漾濞核桃RAPD反应优化体系的建立

以漾濞核桃中的大姚三台核桃为实验材料,通过对影响RAPD扩增结果的主要因子Tag酶、Mg+2、引物、模板DNA、dNTPs等不同的浓度和组合的试验研究,确定了漾濞核桃的最适反应体系和扩增程序,即在25μL反应体系中,0.75 u.L-1Taq DNA聚合酶,3.0 mmol.L-1Mg+2,0.3 mmol.L-1引物,含1.6 mg.L-1模板,2.5 ul 10×Buffer,dNTPs各0.2 mmol.L-1。扩增程序为:94℃预变性300 s,94℃变性40 s,36℃退火60 s,72℃链延伸120 s,45次循环后,72℃延伸600 s。     

漾濞泡核桃ISSR-PCR反应体系的建立和优化

以漾濞泡核桃优株为研究对象,研究其ISSR-PCR反应体系中的5个影响因子(模板DNA浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度)对PCR扩增效果的影响,从而建立起漾濞泡核桃的最佳ISSR-PCR反应体系。结果表明:模板DNA最佳浓度为50 ng/(25μL),Taq聚合酶浓度为0.75U/(25μL),引物浓度为0.7mmol/L,dNTPs浓度为0.20mmol/L,Mg2+浓度为2.0mmol/L,利用该最佳体系对试验中所选取的样本进行扩增反应。建立了适宜于漾濞泡核桃的ISSR-PCR扩增的最佳体系,该体系的建立为利用ISSR分子标记技术对漾濞泡核桃进行种质资源研究奠定了基础。     

漾濞核桃低产原因分析及其对策

调查分析结果:影响漾濞县核桃产量的因素主要有品种、自然环境条件和经营管理3个方面,漾濞县在核桃的生产管理上还习惯于采用传统模式,重栽轻管,忽视了集约化经营、规范化种植、科学化管理。针对低产的原因,提出了相应的土壤管理、树体管理、高接换优及疏雄等提高核桃产量的措施。     

红河地区引种漾濞核桃初报

本文通过漾濞核桃近１０年的多点引种栽培，对幼树生长、物侯、结实、果实品质、病虫害等的观测分析，揭示了漾濞核桃在红河州的生态适应性，为组织规模引种提供了科学依据。     

漾濞核桃栽培

<正>大理漾濞核桃是北亚热带树种,耐湿热,不耐干冷,主要分布于云南、贵州、四川等省份,海拔在1200～2900米之间的山地区域,以海拔在1400～2200米地带生长发育较好。云南省广南县大部分区域适宜发展大理漾濞核桃,县委、县政府     

墨兰ISSR-PCR反应体系建立及优化

为建立墨兰的ISSR-PCR反应体系,采用正交试验分析了5个因素（Tag酶浓度、Mg2＋浓度、模板DNA浓度、引物浓度、dNTP浓度）在4个水平上对 ISSR -PCR反应的影响。结果表明：Tag 酶浓度为1.6U/25μL、Mg2＋浓度为2.4mmol/L、dNTP浓度0.96 mmol/L、Primer浓度为0.64μmol/L、DNA 浓度3.2ng/25μL是墨兰ISSR-PCR最优反应体系。     

造林密度对漾濞核桃产量的影响研究

分别在漾濞、永平和云龙3个县各选择3个试验地点,分别不同造林密度和不同产期（计81块样地）进行造林密度对漾濞核桃产量的影响研究．结果表明,漾濞核桃在初果期的产量与造林密度呈正相关关系,盛果期和衰果期呈负相关关系,初果期的造林密度以20株／667m^2为宜。盛果期和衰果期以10株／667m^2的造林密度可较好地实现造林培育目标．     

漾濞核桃铸就王牌产业

10月16日,由大理州人民政府、云南省林业厅主办,漾濞县人民政府、大理州林业局承办的中国·大理漾濞核桃推介会在北京举行。此次推介会是中国·大理漾濞核桃节系列活动之一,现场推介招商引资项目9个,签约5个,协议资金共3．9亿元。     

