞体寄生于猪红细胞和血浆中而引起的一种传染病,主要引起猪高热、贫血、黄疸和全身发红,腹部皮下和四肢末梢发紫,且多为隐性感染.猪、绵羊、牛、马、犬、猫和其它动物易感,主要由吸血昆虫如蚊、跳蚤、虱、疥螨、虻、蠓等传播,注射针头、交配、手术器械也可以传播本病.     

猪附红细胞体双抗夹心ELISA检测方法的建立

实验通过纯化猪附红细胞体后免疫小鼠及家兔制备阳性血清,建立了猪附红细胞体双抗夹心ELISA检测方法.实验结果表明,以鼠阳性血清1:200稀释后作为捕获抗体,4℃包被过夜,1%明胶溶液37℃封闭1 h,兔阳性血清1:400稀释后作为检测抗体,辣根过氧化物酶标羊抗兔Igc抗体h:8000稀释,37℃显色10min为最佳反应条件.同时进行特异性、敏感性、重复性实验.该方法对猪附红细胞体最低检出量为3.812μg·mL-1,具有良好的特异性、敏感性和重复性,有望作为群体检测方法.     

猪嗜血支原体诊断方法的比较

[目的]建立猪嗜血支原体的PCR诊断方法,并与常规染色镜检诊断方法进行比较。[方法]对采自新疆阿拉尔垦区的疑似样品分别采用吖啶橙、姬姆萨染色镜检,采用温度法将嗜血支原体从红细胞上解离下来,提取其基因。根据GenBank上发表的猪嗜血支原体16S rRNA基因组序列（U88565）设计1对特异性引物,进行PCR扩增,建立猪嗜血支原体的PCR诊断方法。[结果]比较了3种诊断方法,指出了各自的优劣。所建立的PCR方法为猪嗜血支原体病的快速诊断及流行病学调查提供了新手段。     

应用重组MSG1蛋白检测猪附红细胞体抗体的ELISA检测方法的建立

 【目的】针对猪附红细胞体g1基因编码的MSG1表面粘附蛋白（rMSG1）和以此蛋白制备的多克隆抗体,建立相应的ELISA方法进行猪附红细胞体的临床检测,并进行效果评估,以获得一种猪附红细胞体感染的有效检测手段。【方法】将MSG1-pET28c_E.coli BL21菌株,在适宜的条件进行诱导表达,经菌体破碎、层析等步骤获取纯化的目的蛋白。以纯化的rMSG1制备免疫原接种小鼠,获取符合要求的多克隆抗体。以rMSG1和多克隆抗体建立ELISA检测方法,分析其敏感性、特异性、符合性和重复性。【结果】接种后获得了符合效价的抗血清;基于rMSG1的间接ELISA方法临床检测猪附红细胞体感染率为46.25%,其中阳性样本对已知小鼠抗血清有明显的阻断作用,并且与其它一些抗原无交叉反应;此ELISA方法的特异性和敏感性分别可达到97.06%和95.92%,较间接血凝试验(IHA)有更高的检出率。【结论】结果显示MSG1具有良好的抗原性,建立的ELISA方法具有较高的敏感性、特异性、符合性和可重复性,在临床检测中可以取得理想的效果。     

猪附红细胞体抗原特性分析

从自然感染的猪血液中纯化猪附红细胞体,应用SDS-PAGE和免疫印迹试验对猪附红细胞体抗原蛋白组分进行了初步分析。通过SDS-PAGE分离得到13种蛋白质,其蛋白分子量范围为24~170 kD,分别是120、112、110、108、68.2、58、49.6、41.2、30、29、26.2、25和24.3 kD。应用免疫印迹试验筛选出了6种特异性蛋白质,分子量分别是108、98.2、68.2、41.2、35和31 kD。     

猪附红细胞体MSG1基因的克隆与生物信息学分析

为研究猪附红细胞体MSG1蛋白质的结构与功能,应用巢氏PCR技术克隆出1 011 bp的猪附红细胞体MSG1基因,构建系统进化树并进行生物信息学分析。系统进化树分析结果显示,猪附红细胞体与小附红细胞体之间的亲缘关系较近。生物信息学分析结果显示,MSG1基因编码336个氨基酸,理论等电点(p I)为6.21,相对分子质量为36 745.8,无信号肽和跨膜区,抗原指数较高,具有较大的免疫原性。MSG1蛋白质的柔韧性区域较多,蛋白质3D结构显示为"X"立体结构,外周区域结构松散。     

