8个小麦条锈菌生理小种产孢相关基因PsCon1克隆及表达分析

为研究基因Pscon1在不同小种中核苷酸序列及相对表达量差异,以小麦条锈菌(Puccinia strii formis f.sp.tritici)基因组DNA为模板,在小麦条锈菌8个生理小种中分别克隆产孢相关基因Pscon1,并对其核苷酸和氨基酸序列进行比对及相对表达量分析.结果表明:在8个小种中分别克隆到条锈菌产孢相关基因Pscon1,基因大小为531 bp,由3个外显子和2个内含子构成,开放阅读框长252 bp,不同小种基因Pscon1核苷酸序列只在44,65,331,465,495和510 bp位点处发生突变,均未引起氨基酸序列变化,且不同生理小种Pscon1在接种‘铭贤169' 12 h后相对表达量有差异,水源11-3最高,最低的是Hybrid46-8.推测基因Pscon1在小麦条锈菌不同生理小种产孢过程中相对表达量有差异,这将为进一步研究产孢量差异因素提供参考.     

水貂自咬症病因的分子遗传研究

自咬症是笼养毛皮动物水貂、狐狸的常见病,严重影响着毛皮质量,然而其发病原因一直未得以明确。作者初步从分子遗传学角度探讨了水貂自咬症的发病原因。采用随机扩增多态DNA（RAPD）技术分别对正常水貂组和自咬水貂组进行了遗传基因差异上的比对分析。从100个随机引物中筛选出40个重复性好的多态引物,提取水貂健康与患病群体DNA各40个,随机抽取10个构建基因池,进行RAPD标记研究。挑选出在健康组与患病组差异明显的S103引物（序列为AGACGTCCAC）并对其进行克隆,将克隆结果交上海生工生物有限公司测序。引物S103扩增出健康与患病水貂的特异条带,仅在患病水貂组中发现750 bp左右的DNA片段,而在健康组中发现600 bp左右的特异片段。此两条特异片段可初步作为区分健康和患病水貂群体的分子遗传标记,为进一步对水貂自咬症的深入研究奠定了基础。     

三个蜂种的RAPD标记比较分析

利用4个蜜蜂RAPD标记对高加索蜂、卡尼鄂拉蜂和平湖意蜂进行了研究.其中W23(5'-GTACCGCCCG-3')和p8(5′-CCCACCCTTG-3')两条引物扩增出的条带多态性很明显.在W23引物扩增条带中,350bp、580bp和1060bp三个条带为平湖意蜂所特有,550bp条带为卡尼鄂拉蜂所特有.在P8引物扩增条带中,364bp和1256bp,尤其是364bp条带仅出现在卡尼鄂拉蜂和高加索蜂,并且比率很高,可以作为蜂蜜高产的特异性条带.而784bp和1200bp分别是卡尼鄂拉蜂和高加索蜂的特异性条带.     

OPAY02-C型标记与新扬州鸡早期增重关系的研究

随机选择新扬州鸡5个父系半同胞家系后代78只,用于分析RAPD标记与新扬州鸡早期增重的关系。RAPD标记是在21个随机引物中,经反复试验选出的稳定的,具有多态性的3个引物OPAY02,OPAY13,OPAY17扩增产物,统计分析表明:OPAY02引物扩增的1660bp和2326bp两条多态性条带的4种组合中,OPAY02-C型标记具有显著的增效作用(P<0.015),可作为标记进行辅助选择。     

大足黑山羊地方类群多胎性AFLP标记研究

利用分子标记技术AFLP标记,从15对引物中选取扩增效果较好的11对引物,对11只极端多胎个体和6只极端非多胎个体DNA进行扩增,共扩增出766个条带,平均多态率5.36%,其中引物E42/T48中1条294bp的条带在极端非多胎个体中均出现,而在极端多胎个体中只在1个个体中扩增出来,表现出极显著的差异。对差异片段回收、克隆、测序,设计4对引物,对基因组扩增后发现,产生差异片段的原因是片段内部有较长序列的插入或丢失,产生310bp和265bp2个等位基因,其中310bp纯合等位基因的初产羔羊数显著高于310bp和265bp杂合等位基因的初产羔羊数,在大足黑山羊地方类群内可能作为多胎性状分子标记。     

