紫花苜蓿作为生物反应器研制基因工程疫苗的进展

紫花苜蓿作为生物反应器研制基因工程疫苗已成为目前研究的热点之一。基因工程疫苗较传统疫苗更加廉价、高效、安全和稳定。随着生物技术的发展完善,植物生物反应器将会成为生产疫苗的有效途径。文章综述了用紫花苜蓿作为生物反应器研制基因工程疫苗的基本原理与步骤、研究进展、优点与问题及其应用前景。     

利用家蚕BmNPV生物反应器规模化生产基因工程产品的关键技术研究

以口蹄疫抗原组合基因（P1—2A3C）表达的蛋白为标的物,研究了目的蛋白在规模化生产中的表达时相、蚕蛹不同冷藏时间对目的蛋白的表达效率以及高效率蚕蛹注射接种设备;明确了蚕蛹接种后108～120h收集血淋巴,可获得最高的蛋白表达量,蚕蛹冷藏于4℃下10d以内接种对蛋白表达量影响小;所研究发明的蚕蛹集团注射机将注射器的消毒、清洗、加药、蚕蛹接种在机械上逐一完成,工作效率是手工注射的4倍以上,目的蛋白的表达量与手工注射相近,减轻了劳动强度,降低了生产成本,为利用蚕蛹作为生物反应器进行规模化生产基因工程产品奠定了基础。     

转基因家蚕生物反应器研究进展

综述了近年来国内外转基因家蚕生物反应器研究进展,分析探讨了现阶段利用转基因家蚕生物反应器表达外源基因研究中存在的问题及发展方向。     

家蚕杆状病毒(BmNPV)生物反应器规模化生产技术

将现有成熟的栽桑养蚕技术与尖端的生物工程技术嫁接、融合一体的"家蚕生物反应器"是新兴的高科技生物产业,为古老的养蚕业注入了新的活力.饲育生物反应器蚕的附加值远远高于丝茧育.经过2002年较大规模的生产实践,提出有关饲育家蚕杆状病毒生物反应器生产技术的初步意见.     

生物反应器培养动物细胞在病毒疫苗生产中的应用

改进病毒规模化生产效率,优化疫苗生产工艺是病毒疫苗研制的关键环节。目前,国内动物细胞制备病毒疫苗的操作方式逐渐从转瓶培养向生物反应器培养转变。生物反应器培养动物细胞的常见方法有悬浮培养、微载体培养、片状载体培养等。生物反应器培养动物细胞有很多优势,可扩大病毒产量,降低成本,易于获取稳定性强、免疫原性高的病毒,有助于机械化控制。生物反应器有潮汐式生物反应器、一次性摇动式生物反应器、一次性填充床生物反应器、微小型生物反应器、新型固定床生物反应器,不同的反应器有不同的特点。对生物反应器培养动物细胞技术在病毒疫苗生产应用领域的研究进行综述,为促进生物反应器的开发与研究提供参考。     

家蚕生物反应器表达hGM-CSF产业化若干问题的研究

报道了家蚕杆状病毒表达hGM CSF产业化过程中几个问题的研究结果。鲜茧在 4～ 7℃保存可显著抑制蚕蛹的发育 ,但随冷藏时间的延长 ,死笼率明显上升 ,接种成功率显著下降 ;接种蚕蛹血淋巴中hGM CSF的活性与鲜茧保存时间有明显的负相关关系 ;生产工艺不同 ,蚕蛹冻干粉中hGM CSF的活性有明显差异 ;60 Co辐照可使冻干蚕蛹粉中微生物的数量减少 ,但同时蚕蛹中hGM CSF的活性也随辐照剂量的增加而有所降低 ,hGM CSF蚕蛹粉经 30 0 0Gyγ射线辐照后 ,口服仍使小鼠白细胞明显上升。     