栽植密度对漾濞核桃育苗质量的影响

漾濞核桃(Junglans sigillata Dode)的栽植密度与育苗质量有很重要关系。通过对多种漾濞核桃栽植密度试验结果分析,在漾濞核桃嫁接育苗时,Ⅰ级苗出圃率随着株距的加大而增加,两者呈正相关关系,最佳株行距为20cm×20cm。     

漾濞核桃病害病原菌的分离及药物抑菌试验

从漾濞核桃染病的枝、叶上分离得到17个纯培养菌株,其中YB001和YB009被鉴定为拟盘多毛孢属(Pestalotiotiopsistey)的真菌,YB005为单端孢属(Trichthecium)的真菌,YB018为枝孢属(C ladosporium)的真菌。室内药剂抑菌实验的结果表明:甲基托布津对YB001和YB009菌的抑制效果很好,茂生对YB016和YB017菌的抑制效果很好。     

萱草属植物ISSR-PCR反应体系的优化

以萱草属的3种植物为材料,对影响ISSR-PCR扩增效果的因素Taq酶用量、Mg2 浓度、dNTP用量、引物用量、模板DNA浓度以及退火温度等指标进行单因子筛选和优化,建立了适合萱草属植物ISSR-PCR分析的最佳PCR反应体系:20μL反应体系中Taq酶0.6U、Mg2 1.8 mmol/L、1×Buffer 2 μL、dNTP0.2 mmol/L、引物0.6mmol/L、DNA模板10 ng/μL.扩增程序为94℃预变性5 min,94℃变性40 s,52℃退火45 s,72℃延伸1.50 min,共39个循环;72℃完全延伸5 min,4℃保持.该反应体系及扩增程序扩增谱带清晰,产物量多,为利用ISSR-PCR分子标记研究萱草属植物的遗传多样性提供标准反应条件.     

狗牙根ISSR—PCR反应体系的建立与优化

以改良的CTAB法提取的狗牙根叶片DNA为模板,采用单因素多水平方法对狗牙根ISSR反应体系进行构建和优化,系统分析Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物和buffer这6种1SSR反应成分的浓度对扩增结果的影响,结果表明:20.0μL PCR反应体积中,20.0 ng模板DNA,0.4 μmol/L引物,0.5mmol/L Mg2+,0.05mmol/L dNTPs,0.2U TaqDNA聚合酶,2.0 μL 10×buffer.反应程序为;94℃预变性5 min;94℃变性45 s,55 C退火45 s,72℃延伸1.5 min,35个循环;再72℃延伸7 min,4℃保温.     

细叶桉ISSR-PCR体系的建立与优化

细叶桉是我国近年来成功引种的耐寒桉树种类之一,但其种源关系难以区分,不利于后续新品种的培育.为给后续的分子水平上鉴定细叶桉种源关系打基础,以细叶桉叶片基因组DNA为材料.分析了能够影响细叶桉ISSR-PCR的主要参数如模板DNA、引物浓度、dNTPs、Mg2+浓度、TaqDNA聚合酶用量、退火温度等6个因素对扩增结果的影响情况,建立了适用于细叶桉ISSR-PCR的反应体系和扩增条件.     

紫椴ISSR-PCR反应体系的建立与优化

分别采用单因子试验和正交设计2种方法对影响紫椴ISSR-PCR反应体系的4个因素(Taq酶,Mg2 ,dNTP,引物)在3个水平上进行优化试验.正交设计选用L9(34)方案,采用直观分析法获得影响因素最佳反应水平.单因子试验分别研究各因素对ISSR-PCR反应的影响情况,找出最佳反应水平.2种方法所得影响因素最佳水平存在差异,通过综合比较与分析,最终建立了紫椴ISSR-PCR的最佳反应体系:在20μL的反应体系中,Taq酶1.0U,Mg2 2.0 mmol·L-1,dNTP 0.20 mmol·L-1,引物0.4μmol·L-1,1×PCR buffer,30 ng模板DNA.在此基础上筛选出14个扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度.     

