一种比较实用的氨基酸定量测定方法——茚三酮法

在常用的原料中,氨基酸是一种重要的原料,需要定性和定量检测。除了用国标对常用的二种氨基酸(赖氨酸和蛋氨酸)作定量检测外,经过实践,还可以用另外一种方法对其作定量检测,作为对国标法的补充。1方法原理茚三酮在弱酸(pH=5)的条件下与α-氨基酸共热,即使氨基酸起氧化脱氨产生酮酸,酮酸脱羧成醛,放出CO2,用氢氧化钙吸收CO2,然后用HCl滴定,从而可得出CO2量,然后可以此计算出氨基酸的含量,可作氨基酸的定量检验;酮酸脱羧成醛后,茚三酮本身变为还原茚三酮,后者再与茚三酮和氨反应蓝紫色的物质,可以此作为氨基酸的定性检验。2试剂和溶液2.1…     

狗眼

猪血催肥技术:采集健康(或屠宰)猪新鲜血液,每100毫升加入抗凝剂枸橡酸钠5毫升,保存在2～10℃条件下备用。每隔7天按每千克体重每次输血2毫升,定期定量地输入育肥猪的静脉血管,可以加快猪的生长发育。这一方法对营养条件较差、成为僵猪的架子猪效果尤为显著。刷拭猪体催肥:每天早、晚给育肥猪刷拭猪体(用硬毛刷全身刷拭)1次,每次10～20分钟,在饲养管理条件相同的情况下,猪增重可提高7.2%～11.4%。赖氨酸催肥:在每吨饲料中加入1～3千克的赖氨酸喂猪,可使猪的日增重提高15%～25%,相对减少饲料消耗15%～20%。蚯蚓粉催肥:一般体重25千克以下的肉…     

核酸适配体比色法检测恩诺沙星

(目的)研究检测恩诺沙星的胶体金核酸适配体比色法,(方法)将恩诺沙星核酸适配体与胶体金结合后形成胶体金适配体复合物,然后加入恩诺沙星靶标分子,由于核酸适配体与靶标的高效特异性结合,核酸适配体与胶体金解离.最后加入NaCl后,胶体金由红变兰.(结果)胶体金比色检测体系中,NaCl的最佳浓度为1M,核酸适配体的最佳浓度为2μM.对恩诺沙星的比色检测限为15ng/mL.(结论)基于胶体金和核酸适配体的比色法可用于恩诺沙星的快速筛选.     

天然植物饲料添加剂总成分(大类化合物)检测方法

1、总生物碱1.1比色法用比色法测定总生物碱一般有下列3种方法: (1)根据生物碱本身的性质或分子中所含的功能基团与试剂反应而生成的颜色进行比色。(2)酸性染料比色法,即在一定pH介质下,生物碱RH 阳离子与酸性染料阴离子In-结合成有色化合物RH ·In-,经有机溶剂定量提取,再经碱化后即定量放出染料而比色。(3)与生物碱沉淀试剂产生有色沉淀,将沉淀定量分出后,用适当溶剂溶解而比色。     

饲料中L-赖氨酸的简易薄层检验法

L-赖氨酸(下称赖氨酸)的分子式为C6H14O2N2,分子量为146.19,它对动物的生长发育具有促进作用,现已被作为饲料营养强化剂而广泛添加于饲料中。饲料标签国家标准(GB 10648-1999)中规定了对氨基酸含量标注的要求,而有关饲料中赖氨酸含量的简易、准确的检验方法报道较少。笔者参照相关资料,研究出一种简易的检验方法—薄层检验法,能准确测出饲料中赖氨酸的含量。1 方法原理样品中赖氨酸经水提取后,在硅胶G薄层板上展开显色,与标准系列比较进行定量。2 仪器与试剂层析槽、喷雾器、薄层板、推薄器、微量注射器或血色素吸管等。硅胶G茚三酮丙酮…     

双硫腙垫消化法测定奶牛尿铅

<正> 1 原理 在弱碱性(pH=8.5～10.0)溶液中,铅离子与双硫腙作用成双硫腙铅红色络合物,可溶于氯仿、四氯化碳等有机溶剂,根据红色深浅比色定量。 2 试剂 ① 硫酸(d=1.84,GR级),② 硝酸(AR),③ 高氯酸(AR),④ 氨水(AR),⑤ 缓冲液:称取100g柠檬酸溶于70ml无铅水中,置于冷水浴上分次加入100ml氨水,边加边振摇,冷却后加入氰化钾5g及无水亚硫酸钠3g,溶解后加氨水至250ml,将此液移至1升容量的     

