不同系统进化群鸡源大肠杆菌耐药性调查分析

[目的]通过系统进化群和耐药性分析,了解鸡源大肠杆菌致病菌株的分布情况及耐药特征,为有效控制鸡大肠杆菌病提供依据。[方法]采用微量肉汤稀释法测定菌株耐药表型（MIC）,采用PCR法检测耐药基因和系统进化群分群试验,采用SPSS17.0软件进行差异显著性分析。[结果]低致病群B1（38.1%）和非致病群A（34.0%）菌株分布相对较多,其次是高致病群D（21.2%）和B2（6.2%）;分离菌株对氨苄西林（87.2%）、四环素（87.0%）、复方新诺明（87.0%）和磺胺异噁唑（80.0%）耐药严重,多重耐药率高达98.86%,但对多粘菌素E敏感;耐药基因sul1（71.0%）、sul2（44.8%）、sul3（18.7%）、tetA（42.2%）、tetB（15.8%）、tetM（7.3%）均有检出,tetC、tetO、tetK、tetL、tetW均未检出,9.13%菌株同时携带3种sul基因,仅有一株菌同时携带3种tet基因。表型耐药菌株携带耐药基因的能力明显高于非耐药菌株（P<0.05）。高致病群B2、D群耐药程度较B1和A群严重,对氧氟沙星、庆大霉素、大观霉素、头孢噻呋、磺胺异噁唑、复方新诺明、奥格门丁等7种药物差异显著（P<0.05）。[结论]我国鸡源大肠杆菌高致病菌株检出率高,且耐药程度相对严重,在适宜条件下更易导致鸡群发病且难以控制。     

中监所完成猪链球菌2型药敏试验

中国兽医药品监察所采用纸片扩散法和最小抑菌浓度（MIC）测定法。选择10个类别共32种抗菌药物．对四川不同地区的病死猪体内分离并经鉴定的猪链球菌2型7个菌株进行药敏试验。结果7个菌株的耐药谱基本相同：对青霉素、氨苄西林、阿莫西林、奥格门丁（阿莫西林-克拉维酸）、头孢氨苄、头孢拉定、头孢他定、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻呋、红霉素、     

利用MLST技术探讨不同地区致病性耐药鸡源大肠杆菌的遗传进化关系

选取来自山东等10省698株鸡源大肠杆菌为研究对象,分别利用PCR、微量肉汤稀释法、MLST技术方法进行系统进化群分群、耐药表型检测、分子分型,并采用Bio Numerics v4.0软件和SPSS20.0软件进行数据处理分析。结果显示,低致病群B_1群为48.85%(341/698)和非致病群A群24.64%(172/698)分布较多,高致病群D群20.20%(141/698)和B_2群为6.31%(44/698)。鸡源大肠杆菌耐药严重,12种药物的耐药率约在50%以上。B_2和D群菌株对8种抗菌药的耐药率高于A和B_1群菌株,其中对庆大霉素、大观霉素、头孢噻呋、氨苄西林和奥格门丁5种药物极显著性差异(P<0.01),对氟苯尼考和复方新诺明显著性差异(P<0.05)。135株高致病菌株经MLST分型得到48个ST型,ST117(12株)和ST354(12株)最多,其次是ST115(8株),ST2309(8株),ST10型(7株),ST69(6株),ST1011(5株),ST1158(5株)。有29个ST型各1株,18株菌株未分出序列型。不同地区大肠杆菌ST型分布存在差异,ST69和ST354型分布最为广泛(4个省),其次是ST115、ST117和ST2309型(3个省),ST10、ST48、ST57、ST362、ST371、ST1011和ST1158(2个省),其余36个ST型菌株仅在1个省市有检出。135株菌株分为35个聚类簇,其中23个聚类簇的遗传相似性在40%以下,但有6个聚类簇菌株间的遗传相似性均在80%以上。48个ST型菌株共获得了76种耐药谱。我国各地健康鸡群隐性携带相对较高比例的高致病菌株,且耐药程度相对严重,耐药谱较广。鸡源大肠杆菌菌株分布具有多态性和地域性,ST型与耐药谱之间无相关性。     

