苹果褪绿叶斑病毒的特性与为害

目前,世界各地报道的苹果病毒病害有40余种。其中,苹果褪绿叶病毒最重。现将该病毒的危害性及研究进展情况综述如下。供爱好者参考。一、苹果褪绿叶斑病毒的危害概况及病状     

苹果褪绿叶斑病毒在苹果植株体内的分布

以采自河北农业大学苹果园的褪绿叶斑病毒(apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)样本为试材,采用实时荧光定量RT-PCR方法,研究了苹果不同组织部位、不同树体方位、不同生长发育时期和病毒相对含量之间的关系,以期为明确褪绿叶斑病毒在苹果植株中的时空分布规律提供参考依据。结果表明:从组织部位角度分析,在苹果的盛花期,ACLSV在花中的相对含量最高,芽中最低,ACLSV相对含量由高到低依次为:花、二年生枝皮组织、叶、一年生枝皮组织和芽。从树体方位角度分析,在苹果一年生枝皮组织中,ACLSV在4个方位上的病毒相对含量差异显著,位于南向的病毒相对含量最高,西向最低。从生长发育时期角度进行分析,2015年9月至2016年4月,苹果一年生枝皮组织中,病毒相对含量从9月中旬至10月中旬大幅升高,10月中旬达到这8个月中的最高峰,此后病毒相对含量开始下降,3月起呈上升趋势。     

苹果属植物对苹果褪绿叶斑病毒病的抗性

毒原P204双芽嫁接接种苹果褪绿叶斑病毒(Apple Chlortic Leaf Spot Virus),对所用试材都能进行有效浸染.试验表明,苹果属植物受CLSV浸染后,过氧化物酶活性及同工酶都产生显著变化,并且相对酶活性的大小及同工酶的变化与植株对CLSV抗性的强弱显著相关;受侵染后新酶带的出现不是新酶成分的产生,只是由于病毒的侵染诱发酶蛋白的提前合成.试验初步发现所用试材中河南海棠、丽江山定子、小金海棠抗性相对较强;垂丝海棠、锡金海棠抗性较弱;扁果海棠、森林苹果R12740—7A、湖北海棠、三叶海棠则甚敏感.     

苹果属植物对苹果褪绿叶斑病毒病的抗性

毒原Ｐ２０４双芽嫁接接种苹果褪绿叶斑病对所用试材都能进行有效侵染。试验表明，苹果属植物受ＣＬＳＶ侵染后，过氧化物酶活性及同工酶都产生显著变化，并且相对酶活性的大小及同工酶的变化与植株对ＣＬＳＶ抗性的强弱显著相关；受侵染后新酶带的出现不是新酶成分的产生，只是由于病毒的侵染诱发酶蛋白的提前合成。试验初步发现所用试材中河南海棠、丽江山定子、小金海棠抗性相对较强；垂丝海棠、锡金海棠抗性较弱；扁果海棠、森林     

核果类果树苹果褪绿叶斑病毒的研究

１９９６和１９９７年春天，利用ＰＡＳ—ＥＬＩＳＡ检测方法，对昌黎等地区１９个品种２６２株桃树，３个品种４２株李树和３个品种１４株甜樱桃树的苹果褪绿叶斑病毒进行了检测，结果表明，桃树总感染株率高达６０．３％；李树和甜樱桃的感染率分别为７１．４％和４７．１％。不同品种之间感染株率存在着明显差异。     