植物基因工程疫苗在畜牧生产上的应用

植物基因工程疫苗是利用植物作为生物反应器来生产动物疫苗的技术。本文就植物基因工程疫苗研究概况、存在问题及应用前景作一简要综述。     

利用转基因家蚕丝腺生物反应器生产重组蛋白的应用前景

家蚕丝腺拥有较强合成丝蛋白的能力,通过利用这一能力,使其能够大量生产有价值的蛋白,人们开始引入转基因家蚕,使它能够在丝腺中合成重组蛋白并分泌到蚕茧中。获得的重组蛋白可在生物学、生物技术,和药学领域中得到广泛应用。我们通过控制合成蛋白在丝腺中的定位,在后部丝腺(PSG)中表达重组蛋白使其定位在不能溶解的丝素中,在中部丝腺(MSG)中表达则定位于亲水外层的丝胶层中。本文主要讨论将转基因家蚕丝腺生物反应器作为优良工具,应用于大量生产药用蛋白和在工业化水平生产相关重组蛋白的可能性,以及生产重组蛋白过程中所面临的挑战和未来的应用前景。     

纳豆激酶基因在家蚕生物反应器中的表达

纳豆由枯草杆菌(Bacillussubtilis)或纳豆菌(Bacil-lusnatto)发酵大豆而成。1987年,日本学者须见洋行等首次从传统食品纳豆中发现了一种具有溶栓活性的酶制剂,并命名为纳豆激酶(nattokinase,NK)。纳豆激酶具有易于提取.溶栓效果好.无毒副作用,体内半衰期长,成本低,可降压、杀菌和抗病毒等优点,因而可能成为新一代的抗栓药物。杆状病毒是一类闭合双链DNA病毒,昆虫杆状病毒表达系统是80年代建立起来的真核表达系统.其表达效率高.具有包括糖基化作用、磷酸化作用等一系列蛋白质翻译加工修饰系统.其表达产物多具有可进行翻译后修饰.具有与天然产品相似的生物活性     

家蚕丝腺生物反应器的研究现状

家蚕丝腺生物反应器在表达外源蛋白方面具有无与伦比的优越性 ,特别是在生物制药方面有着极为广泛的前景。论述了近几年内国内外学者此方面的研究     

昆虫(蚕)信息激素(I)

概述了昆虫信息激素的种类。着重就桑蚕信息激素(桑蚕醇、桑蚕醛)的结构和理化性质，信息激素的感受机制，电生理反应和嗅觉感受的学说，以及对桑蚕信息激素的扩散和雄蛾最终找到雌蛾的机制作了论述。     

化学诱变的BmNPV对家蚕细胞和虫体感染性的初步研究

前文报道化学诱变剂对家蚕核型多角体病毒 (BmNPV)多角体形态有明显的诱变作用 ,诱变的BmNPV基因组对某些限制性内切酶的酶切电泳谱发生变化。本文研究进一步表明 :诱变BmNPV感染家蚕Bm N细胞的病变特征与对照相比没有明显不同 ,但形成不定形超大多角体的空斑时间延迟2～ 3d;诱变BmNPV感染家蚕幼虫后 ,病蚕体内各组织病变损害的感染程度 (易感性 )与对照基本相同。研究结果提示 ,诱变的BmNPV对家蚕培养细胞、虫体组织的感染性无显著变化     

不同饲料饲养对家蚕抗核型多角体病毒病的能力以及体内3种代谢酶活性的影响

为探讨饲料与家蚕核型多角体病发生的关系及家蚕核型多角体病发生与蚕体内代谢酶活性的关系,研究比较了用桑叶、柘叶饲养的家蚕对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)的抵抗性以及与抗性相关的羧酸酯酶、碱性磷酸酯酶和乙酰胆碱酯酶活性变化。结果表明:BmNPV对柘叶饲养家蚕的感染中量(ID50)和致死中量(LD50)分别为1.319×105PID/头和1.632×105PID/头,与对桑叶饲养家蚕的ID50和LD50相比,仅为1/2和1/4左右,即柘叶饲养家蚕对BmNPV的抵抗力明显降低;不论用柘叶饲养还是用桑叶饲养的家蚕感染BmNPV后,蚕体内的羧酸酯酶活性均大幅度上升,碱性磷酸酯酶与乙酰胆碱酯酶活性均显著下降,且柘叶饲养家蚕感染BmNPV后体内的碱性磷酸酯酶和乙酰胆碱酯酶活性比桑叶饲养家蚕感染BmNPV后的酶活性更低。     