贮存在低温下牛奶中γ-酪蛋白含量的增加

本研究是在定量测定γ-酪蛋白的基础上,阐明低温下贮存牛奶的蛋白分解的作用。脱脂乳是从贮在2℃的、过夜的荷斯坦牛的乳池中制取的,将其在3—37℃条件下,用0.02%的叠氮钠培养48小时,或在5℃条件下贮存8天。每次培养或贮存后,加入胰蛋白酶抑制剂(0.1毫克/毫升)。经下述处理后对γ-酪蛋白进行定量分馏:(1)用下列溶剂处理脂肪乳:0.4M 硫氰酸钠,50%乙醇和0.15M 氯化钙,     

预混料中铜、铁的连续测定

<正> 铜、铁的测定方法虽多,但对预混料中铜、铁的测定目前尚未见有报道。为此,本文介绍一种简便、快速的检测预混料中铜、铁含量的方法。 1.原理在碱性氨溶液中,铜能形成Cu(NH_3)_2~(2+)络离子而进入溶液,铁则形成氢氧化铁的沉淀。过滤试液,进入滤液的铜可用碘量法来测定,然后用稀盐酸来溶解沉淀物,使铁进入溶液,用重铬酸钾法来测定铁。 2.测定方法称取1.0000克试样,加水15毫升,浓氨水20毫升,固体氯化铵0.5克,搅匀。放置15分钟后过滤,用1％NH_4Cl—1％NH_3·H_2O混合溶液洗涤烧杯和沉淀物3～4次。滤波用200毫升碘量瓶承接,加浓硫酸5毫升于滤液中,在电炉上蒸至白烟冒尽(以除去有机物)。取下后加入蒸馏水20毫升,加热至微沸,加pH5.5的NaAc—HAC缓冲溶液10毫升,固体碘化钾1～2克,在暗处放置3～5分钟,然后用硫代硫     

用饲料常规检验法鉴别赖氨酸和蛋氨酸的真伪

<正> 辨别赖氨酸、蛋氨酸的真伪优劣,可使用氨基酸分析仪,但一般饲料厂不具备这种仪器。笔者在两年多的实践中,采用饲料常规检验法多次检验出掺假赖氨酸、蛋氨酸,保护了本厂利益。下面将这一方法介绍给大家: 赖氨酸、蛋氨酸分子结构中均含有氮,用饲料常规检验法中粗蛋白质的测定方法,可测出其中的含氮量,根据含氮的多少或有无来确定赖氨酸、蛋氨酸的真假。具体方法与粗蛋白质的测定方法一样,取样称重经消化、蒸馏、接收、滴定后得出消耗盐酸的量,然后计算该赖氨酸、蛋氨酸的含氮量。计算公式为: 含氮量％=(V-V_0)×0.014×V_1/V_2 W×100式中V——消耗标准盐酸的毫升数 V_0——空白测定时消耗的标准盐酸毫升数 N——标准盐酸的当量浓度 0.014——常量,每毫升0.1N盐酸相当于0×014克氮 V_1——消化液稀释总毫升数 V_2——吸取消化液蒸馏用的毫升数赖氨酸的分子量为146,含有2个氮元素,理论含氮量为2×14/146即19.2％。蛋氨酸分子量为149,含1个氮元素,理论含氮量为9.4％。将此理论     

DL—蛋氨酸含量的测定方法

<正> 1.测定原理蛋氨酸含量的测定可用间接碘量法进行,其化学反应的关系式简化如下:DL—蛋氨酸+碘 pH6.5PHO DL—蛋氨酸—碘(加合物)2.化学试剂的配制2.1 磷酸盐缓冲液/碘化钾溶液准确称取149.54克磷酸二氢钾和205.66克磷酸氢二钾,溶于盛有蒸馏水的容量瓶中,稀释至2升后加入27.00克碘化钾,溶液的 pH 值用酸度计检查,调节为6.5。2.2 淀粉指示剂取1.25克可溶性淀粉于小研钵中,加水少许研成糊状,然后徐徐倾入50毫升沸蒸馏水中。煮沸2分钟,冷却后加入1克碘化钾,搅拌溶解。倾出清液贮于小口瓶中备用。     