梨组织中苹果褪绿叶斑病毒的原位RT-PCR检测

 为了建立梨树苹果褪绿叶斑病毒原位RT-PCR检测技术, 用已知带有苹果褪绿叶斑病毒的库尔勒香梨和无病毒实生苗叶片为材料, 利用D IG标记, 研究了香梨病毒的叶片石蜡切片IS-RT-PCR检测技术。包括AMV逆转录酶、dNTPs、RNasin及互补引物浓度对cDNA合成的影响, 退火温度、Taq DNA聚合酶、Mg²⁺ 、引物浓度及循环次数对原位PCR效果的影响。结果表明: RNasin的用量大于0.2 U·μL^-1时,信号强度随着RNasin量的加大而增强; 只有当dNTPs浓度达1.0 mmol·L^-1时才能生成一定量的cDNA;AMV浓度在0.3～0.5 U·μL^-1均可进行正常的逆转录, 而且在该范围内产物的量随AMV浓度提高而增多; 引物浓度达到0.9μmol·L^-1以上时才能进行有效的逆转录, 并且生成的cDNA的量随引物浓度增大而增加。原位扩增ACLSV的cDNA适合退火温度为56℃。循环20～30次可出现较强的蓝色信号, 引物浓度在0.8～1.2μmol·L^-1时显色较好; Taq酶浓度为20 U·mL^-1以上, 均显示较深的蓝色; Mg^{2 +}浓度为1.5mmol·L^-1就可满足原位PCR所需。获得了苹果褪绿叶斑病毒的原位PCR优化检测体系, 利用建立的优化程序对香梨样品进行了检测验证, 取得了很好效果。     

梨叶片中苹果褪绿叶斑病毒的引物原位标记检测

 选用带苹果褪绿叶斑病毒的香梨叶片,制备成适合进行原位RT-PCR的石蜡切片。设计特异引物,利用引物原位标记技术对切片组织中的病毒进行了检测研究,结果表明,PRINS-FITC染色法和PRINS-Rhodamine染色法均能获得良好的检测效果,有病毒部位分别显示绿色荧光和红色荧光,而且荧光出现的位置与原位RT-PCR检测的结果一致。由此证明引物原位标记技术可用于果树病毒的原位检测。     

苹果褪绿叶斑病毒的分离提纯和酶联免疫吸附法检测

<正> 苹果褪绿叶斑病毒CLSV是影响苹果生产的主要潜隐病毒之一。目前在培育繁殖苹果无病毒苗木的工作中,普遍采用木本指示植物二重芽接法检测病毒,但这种方法费工费时。因此,我们从1987年开始进行病毒的分离提纯和抗血清制备工作,旨在为苹果潜隐病毒的大规模检测,建立简便、快速、灵敏的血清学方法。     

苹果褪绿叶斑病毒PBM1毒株的提纯,抗血清制备研究总结

从木本植物上分离出的苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus)的PBM_1毒株能引起李品种“Hauszwetshe”的假痘病症状,将该毒株接种到昆诺藜上繁殖,感染PBM_1毒株的昆诺藜叶片用两次冻融蔗糖梯度离心提纯,每100g叶片的病毒含量平均为1.68mg。提纯的病毒溶液在电镜下可以观察到弯曲状病毒颗粒上的螺纹结构。通过SDS——聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,该病毒外壳蛋白的分子量21.5道尔顿。提纯的病毒免疫家兔制备的抗血清,用ELISA法检测感染PBM_1的昆诺藜叶片和桃花,检测效果很灵敏。     

山楂属植物中苹果褪绿叶斑病毒的RT-PCR检测及病毒脱除方法

【目的】建立优化的山楂属植物苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)的RT-PCR检测体系,获得以山楂组培苗为试材的高效ACLSV脱除方法。【方法】基于转录组高通量测序解析的山楂属植物ACLSV基因组序列设计病毒检测引物,比较c DNA模板浓度、Taq DNA聚合酶种类及采样部位对病毒RT-PCR检测效果的影响。通过组培苗热处理和培养基中添加三氮唑核苷来脱除山楂植株中的ACLSV。【结果】基于转录组高通量测序获得的2个ACLSV山楂分离物的全基因组序列设计并筛选出适合于山楂属植物ACLSV的RT-PCR检测引物。建立了优化的山楂属植物ACLSV的RT-PCR检测体系。对80份山楂样品进行病毒检测,其中有18个样本检测出ACLSV,带毒率为22.5%。比较了热处理(37℃、30d)、化学处理(培养基中添加20 mg·L-1的三氮唑核苷,处理40 d)、热处理与化学处理结合方法(处理30 d)3种方法对山楂组培苗中ACLSV的脱除效率,表明热处理或热处理与化学处理结合的方法能够完全脱除山楂中的ACLSV,而单独化学处理的脱毒率不能达到100%。【结论】建立了优化的山楂属植物ACLSV的RT-PCR检测体系,表明组培苗热处理是脱除山楂植株中ACLSV的有效方法。     