及其对实验性感染鸡大肠杆菌病的疗效

采用肉汤微量稀释法测定头孢噻呋对大肠杆菌、沙门菌、溶血性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌等病原菌的最小抑菌浓度,采用棋盘稀释法测定头孢噻呋与氧氟沙星、甲氧苄啶（TMP）的联合抑菌浓度指数。结果表明,头孢噻呋、氧氟沙星对5种病原菌都具有很强的抗菌活性;头孢噻呋与氧氟沙星联合使用时,对大肠杆菌、沙门菌、链球菌可产生协同作用,对溶血性巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌表现为无关作用;头孢噻呋与TMP联合用药时,对上述5种病原菌均具有协同作用。对实验性感染鸡大肠杆菌病的药效学试验结果表明,头孢噻呋高（100mg／L）、中（50mg／L）剂量对感染鸡的有效率明显高于对照药物庆大霉素（P〈0．05）,极显著高于感染对照组（P〈0．01）;头孢噻呋高剂量组（100mg／L）感染鸡的增重率与健康对照组相比差异不显著（P〉0．05）。建议临床应用头孢噻呋治疗鸡大肠杆菌病时,可采用饮水给药,剂量为100mg／L。     

2014-2016年广州市屠宰场分离沙门氏菌血清学鉴定和耐药性分析

2014-2016年从广州市屠宰场分离沙门氏菌151株,鉴定出12种血清型,前3位优势血清型分别为德尔卑沙门氏菌、罗森氏沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌。采用微量肉汤稀释法测定分离菌株对13种抗菌药物的敏感性。结果显示,沙门氏菌对四环素、多西环素、磺胺异恶唑、氨苄西林、大观霉素的耐药率都在60%以上,对奥格门丁、恩诺沙星、氧氟沙星、头孢噻呋、多粘菌素E敏感（耐药率≤16%）。多重耐药率为79.20%。研究表明,沙门氏菌对部分药物耐药性较严重,亟需加强养殖业抗菌药物的合理应用以控制耐药性的发展。     

头孢噻呋钠对家禽常见细菌感染病的临床疗效研究

为了评价头孢噻呋钠对鸡白痢病、鸡大肠杆菌病、鸡葡萄球菌病的治疗效果,用头孢噻呋钠对人工诱发鸡白痢病、鸡大肠杆菌病、鸡葡萄球菌病进行临床治疗试验。结果显示:头孢噻呋钠对鸡白痢病的治愈率比氨苄西林混悬注射液、硫酸粘杆菌素、氟苯尼考分别高20％、13.4％、26.7％,死亡率分别低20％、3.4％、16.7％;头孢噻呋钠对鸡大肠杆菌病的治愈率比硫酸庆大霉素高72.5％,死亡率低55.5％;头孢噻呋钠对鸡葡萄球菌病的治愈率比氨苄青霉素高12.5％,死亡率低10％。结论:头孢噻呋钠对三种疾病的治疗效果在死亡率、有效率和治愈率的指标比较上,均显著高于对照药物(P<0.05)。头孢噻呋钠组的平均增重均显著高于对照药物组(P<0.05)。     

鸡源大肠杆菌的血清型分布与耐药性监测

对180株鸡源大肠杆菌分离菌株进行O血清型鉴定，鉴定出171个分离菌株的O血清型40种，占分离菌株的95％，其中O36血清型的菌株最多，有40株，占定型菌株的23．9％，为优势血清型菌株。采用微量稀释法药敏试验监测了180株鸡源大肠杆菌分离菌株对20种抗菌药物的耐药性，结果表明，除头孢曲松、头孢氨噻肟、头孢噻呋、阿米卡星、氟苯尼考外，分离菌株对其余15种抗生素均呈现出不同程度的耐药性，其中，172株大肠杆菌分离菌株对两种或多种抗生素有耐药性，对萘啶酸的耐药率最高(93．3％)，其次是四环素(88．9％)、氨苄青霉素(72．8％)、阿莫西林(7l、7％)、罗比沙星(64.4％)、沙拉沙星(62．8％)。大多数分离株对氟喹诺酮类药物有很高的耐药率(52．9％～93．3％)，并表现出多重耐药性，124株分离株表现为对2种以上氟喹诺酮类药物的耐药性。     