含赖氨酸二肽对奶牛乳蛋白合成和乳腺氨基酸转运相关基因表达的影响

试验旨在研究含赖氨酸二肽对奶牛乳腺组织中乳蛋白合成和氨基酸转运的影响。在体外培养的奶牛乳腺组织培养液中添加不同含赖氨酸二肽(赖氨酸-赖氨酸(KK)、赖氨酸—组氨酸(KH)、赖氨酸—苯丙氨酸(KF)、赖氨酸—亮氨酸(KL)和赖氨酸—苏氨酸(KT)),分别等量取代培养液中0、5%、10%、15%和20%的游离赖氨酸(赖氨酸总浓度为210μg/mL)进行培养,试验结束后收集乳腺组织用于基因表达检测。结果显示,同游离氨基酸替代量为0组相比,KH替代Lys比例为15%,KF替代比例为10%,KK、KL和KT替代比例为5%时,α_s1酪蛋白(CSN1S1)mRNA丰度最高(P<0.05);KK替代Lys比例为5%、10%、15%和20%,KH替代比例为10%和15%,KF替代比例为15%,KL替代比例为5%、20%及KT替代比例为5%、10%和15%时,均显著促进了奶牛乳腺组织中小肽转运载体2(SLC15A2)的基因表达(P<0.05);KH替代Lys比例为15%,KK、KL替代比例分别为10%,KF、KT替代比例分别为5%时,赖氨酸转运载体B⁰⁺(SLC6A14)的mRNA丰度最高(P<0.05);KH替代Lys的15%、20%,KK替代比例为5%、10%和15%,KL替代比例为5%和10%时,显著促进了雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因的表达(P<0.05)。结果提示,奶牛乳腺摄取赖氨酸二肽能促进氨基酸的吸收和乳蛋白的合成。     

前列腺素对提高绵羊冷冻精液受胎率的效果

<正> 在家畜精液中前列腺素的含量,牛、马、猪及兔都少于100毫微克/毫升,而绵羊及山羊至少为40微克/毫升PGE加上若干PGF(Cenderella,1975)。据蒂莫夫和乔治也夫从绵羊精液中分离所知,在配种旺季,PGE、E_2和E_3明显地增加,但PGA、A_2和PGB的浓度并无变化;据资料介绍,在绵羊的常温人工授精中,在稀释液中加入PGE_2和PGF_(2α),可提高受胎率15%,它的生理效     

乳制品中酵母β-葡聚糖的检测方法

[目的]目前国内尚无酵母β-葡聚糖在乳制品中定量检测方法的国家标准和行业标准。本文利用离子色谱法建立快速、准确的乳制品中酵母β-葡聚糖检测方法。[方法]样品加入沉淀剂离心后,倒去上清液,反复数次至无干扰,加入1 mol/L盐酸溶液,经121℃60 min酸水解,调节pH值稀释后,过钠柱,用离子色谱仪测定。[结果]通过对水洗次数、色谱柱选择等因素选择优化,葡萄糖在1～20μg/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数R²>0.999,方法检出限为5 mg/100 g,定量限为15 mg/100 g;葡萄糖的回收率为84.8%～94.9%,相对标准偏差为2.34%(n=6)。[结论]该方法稳定,定量准确,适用于乳制品中酵母β-葡聚糖含量的检测。     

体内和体外法比较保护蛋氨酸和赖氨酸产品在瘤胃和小肠的释放率

采用不同材料制得6种保护蛋氨酸和4种保护赖氨酸产品,蛋氨酸分别以丙烯酸树脂Ⅳ号(M1),丙烯酸树脂Ⅳ号和乙基纤维素(M2),丙烯酸树脂Ⅳ号和乙基纤维素及羟丙基甲基纤维素(M3),乙基纤维素(M4),丙烯酸树脂Ⅳ号和氢化植物油(M5),氢化植物油(M6)包被;赖氨酸分别以丙烯酸树脂Ⅳ号和乙基纤维素(L1),丙烯酸树脂Ⅳ号和羟丙基甲基纤维素(L2),丙烯酸树脂Ⅳ号和氢化植物油(L3),乙基纤维素和氢化植物油(L4)包被。对10种产品进行了体外和尼龙袋法稳定性检验。结果表明,用尼龙袋在4头荷斯坦奶牛瘤胃中培养4、8、24、48 h,丙烯酸树脂Ⅳ号和氢化植物油保护的M5和L3的释放率最低,分别为11.72%~50.67%、35.70%~72.09%;其在pH6.6缓冲溶液中培养相应时间的释放率分别为24.67%~38.44%,42.05%~75.02%,体外法与尼龙袋法测定结果显著相关,相关系数分别为RM2=0.867 5,RL2=0.963 0。M5和L3在真胃和小肠及在pH2.4缓冲溶液中的释放率均为100%。     