麝香草酚对猪链球菌2型感染小鼠的抗炎作用

为筛选有效防治链球菌感染的药物,试验研究了麝香草酚对猪链球菌2型(SS2)感染小鼠的抗炎作用:用猪链球菌2型CCVC606菌株亚致死剂量感染小鼠,连续3 d腹腔注射麝香草酚水溶液,观察小鼠临床症状,分析血细胞,采用ELISA方法检测炎性细胞因子,HE染色评价脑、肾及肺组织的病理学变化。结果表明:猪链球菌感染组出现体温升高、精神沉郁、被毛杂乱、体重下降,部分小鼠眼部出现脓性分泌物;而麝香草酚给药组小鼠仅感染初期出现轻微体温升高、精神沉郁,并且麝香草酚能够显著降低链球菌感染小鼠炎性细胞因子IL-6的产生,显著减轻脑、肾及肺组织的病理学损伤,能够缓解机体炎症发展。这说明麝香草酚能够有效抵抗猪链球菌2型感染引起的炎症,具有良好的应用前景。     

Effect of Ciprofloxacin on the Immune Response of Growing Piglets to Streptococcosis suis

24 seven-week-old hybrid healthy pigs (weighted 25.5?.4 kg ) from a source were randomly allotted to four groups (six each): the blank group, the negative group, the positive group and the test group. Pigs in the negative group and the test group were developed into a typical subacute Streptococcosis suis by inoculating subcutaneously 0.45 billion of pure living Streptococcus suis (type C55126) per kilogram body weight. Pigs in the positive group and the test group were intravenously injected ciprofloxacin (5 mg kg1 of BW) for 8 consecutive days (twice daily). Pigs in the blank group and positive group were inoculated with a placebo (0.85% NaCl). Some immunity parameters were tested on day 0, 7, 14, 21 and 28 after inoculation. Total leukocytes were counted with microscope. Differential leukocyte counts were performed on Giemsa-stained blood smears. The effect on the nitroblue tetrazolium (NBT) reduction of neutrophil was used to determine its phagocytic ability. Lymphocyte proliferation was determined by using the mitogens PHA. The total serum IgG concentration was measured by radial single immunodiffusion. A 50% hemolytic test was used to investigate the complement activity in serum. Whereas, a phytohemagglutinin (PHA) skin test was used to investigate in vivo immunity. We got the following results: Ciprofloxacin can retard the clinical signs of an increase of leukocyte counts, a large percent of lymphocytes and a relative percentage decrease of neutrophis. Ciprofloxacin could promote nitroblue tetrazolium (NBT) reduction by neutrophil. Though there was no obvious difference (P>0.05) between the test group and the negative group, the interaction of both Streptococcosis suis and ciprofloxacin was significantly different(P<0.01, on day 14, 21, 28 post-inoculation). The two factors enhanced NBT reduction by neutrophils of pigs in the test group in coordination (P<0.01, significantly higher than the blank group). In vitro proliferation to phytohemagglutinin (PHA) of lymphocytes from ciprofloxacin-treated diseased pigs was increased finally. Mean index, which was stimulated (SI) by PHA, of proliferation on lymphocytes in negative group, was significantly lower (P<0.01) than the blank group on days after inoculation, so do the SI of the test group on day 7, 14, 21 after inoculation. However, the drug increased the lymphocyte proliferation and led to the markedly higher response (P<0.01) in test group at the 28th day post-inoculation than the negative group, though there was no difference (P>0.05) between the test group and the blank group. Delayed-type hypersensitivity (DTH) to PHA was increased in diseased animals after receiving the treatment with ciprofloxacin. Owing to the difference of interaction (P<0.01, on day 21, 28 after inoculation), the DTH response was increased on the 21st day after inoculation (P<0.01. In comparison with both the negative group and the blank group). At the same time, the DTH response in negative group was lower than the blank group (P<0.05). The drug caused the decrease of IgG level in serum (P<0.05, on day 14 after inoculation, lower than the negative group). On day 14 after inoculation, the complement activity in se-rum in the test group was lower than the blank group (P<0.05), but on day 28, it was higher (P<0.05) than the negative group.     

猪链球菌2型在小型猪模型体内的动态分布

实验采用SPF小型猪建立猪链球菌2型的动物模型,将14头SPF小型猪随机分为实验组和对照组,实验组肌肉注射2 mL的1×109 CFU.mL-1菌液,对照组注射2 mL无菌培养基。攻毒后利用细菌培养和PCR技术定期检测体内血液和组织中的细菌动态分布情况。实验发现SS2侵入血液的速度很快;扁桃体是该菌的定植器官,SS2对肝脏、肾脏等实质器官的黏附性无明显差异;只有出现神经症状及死亡仔猪,才能从脑组织中分离到SS2,说明细菌突破血脑屏障,进入大脑可能是引发脑膜炎的前提。试验为研究该病的致病机理提供了依据。