吉林和黑龙江两省猪鸡源产ESBLs大肠杆菌耐药检测与优势基因型分析

为了解吉林和黑龙江两省猪鸡源产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠杆菌菌株的流行分布及耐药特征,分析其优势基因型和基因亚型,依据美国临床实验室标准化委员会（CLSI）标准,对分离自吉林和黑龙江两省的210株大肠杆菌进行ESBLs表型检测,采用微量肉汤稀释法和PCR方法进行药物敏感性试验和耐药基因检测,采用SPSS软件中的卡方检验方法进行数据处理与统计分析。结果显示：①产ESBLs菌株检出率为34.76%,两省检出率差异不显著（P=0.54）,鸡源产ESBLs菌株检出率极显著高于猪源（P＜0.01）。②210株大肠杆菌对四环素（90.95%）和磺胺异噁唑（80.00%）最为耐药,鸡源大肠杆菌对13种药物的耐药率高于猪源,吉林省分离菌株对10种药物的耐药率高于黑龙江省;产ESBLs菌株对13种药物的耐药率高于非产ESBLs菌株。③210株大肠杆菌多重耐药率为83.33%,猪源菌株多重耐药率（77.57%）低于鸡源（89.32%）,差异显著（P=0.022）,但两省之间差异不显著（P=0.360）;不同动物来源、不同地区间的产ESBLs菌株多重耐药率差异均不显著（P＞0.05）。④73株产ESBLs菌株主要基因型为CTX-M型（97.26%）,其次为TEM型（50.68%）,OXA型仅在鸡源中检出,两种来源菌株中均未检出SHV型。结果表明：产ESBLs菌株在吉林和黑龙江两省的猪鸡群中均有流行,且耐药严重,鸡源菌株比猪源耐药严重;CTX-M型和TEM型为两省猪鸡源产ESBLs大肠杆菌的主要流行基因型。本研究为指导大肠杆菌病防控的临床合理用药,有效控制产ESBLs菌株流行提供了依据。     

优溴胺对人工诱发鸡大肠杆菌病的疗效观察

本试验人工诱发1周龄艾维茵商品肉仔鸡患上大肠杆菌病,然后用优溴胺3个不同剂量对致病鸡进行预防和治疗试验,以硫酸阿米卡星、盐酸左旋氧氟沙星和头孢噻呋钠作为对照药物,评价优溴胺对鸡大肠杆菌病的预防和治疗效果。试验结果表明：优溴胺对鸡大肠杆菌病具有较好的预防和治疗效果,高、中剂量组的保护率和治愈率均明显高于硫酸阿米卡星组、盐酸左旋氧氟沙星组和头孢噻呋钠组;保护率高达93.3%（P〈0.05）,治愈率高达90.0%（P〈0.05）。     

新疆犊牛源大肠杆菌系统进化及其耐药特性

本研究利用三重PCR的方法对新疆犊牛源大肠杆菌临床分离株进行系统进化分群,对不同进化群的菌株进行致病性和16种药物的敏感性试验。结果:粪便样品中分离出的127株大肠杆菌中非致病群A(37.8%)和高致病群D(30.7%)菌株分布相对较多,其次是低致病群B1(18.1%)和高致病群B2(13.4%);其中腹泻犊牛源(B2+D)群大肠杆菌明显多于健康犊牛。药敏结果显示,犊牛源大肠杆菌多重耐药表型的菌株占85.0%,主要分布在3耐~7耐,其中腹泻犊牛携带的大肠杆菌耐药率高于健康犊牛,D群大肠杆菌耐药率最高,B2群耐药率最低,A群和B1群居中。结论:新疆犊牛源大肠杆菌耐药性比较严重,应受到重视。     

河南省鸡源致病性大肠杆菌耐药性的监测分析

对来源于河南省32个县市的93株鸡源致病性大肠杆菌进行了16种抗生素药物的药敏试验和菌株耐药性与质粒图谱间关系的分析研究。结果表明:93株鸡源致病性大肠杆菌均为多重耐药菌株,耐药种类3～14种,耐药图谱复杂,可以分为58种耐药类型,相同来源的大肠杆菌耐药图谱、质粒图谱相似,但菌株耐药种类与质粒图谱条带的多少无一定的相关性。     

规模化肉鸡场大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

对驻马店地区规模化肉鸡场所发疾病进行调查,根据临床症状、病理变化及病原分离鉴定结果,确诊为大肠杆菌病。选择10株分离菌进行药敏试验,结果表明,多数菌对利高霉素、头孢曲松、丁胺卡那霉素、新霉素、氧氟沙星敏感,敏感率分别为80%、60%、60%、60%、50%;对多黏菌素、氟苯尼考的敏感率分别为10%、20%;分离的10株菌对甲砜霉素、强力霉素、恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、链霉素、阿莫西林、氨苄青霉素、土霉素全部耐药。     

山东部分鸡致病性大肠杆菌菌株抗药性测试

用２４株致病性大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）,对２１种药敏试纸进行抗药性测试。结果表明２４株Ｅ．ｃｏｌｉ抗药性相当严重,每种药物的敏感性也有差异。 ２１种药物只有 ２种药最敏感, ８种药完全不敏感,其余 １１种药也只对 ３－ ８个菌株产生高度敏感, １－９个菌株产生中度敏感,对８－１９个菌株产生完全不敏感。     