A蛋白酶联法检测苹果褪绿叶斑病毒和茎沟病毒的研究

<正> 苹果褪绿叶斑病毒(CLSV)和茎沟病毒(SGV)是苹果的两种主要潜隐病毒,严重影响苹果的产量和质量。检测苹果潜隐病毒的传统方法是木本指示植物二重芽接鉴定法,但这种方法耗工费时。由于两种病毒不稳定和在苹果树中含量低,用经典的血清学方法不能直接检测苹果植株粗汁液中的病毒。近几年国外采用酶联免疫吸附法(EL     

东北苹果产区抗寒砧木研究与利用进展

该文针对我国东北苹果栽培区域的不同气候特点,总结了各地栽培现状,在综合前人研究成果的基础上,概述了不同气候区的苹果主栽品种和主要砧穗组合;对苹果主要砧木资源、抗寒性研究方法及应用现状进行综述,并对抗寒砧木的利用提出建议。     

云南苹果产区苹果茎沟病毒(ASGV)的发现及其分子变异

【目的】为了查明云南省苹果产区的苹果茎沟病毒病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)的侵染情况和不同来源分离物间的分子变异情况,【方法】以云南昭通、丽江、昆明、曲靖等地采集的325份苹果病毒样品为试材,采用RT-PCR技术对其是否携带ASGV进行检测,运用DNAMAN6.0、MEGA5.0对实验获得的6个分离物和GenBank上已登录的34个分离物进行序列比对分析。【结果】ASGV在云南各大苹果产区的发病率高达48%。序列比对结果显示,这些分离物的核苷酸序列相似性为87.3%～93.8%,氨基酸序列相似性为90.7%～98.7%。系统发育树显示,云南的6个分离物聚为一簇,而陕西省苹果分离物YL06与云南省分离物ZT1、TJX1亲缘关系比较近,聚为一支;ASGV苹果分离物要明显区别于ASGV梨分离物和CTLV柑橘分离物。【结论】云南省苹果产区苹果树的ASGV带毒率高达48%,推测可能是一种发生率比较普遍的病毒病,这是云南省发现的首次报道。系统发育树显示:本研究获得的6个苹果分离物明显区别于其他寄主分离物,并且与其他地区的分离物具有一定差异,推测在我国,ASGV的分子变异与寄主/地域来源存在着一定的相关性。     

中国苹果产区变动分析

[目的]探究中国苹果生产时空变化规律.[方法]利用1978-2018年全国苹果生产数据,分析我国苹果生产集中度、产地集中度和规模比较优势指数的变化等.[结果]经过40 a(年)的发展,我国已经形成了黄土高原和渤海湾两大优势苹果产区布局;陕西成为我国苹果生产第一大省,陕西和山东苹果生产集中度系数分别达25.71％和24....     

不同产区华硕苹果品质差异性分析

【目的】分析和评价不同产区华硕苹果果实品质,为苹果品质评价、区域适应性研究和优化布局提供学术理论参考。【方法】用F检验和双侧t检验对不同产区间华硕苹果果实品质指标差异显著性分析,用变异系数权重法和TOPSIS法对分类品质性状和综合品质性状进行比较评价。【结果】（1）果面颜色a值、咀嚼性、维生素C含量、总酸含量和糖酸比5项指标不同产区间差异显著。（2）果面要素a值西南产区极显著高于环渤海湾产区,显著高于黄河故道产区;咀嚼性西南产区极显著高于黄土高原产区,显著高于黄河故道产区和环渤海湾产区;维生素C含量西南产区显著高于黄土高原产区和黄河故道产区;可溶性固形物含量黄土高原产区显著高于环渤海湾产区;总糖含量西南产区极显著低于黄河故道产区;总酸含量黄河故道产区显著低于环渤海湾产区。（3）西南产区外观品质性状和质地品质性状最优,黄河故道产区营养品质性状最优;综合得分西南产区25.804、黄土高原产区25.662、黄河故道产区25.541、环渤海湾产区20.865。【结论】不同产区华硕品质各有特点,综合评价西南产区最优、黄土高原产区其次、黄河故道产区和环渤海湾产区位列第三和第四,西南产区和黄土高原产...     