家蚕遗传密码研究

家蚕作为一种模式生物具有宝贵的基因资源,本文利用遗传密码分析软件,对家蚕编码不同蛋白的820余个完全CDS序列、24.8万余个遗传密码子进行了分析,发现家蚕不同蛋白质使用的遗传密码频率有所差异,且不同蛋白质使用遗传密码子的偏好性基本一致。通过对家蚕最终吐出的蚕丝的丝素、丝胶氨基酸含量与蚕丝遗传密码分析的丝素、丝胶氨基酸含量的比对发现,两者不仅有氨基酸种类的差异,而且有氨基酸含量的差异。因此,蚕丝遗传密码分析得出的氨基酸含量可能只是蚕丝蛋白质合成初期的氨基酸水平反映,而家蚕最终吐出的蚕丝蛋白质的氨基酸是通过合成后加工的结果,这提示家蚕丝腺是研究蛋白质合成后加工的极好材料。     

成品卵微粒子孢子检出度的研究

家蚕一代杂交种成品卵微粒子病检验技术,作为成品卵质量检验的备检项目,对防止有毒不合格蚕种流入市场起到了积极作用。但迄今未见到运用该技术进行病卵检出度的相关报道。本试验按照该技术进行了成品卵微粒子孢子检出度的研究。试验结果表明:按该方法操作,样品中微粒子孢子虫数目低于3×103个时,镜检到孢子的概率接近于0;当样品中微粒子虫数目等于或大于1×104个时,镜检到孢子的概率为1。     

“蚕宝康”对桑蚕细菌病防治的研究

研制的桑蚕细菌病防治新药“蚕宝康”其最低抑菌浓度和最低杀菌浓度比氟哌酸低４～８倍,在蚕体内药效持续时间长达１０小时,研究表明,该药对蚕安全无副作用,在低浓度下对蚕细菌病防治也具良好效果,感染时间对防治效果有明显的影响,添药次数与防治效果之间无直接联系,以添药３～４次为宜。     

大豆粉提取物对桑蚕摄食性的影响

大豆粉的醚溶性成分及乙醇提取物中均含有抑制桑蚕摄食的忌避因子,醚溶性成分不还存在对蚕有毒性的物质。为提高桑蚕对人工饲料的摄食性,用９０％￣９５％热乙醇对脱脂大豆粉进行洗脱处理是一条有效的途径。     

家蚕雌蛹冷藏对人工孵化处理蚕种质量的影响

家蚕蛹期冷藏是蚕种生产上普遍使用的方法。苏5×苏6(正反交)和苏菊×明虎(正反交)等江苏省现行蚕品种,羽化前日的雌蛹冷藏对蚕种质量有显著不良影响,主要表现为不受精卵率增加,孵化率和孵化整齐度下降。10℃冷藏的影响程度显著超过5℃冷藏,冷藏4d的影响显著超过冷藏2d。雌蛹冷藏对冷藏浸酸卵的孵化率影响显著大于即时浸酸蚕卵,结果显示应避免冷藏家蚕雌蛹,如无法避免,应该尽量将生产的蚕种作即时浸酸使用。     

家蚕（Bombyxmori）全基因组框架图

我们在此报告了家蚕（Bombyxmori）的基因组序列框架图,它覆盖了所有已知家蚕基因的90．9％。我们估计的基因数是18510,超过黑腹果蝇报道的13379个基因。我们将家蚕基因组与果蝇、蚊子、蜘蛛和蝴蝶等进行了比较分析,揭示了它们在基因组成上同时具有相似性和差异性。     

新疆家蚕种质资源RAPD多态性研究

以家蚕卵为材料。选用重复性较好的12种随机引物，对15份新疆家蚕种质资源材料进行了DNA多态性扩增(RAPD)研究，研究结果表明，新疆家蚕种质资源材料的DNA多态性较为丰富，共获得153个RAPD标记，系统聚类分析表明新疆家蚕种质资源材料的亲缘关系较近、在相似系数0．8的水平下聚为一类，遗传距离最大为0．3985，最小为0．1296。