红花石蒜 ISSR-PCR反应体系的建立

以红花石蒜叶片基因组DNA为模板,分析了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2 的浓度及Taq DNA聚合酶的用量对ISSR-PCR扩增结果的影响.建立了石蒜ISSR分析最优化的反应体系及应用程序:即25 μL反应体系中,有20 ng模板DNA、0.5 μmol·L-1随机引物、150 μmol·L-1 dNTPs、2.0 mmol·L-1 Mg2 、1.0 U Taq DNA聚合酶.反应程序为:94 ℃预变性5 min;然后45个循环:每个循环94 ℃变性45 s,55 ℃退火60 s,72 ℃延伸2 min;循环结束后72 ℃延伸7 min.     

鹅掌楸ISSR-PCR反应体系的建立及优化

为建立鹅掌楸简单序列重复区间扩增ISSR的PCR优化反应体系,以鹅掌楸叶片基因组DNA为材料,系统地测试了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2+浓度、TaqDNA聚合酶用量及退火温度对ISSR-PCR反应体系的影响。结果表明:优化的PCR反应体系为:20μL总体系中,含30 ng模板DNA,0.3μmol.L-1随机引物,0.2 mmol.L-1dNTPs,1.4 mmol.L-1Mg2+,0.8 UTaqDNA聚合酶;最佳退火温度为60℃;PCR反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,60℃退火45 s,72℃延伸2 min;45个循环;72℃再延伸7 min。     

贯叶金丝桃ISSR反应体系的建立与优化

以药用植物贯叶金丝桃为研究对象,对其ISSR—PCR反应体系中模板DNA用量、Mg2＋浓度、dNTP浓度、Taq酶含量及退火温度等因素进行了梯度试验,得到最佳ISSR—PCR反应体系,并初步筛选出13条条带清晰、多态性高、重复性好的ISSR引物,为贯叶金丝桃遗传多样性及种质资源鉴定等方面的研究奠定基础。     

南酸枣ISSR-PCR反应体系的建立及优化

以南酸枣叶片基因组DNA为模板,采用单因子实验方法对影响ISSR反应体系的dNTP、Mg2+、引物浓度、模板DNA、Taq酶等5个因子进行优化,结果表明,在20 L ISSR反应体系中,各反应物的最适含量为：2.5 mmol/L Mg2+、0.2 mmol/L dNTP、0.25～0.5 mol/L引物、20 ng DNA和0.5 U Taq聚合酶。利用该优化体系扩增85条ISSR引物,有65条有扩增产物,38条具有多态性,并且利用842引物扩增不同南酸枣DNA模板,扩增的目的条带清晰、多态性好、稳定性强,可以用于后期的南酸枣种质资源鉴定及遗传多样性研究。     

台湾水青冈ISSR-PCR体系的优化

分析了ISSR-PCR体系中Mg2+、dNTP和BSA浓度,以及模板DNA、引物和TaqDNA聚合酶用量等6个因素对反应结果的影响,建立了适合于台湾水青冈ISSR-PCR扩增的反应体系:10μL PCR反应液中,含10 ng DNA,1.5 mmol.L-1Mg2+,0.125 mmol.L-14×dNTP,1×TaqDNA聚合酶配套缓冲液(10 mmol.L-1Tris-HCl,pH值9.0,50 mmol.L-1KCl,0.1%Triton X-100),0.6 UTaqDNA聚合酶,2 mg.mL-1BSA和3pmol引物。应用优化的ISSR-PCR体系从100个ISSR引物中筛选出12个稳定性好,重复性高的引物,对22株台湾水青冈个体的DNA进行扩增,结果表明优化的ISSR-PCR体系完全适合于台湾水青冈的ISSR分析。