两个SCAR标记与京海Ⅰ号黄鸡体重的相关性研究

通过对两个RAPD条带(1660条带和2326条带)的克隆、测序,根据条带序列设计两对SCAR引物,对京海Ⅰ号黄鸡基因组进行扩增。结果表明:S1(1660条带)与S2(2326条带)标记在京海Ⅰ号黄鸡中出现的频率分别为40%和48%。无S1标记个体12周龄、18周龄和43周龄体重显著高于有S1标记个体,有S2标记个体在4周龄、12周龄、18周龄和43周龄体重显著高于无S2标记个体。     

鸡柔嫩艾美耳球虫不同抗药性虫株的种内多态性研究

应用RAPD技术进行柔嫩艾美耳球虫4个单一抗药性虫株与1个敏感株的基因组DNA多态性分析，发现4个抗药性虫株及敏感株之间的相似值均大于99%；OPAO3引物对抗盐霉素株扩增出一条约500bp的特异条带，OPH02引物对抗克球粉株和抗盐霉素株均扩增出了约1kb的第三条主带，这些特异条带的出现很可能与球虫抗药性基因有关，有可能用于抗药性虫株的诊断与鉴定。     

以随机扩增多态性DNA(RAPD)技术筛选意大利蜜蜂重要农艺性状遗传标记

为了获得意大利蜜蜂重要农艺性状的分子遗传标记 ,本研究以 30种RAPD随机引物对平湖浆蜂、美意、澳意、苏意等 4个在产浆、采蜜和抗病性上存在较大差异的意蜂品系的基因组DNA进行RAPD_PCR扩增筛选。试验结果显示 ,随机引物W 1 8(5′_CGGACGGCGG_3′)和W2 3(5′_GTACCGCCCG_3′)的扩增图谱呈多态性。其中 ,在引物W 1 8所扩增出的 9条片断中 ,2 35 2bp和 36 4bp条带为美意所特有 ,表明可将之用于鉴别美意 ;2 0 92bp条带仅出现于蜂蜜高产的美意和澳意中 ,意味着该条带为一个蜂蜜高产性状的遗传标记 ;而 6 32bp条带在王浆高产品系平湖浆蜂中出现的频率 (0 91 )显著高于 (P <0 0 1 )美意(0 0 4 )、澳意 (0 0 2 )和苏意 (0 0 0 ) ,说明 6 32bp条带可能为王浆高产性状的一个遗传标记。在W2 3引物扩增条带中 ,6 5 1bp条带为澳意所特有 ,可用于澳意鉴别     

中华拟德氏吸虫与日本血吸虫的RAPD遗传标志分析

中华拟德氏吸虫(Paradeontacylix sinensis)是冷血吸虫,日本血吸虫(Schistosoma japonicum)是温血吸虫的重要代表。分别对中华拟德氏吸虫和日本血吸虫成虫的全基因组进行随机扩增多态性研究,筛选出31种随机引物,对2种成虫扩增得到189条多态性基因片断,S6、S46对中华拟德氏吸虫全基因组有特异性,分别扩增出一条大小约399bp和695bp的特异性强条带;引物S2对日本血吸虫基因组有特异性,只扩增1条1670bp的特异性强条带。多数引物对中华拟德氏吸虫和日本血吸虫成虫全基因组扩增出大小相似的条带,推测中华拟德氏吸虫与日本血吸虫的亲缘关系密切。     

与多花黑麦草株高性状相关的RAPD标记分析

用4个多花黑麦草品种进行株高性状相关的RAPD标记分析。结果表明:用基因组DNA作为RAPD检测多花黑麦草株高性状位点的方法是可行的。从110条引物中筛选出23条引物对4个多花黑麦草品种的基因组DNA进行扩增,共扩增出174条带,其中166条带为多态性带,标记率为95.4%;检测出4个多花黑麦草品种基因组DNA的6个株高性状的标记(分布在5条引物中)。     

血清1、2、4、5型鸭疫里默氏杆菌的RAPD

以37℃摇震培养舜口烛缸厌氧培养，从12种培养基中选择出鸭疫里默氏杆茼的最优培养基和培养条件。以血清1、2、4、5型的鸭疫里默氏杆菌代表株A1、A2、A3、A4为研究对象，培养增殖后分别提取基因组DNA，利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术，对其基因组进行了DNA分析。从20条随机引物中筛选出8条随机引物，这8条引物对4种血清型的鸭疫里默氏杆菌的扩增图谱有较好的多态性，可作为分子标记鉴别4种不同血清型的鸭疫里默氏杆菌，同时还筛选出能在4个血清型的鸭疫里默氏杆菌代表株均出现相同的特征条带，而对照茼大肠杆菌、沙门氏茼无该条带的随机引物，从而为鸭疫里默氏杆菌病的分子诊断打下了一定基础。     