山东省部分地区禽源致病性大肠杆菌的血清流行病学调查与耐药性检测

为调查山东省禽源致病性大肠杆菌流行的血清型及耐药性,从山东部分地区的45家养禽场分离到致病性大肠杆菌96株,应用微量平板凝集试验进行了血清型鉴定,共鉴定出18种血清型,其中优势血清型6种,分别为O78、O2、O15、O18、O143、O88,占定型致病性菌株的64％。抗菌药物敏感性试验发现,96株大肠杆菌对20种药物有不同程度的耐药性。75％以上的菌株对氨苄青霉素、阿莫西林、土霉素等5种抗菌药耐药,50％以上的菌株对卡那霉素、多西环素、环丙沙星等7种抗菌药表现为耐药;所有分离株存在多重耐药现象,75％的受检菌对9种或9种以上的被测药物耐药。结果表明,O78、O2、O15、O18、O143、O886种血清型是山东省部分地区近年来禽源致病性大肠杆菌的优势血清型,且禽源致病性大肠杆菌的耐药现象严重,有必要加强耐药性检测,以指导兽医临床合理使用抗菌药物。     

仔猪腹泻致病性大肠杆菌分型鉴定及耐药性分析

为了解贵州省规模化养猪场腹泻仔猪致病性大肠杆菌流行情况及耐药性变化,本研究运用凝集试验、PCR和药敏纸片琼脂扩散法等方法对分离的78株致病性大肠杆菌进行血清型、毒力基因及耐药性分析。结果显示,78株致病性大肠杆菌以O138、O87血清型为主,占定型菌株的60.8%;其中62株致病性大肠杆菌检出毒力基因,检出率为79.5%,可分为8种毒力基因类型,分属肠致病性大肠杆菌（EPEC）、肠产毒性大肠杆菌（ETEC）和肠聚集性大肠杆菌（EAEC）,毒力基因eaeA、elt和escV检出率较高,分别为38.5%、28.2%和21.8%;分离到的致病性大肠杆菌对β-内酰胺类药物高度耐药,均为多重耐药株,耐药种类可达8种以上。结果表明,当前贵州省规模化养猪场腹泻仔猪致病性大肠杆菌的毒力基因检出率较高且基因型复杂,耐药性严重。本试验结果可为规模化养猪场防控仔猪腹泻提供基础资料及理论依据。     

2019年湖南省部分地区鸡、鸭、猪源大肠杆菌耐药性调查

旨在调查2019年湖南省部分地区不同来源的大肠杆菌对抗生素的耐药水平,为养殖合理用药提供参考。从4个市畜禽养殖场采集猪、鸡和鸭粪便285份,使用麦康凯琼脂培养基和伊红美蓝培养基对大肠杆菌筛选,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定,采用微量肉汤稀释法检测16种抗生素对大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)。共分离出203株大肠杆菌(鸡源146株、鸭源20株和猪源37株),对四环素和氨苄西林耐药率最高,分别达到89.2%和84.7%;对头孢他啶、奥格门丁、黏菌素耐药率较低,分别为2.5%、2.0%和0.5%;所有菌株均对美罗培南敏感。抗3种及以上抗生素的菌株数目占比为87.7%,而仅5.42%的菌株对所有检测的抗生素敏感。另外,来源于减抗示范养殖场的大肠杆菌对大部分抗生素的耐药率,与来源于非减抗养殖场大肠杆菌相比未见显著差异。上述结果表明,湖南省动物源大肠杆菌的耐药水平仍处在较高水平,重视兽药使用管理并持续开展对大肠杆菌的耐药性监测十分必要。     

种鹅大肠杆菌分离鉴定及耐药性分析

为了解种鹅致病性大肠杆菌病的病原及其药物敏感性,2012年从广东地区患病种鹅器官和粪便中分离鉴定了62株大肠杆菌,采用琼脂稀释法测定了大肠杆菌对17种抗菌药物的敏感性。结果发现大肠杆菌耐药性严重,对大部分药物的耐药率超过60.0%,仅对头孢西丁、头孢他啶和黏菌素较敏感。联合药敏试验结果显示多西环素和氟苯尼考联用对耐药大肠杆菌产生协同抑菌作用,FIC指数为0.375～0.75。采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）法对24株大肠杆菌进行分型,结果分为17种不同的PFGE型别。大肠杆菌系统进化分群结果显示43.5%属于系统进化组群的D组,其次是A组和B1组,分别为34.8%和21.7%,B2组未检测到。通过对种鹅大肠杆菌耐药性、PFGE分型及其系统发育群进行综合分析,为临床用药提供了参考依据。     