陇东苹果产区苹果园经济效益调查分析

随着苹果产业的发展,果树的栽培技术已渐趋成熟,并被广泛应用.但由于果农的经营意识、专业技术水平、文化程度、年龄、对新事物的接受程度等方面的差别,导致果园的经济效益千差万别.通过调查发现,果园的经济效益不完全取决于栽培技术本身,而与技术的使用者以及投资结构有很大的关系.     

通过花期霜冻灾害分析确定陕西苹果产区

据《果树学报）2008年第5期报道 陕西省经济作物气象服务台和陕西省气象局的研究人员,利用陕西省关中、陕北47个县（区）气象资料及6个苹果物候气象观测站资料,采用线性倾向估计方法研究了苹果产区冬季气温变化趋势;分析了陕西省果业北扩主要限制因素——花期冻害在陕西省苹果产区的发生频率,依据陕西省苹果产区的花期冻害风险,以县为单位按等级绘制了陕西省苹果花期冻害风险区划,     

云南省番茄莴苣褪绿病毒分子检测及遗传进化分析

采集了77份云南省疑似感染莴苣褪绿病毒(lettuce chlorosis virus,LCV)的番茄样本,采用特异性反转录PCR扩增LCV次要外壳蛋白基因(minor coat protein,CPm)近全长序列,常规Sanger测序法测定相应片段序列,并对其进行遗传进化分析.结果 表明,LCV特异性反转录PCR扩增...     

新疆野苹果资源遗传多样性SSR分析

采用SSR标记技术对新疆野苹果7个天然居群180份样品进行了遗传多样性分析,旨在为新疆苹果的杂交育种及优良品种/品系的选育提供理论依据。13对SSR引物共扩增出119条多态性条带,各居群内的多态性位点比率为79.84%~92.25%;居群水平上新疆野苹果的遗传多样性变化趋势基本一致,其中新源居群的有效等位基因数(Ne)、Nei's基因多样性(H)和Shannon信息指数(I)在7个居群中最大;种级水平上的Shannon信息指数(I)为0.551 6,居群内为0.468 9;新疆野苹果居群的变异主要存在于居群内部,居群间和居群内遗传多样性分别为15%和85%,说明新疆野苹果居群的变异主要存在于居群内部。     

苹果属植物种质多样性的SLAF-seq分析

利用简化基因组测序技术—特异性位点扩增片段测序技术(Specific-locus amplified fragment sequencing,SLAF-seq)对509份苹果属植物种质进行测序,获得586 454个SLAF标签,其中多态性SLAF标签463 612个;经过序列比对,根据完整度> 0.94、次要等位基因频率(MAF)> 0.05,过滤筛选得到46460个多态性单核苷酸(SNP)位点;基于这些SNP位点构建苹果属植物不同种的系统发生树并分析主成分。结果表明,通过SLAF-seq技术能够在全基因组范围内快速开发高通量的SNP标记,并直接用于苹果属植物种质资源遗传多样性研究中。34种509份苹果属植物的多样性水平较高(H_e=0.318,I=0.488,A_e=1.520),在多于1份试材的种群中,变叶海棠的遗传多样性水平最高,中国苹果的遗传多样性水平最低。综合聚类分析和主成分分析结果表明,供试苹果属植物分为5个基本的类群,Ⅰ山荆子类群,Ⅱ苹果属植物野生种类群,Ⅲ苹果栽培品种类群,Ⅳ以中国苹果、八棱海棠、花红、楸子和海棠花为主...