Use of RAPD-PCR for genetic analysis of Nicobari fowl of Andamans

1. The present study was conducted to estimate genetic relatedness among Nicobari fowls (Brown, Black and White) and an exotic bird (White Leghorn) using random amplified polymorphic DNA (RAPD) polymorphism. 2. A total of 25 decamer primers were screened among all the breeds of which 24 primers amplified the genomic DNA, generating 2000 to 200 bp bands. Ten primers generated reproducible and distinct RAPD profiles and were used for further analysis. 3. A total of 94 bands were amplified and 30 polymorphic bands (32%) were produced. The number of polymorphic loci ranged from 1 to 5 with an average of 3.0. 4. Among the native breeds Brown Nicobari showed higher genetic similarity (0.85) than Black Nicobari (0.80) and White Nicobari fowl (0.82). 5. Brown Nicobari showed high genetic similarity with Black Nicobari (0.87 +/- 0.029); least similarity was between White Nicobari and White Leghorn (0.77 +/- 0.028). 6. The RAPD profile of all Nicobari fowls on amplification with the primers PBG5 and PBA12 showed specific bands of molecular size 1050 and 785 bp, respectively. 7. The native breeds showed the least genetic distance with each other while White Leghorn appeared to be most distant from the native breeds.     

应用随机扩增多态性进行山羊致病性大肠杆菌的分子多态性分析

为了解山羊致病性大肠杆菌广西分离株的分子多态性,应用随机扩增多态性方法(RAPD)对山羊致病性大肠杆菌进行分型研究.从8条随机引物中筛选出4条能在10株大肠杆菌中具有较好多态性扩增的随机引物,4条随机引物共扩增出18条DNA片段,10个菌株无共有带谱,显示出良好的扩增多态性.菌株Nx31与Nx32曾被认为是同一菌株的两次分离,但是在RAPD分析中,两株细菌的带谱存在明显的差别,表明RAPD比传统的血清学分型具有更高的分辨性.     

鲁梅克斯k-1杂交酸模及野生酸模遗传多态性分析

利用RAPD技术对鲁梅克斯k-1杂交酸模的3个繁育世代和野生酸模进行遗传多态性分析,结果表明:3个世代之间不存在多态性位点差异,3个世代是稳定遗传的;不同种和不同地点的同一个野生种之间存在着多态性位点差异;在合格种的12个单株间具有明显的遗传多态性;采用混合取样可消除品种内的个体遗传差异性,较好地代表群体遗传特征;从0PA组选出7个能扩增出清晰且稳定带谱的引物,7个引物共检测出4个位点,DNA片段的大小在300～200bp之间.     

高加索三叶草、白三叶及其杂种F1代的RAPD分析

以高加索三叶草为母本,白三叶为父本,获得杂种F1代植株.利用RAPD技术对亲本及其F1的遗传差异性进行研究,从50个随机引物中筛选出14个适宜引物,共扩增出181个RAPD位点,多态性位点百分率为74.0％,每个引物扩增的条带数平均为3.8～4.8,DNA片段长度在100～2000bp之间.根据扩增图谱计算表明,F1代与白三叶的遗传相似系数为0.3465,与高加索三叶草的遗传相似系数为0.5842,说明F1代与母本的遗传关系更近或者说F1代表达了更多源于母本的遗传信息.     