鸡源大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析

为探明泰州地区鸡源大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况及耐药情况,对13株分离自泰州地区的鸡源大肠杆菌进行ESBLs检测,并采用微量肉汤稀释法测定不同药物对产ESBLs菌和非产ESBLs菌的最小抑菌浓度(MIC).结果显示,13株分离菌中有5株被确定为产ESBLs菌株,阳性率为38.5%.产ESBLs菌对β-内酰胺类抗菌药的耐药性极其严重,耐药率明显高于非产ESBLs菌,二者对氨苄西林的耐药率分别为100%和62.5%,对头孢噻呋的耐药率分别为100%和12.5%,对头孢曲松的耐药率分别为80%和20%,产ESBLs菌对其他抗菌药物的耐药率也明显高于非产ESBLs菌.氨苄西林与舒巴坦(2:1)联用与单用氨苄西林相比,对产ESBLs菌的MIC值降低至单用氨苄西林时的1/16~1/8,但对非产ESBLs菌的MIC值没有明显变化.氨苄西林与阿米卡星(1:1)联用与单用两者中的任何一种相比,对产ESBLs菌和非产ESBLs菌的MIC值均降低至单药时的1/16~1/2.结果表明,临床可选择β-内酰胺酶类抗生素与β-内酰胺酶抑制剂的混合制剂来治疗产ESBLs鸡大肠杆菌的感染,也可尝试将不同种类、不同作用机理药物联合应用来治疗鸡大肠杆菌感染,尤其是耐药性鸡大肠杆菌感染.     

屠宰前鸡、猪源大肠杆菌耐药性调查

本试验旨在了解屠宰前鸡、猪源食品动物体内大肠杆菌耐药情况,分析潜在的食品安全问题。从广州市畜禽交易市场随机采集待屠宰鸡和猪的粪便样品,分离鉴定大肠杆菌,并采用琼脂稀释法检测大肠杆菌对15种抗菌药物的敏感性。结果显示,从658份猪源样品和133份鸡源样品中共分离鉴定出731株大肠杆菌,其中猪源606株,鸡源125株。药敏试验结果显示,731株大肠杆菌均表现出不同程度的耐药,耐药谱广且多重耐药现象严重。对复方新诺明和四环素的耐药率为90.0%以上,仅对头孢西丁、黏菌素和阿米卡星较敏感(耐药率均低于3%)。鸡源大肠杆菌对头孢噻肟、头孢曲松、新霉素、阿米卡星、萘啶酸和环丙沙星的耐药率显著高于猪源大肠杆菌(P＜0.05)。鸡源大肠杆菌中3耐及3耐以上的菌株占97.60%,猪源大肠杆菌占94.72%。结果表明,屠宰前畜禽体内大肠杆菌对临床常用抗菌药物的耐药性非常严重,以多重耐药为主,且耐药谱丰富多样。提示屠宰前畜禽携带的耐药菌对食品安全和人类健康存在较大的安全隐患。     

中药与抗菌药物联用对猪源大肠杆菌耐药性的抑制作用

为了探讨中药与抗菌药物联用对大肠杆菌耐药性的作用效果，本研究对河南部分地区采集的样品（50份）进行分离鉴定、生化试验及致病性试验，对分离鉴定后的致病性猪大肠杆菌选用12种中药采用K-B法进行耐药性检测，将筛选出来的中药与抗生素进行中西联用对致病性大肠杆菌做体外抑菌试验，并分析中西药联用对大肠杆菌的抑制作用。结果显示，采集的50份样品有23株菌符合大肠杆菌的分离培养特性和生化特性，且23株菌均为致病性大肠杆菌；通过耐药性检测，23株试验菌株对测试的中药均有不同程度的耐药性，其中试验菌株对甘草耐药率最高（82.6%），其次为生地（78.2%），而对黄柏（17.3%）和白头翁（21.7%）耐药性较低，具有一定的敏感性；体外抑菌试验结果发现，中药与抗生素联用均有不同程度的抑菌效果，其中黄柏、白头翁与抗菌药物联用的抑菌效果最明显。以上结果说明中药与抗菌药物联用不仅可以抑制大肠杆菌的耐药性，还可以延缓大肠杆菌耐药性的产生。