中国美利奴羊(新疆型)四个品系的RAPD分子标记研究

选用120条随机引物分别对中国美利奴羊（新疆型）毛质好、体格大、毛密和超细4个品系的混合DNA进行RAPD扩增，共筛选出3条特异性多态引物，占产生扩增产物引物总数的3，0％，说明各品系问的遗传变异程度较小。用其中的特异性引物OPF15分别对4个品系的部分个体样品进行分析，同样表现出多态性，并出现混合DNA样品RAPD分析结果中未出现的谱带。其中超细型有94．12％的个体（16／17）都产生一条特异的相同谱带，大小约为826bp，而其他3个品系混合DNA及个体的扩增产物均未获得此大小扩增片段，由此，可将该扩增片段作为中国美利奴羊（新疆型）超细型的一个特征性RAPD标记。     

河南省4种地方品系鸡的RAPD分析

应用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD) 技术分析河南省4个地方鸡的品系,固始鸡快羽G_K系、固始鸡慢羽G_M系、矮小型绿壳蛋鸡、黄麻羽丝毛乌骨鸡的遗传变异。用186个随机引物对4个鸡种基因组DNA池扩增筛选,40个引物产生多态性。此40个引物经重新优化反应体系后,对120个个体的基因组DNA 进行RAPD分析。40个引物共产生387种扩增片段,扩增产物片段的长度大小在100～2220 bp范围内。利用电泳分析数据分别计算4个品系群体之间的遗传相似系数和遗传距离指数,结果4个鸡种的亲缘关系与它们的引种情况基本一致。同时也证明了RAPD技术可以作为分子标记,很好地检测鸡种群内的遗传变异及区分不同鸡品系。     

RAPD技术对地方鸡种群体遗传结构的分析

利用ＲＡＰＤ技术对４个地方鸡种和１个引进鸡种的群体遗传结构进行分析，通过筛选的５个随机引物ＯＰＨ－０２、ＯＰＨ－０５、ＯＰＨ－１３、ＯＰＨ－１６、ＯＰＧ－０７对５个鸡种的池ＤＮＡ进行多态性研究，结果表明：５个引物共产生条带６１个，扩增产物片段的长度一般从１５０ｂｐ－４ｋｂ。     

Development of Y‐chromosome‐Specific SCAR Markers Conserved in Taurine,Zebu and Bubaline Cattle

Sex pre‐selection of bovine offsprings has commercial relevance for cattle breeders and several methods have been used for embryo sex determination. Polymerase chain reaction (PCR) has proven to be a reliable procedure for accomplishing embryo sexing. To date, most of the PCR‐specific primers are derived from the few single‐copy Y‐chromosome‐specific gene sequences already identified in bovines. Their detection demands higher amounts of embryonic genomic material or a nested amplification reaction. In order to circumvent this, limitation we searched for new male‐specific sequences potentially useful in embryo sexing using random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis. Random amplified polymorphic DNA (RAPD) assay reproducibility problems can be overcome by its conversion into Sequence Characterized Amplified Region (SCAR) markers. In this work, we describe the identification of two bovine male‐specific markers (OPC16₃₂₃ and OPF10₁₁₆₈) by means of RAPD. These markers were successfully converted into SCARs (OPC16₇₂₆ and OPF10₉₈₄) using two pairs of specific primers.Furthermore, inverse PCR (iPCR) methodology was successfully applied to elongate OPC16₃₂₃ marker in 159% (from 323 to 837 bp). Both markers are shown to be highly conserved (similarity ≥95%) among bovine zebu and taurine cattle; OPC16₃₂₃ is also highly similar to a bubaline Y‐chromosome‐specific sequence. The primers derived from the two Y‐chromosome‐specific conserved sequences described in this article showed 100% accuracy when used for identifying male and female bovine genomic DNA, thereby proving their potential usefulness for bovine embryo sexing.     

家蚕伴性赤蚁基因(sch)连锁的RAPD标记及相关分析

家蚕伴性赤蚁基因(sch)温敏性的发现为雄蚕品种选育研究开辟了新的途径。为获得sch基因的DNA序列,采用RAPD技术,对sch的近等位基因系进行随机扩增,得到一条能稳定扩增、与sch基因连锁的特异片段,并对该序列进行了克隆、测序与分析。结果表明,该序列是家蚕固醇载体蛋白-x(sterol carrier protein x,SCPx)基因的一部分,根据测序结果命名为OPD02-759。设计特异引物进行PCR扩增和测序,获得了sch蚕SCPx基因的酮酯酰CoA硫解酶结构域(3-ketoacyl-CoA thiolase)的完整序列。序列长1107 bp,编码369 aa,分子量为39.3 kD,与正常家蚕该结构域有15个核苷酸的差异,翻译后有5个氨基酸的差异,且其中2个发生在保守区域,此突变正好是RAPD扩增时出现特异带的随机引物结合位点。