日粮中添加蛋氨酸和赖氨酸对奶牛乳产量和氮素利用的影响

试验研究了代谢蛋白质中赖氨酸和蛋氨酸含量对中国荷斯坦奶牛泌乳性能和氮素利用的影响。对照组日粮能量充足但代谢蛋白质轻微受限。代谢蛋白质中蛋氨酸和赖氨酸的浓度分别为1.87%和5.93%,处理组如下(可代谢蛋白质中蛋氨酸和赖氨酸的百分数):L=以干物质计,对照日粮中添加0.49%的L-蛋氨酸盐酸盐(蛋氨酸,1.87;赖氨酸,7.00);M=对照日粮添加0.15%的2-羟基-4-甲硫基-丁酸(HMB)(蛋氨酸2.35;赖氨酸5.93);ML=对照组日粮同时添加0.49%赖氨酸盐酸盐和0.15%的2-羟基-4-甲硫基-丁酸(蛋氨酸2.39;赖氨酸7.10)。以上日粮用于饲喂60头泌乳中期奶牛,连续饲喂8周。单独添加赖氨酸(1.5 kg/d)或蛋氨酸(2.0 kg/d)可提高牛乳产量,且同时添加2种氨基酸可进一步提高牛乳产量(3.8 kg/d)。不同处理组奶牛采食量差异不显著。与对照组和饲喂L日粮组奶牛相比,饲喂M和ML组日粮的奶牛乳脂肪含量较高,但乳蛋白、乳糖和体细胞数各处理组差异不显著。添加蛋氨酸或赖氨酸可显著提高动脉血浆中蛋氨酸和赖氨酸浓度。饲喂ML日粮奶牛摄入氮向乳氮的转化率高于对照组,而血清、尿液和乳中尿氮浓度低于对照组。饲喂可代谢蛋白质轻微受限的日粮时,添加HMB和L-蛋氨酸盐酸盐以提供2.3%蛋氨酸和7.0%赖氨酸提高了乳产量、乳蛋白产量和氮素利用率。     

猪的繁殖试验(八)

利用三磷酸腺苷、组蛋白和二硫基丙醇磺酸钠构成猪精液新型稀释剂的可能性苏联萨罗德埃娃(1975)在葡萄糖—碳酸氢盐—硼酸盐稀释液中添加不同物质,以观察其对精子存活的影响。所用的添加物是:精氨酸(5微克/毫升——添加剂量,下同——译者注)、赖氨酸(5微克/毫升)、三磷酸腺苷、二硫基丙醇磺酸钠(1.4微克/毫升),以及这些物质的混合物。试验结果表明,在保存第8天时,以含三磷酸腺苷加精氨酸加二硫基丙醇磺酸钠的稀释液保存效果最好(活力评定,保存1天为0.9;保存8天为0.7);含三磷酸腺苷加赖氨酸加二硫基丙醇磺酸钠者,效果次之(活力评定,保存1天为0.88;保存8天为0.65)。从第9     

抗体滴度与更换吸头的相关性报告

正目前,基层兽医实验室主要采用血凝抑制(HI)试验(微量)方法检测新城疫免疫抗体滴度。此方法过程:用微量移液器在96孔V型微量反应板的1~11孔加入0.025毫升等渗磷酸盐缓冲液(PBS),第12孔加入0.05毫升PBS;吸取0.025毫升血清加入第1孔内,充分混匀后吸取0.025毫升于第2孔,依次对倍稀释至第10孔,从第10孔吸取0.025毫升弃去,第11孔为阳性对照,第12孔为PBS对照;1~11孔均加入含     

添加过瘤胃蛋氨酸、赖氨酸对荷斯坦奶公牛生长性能和胴体化学成分的影响

本文旨在研究在基础饲粮中添加过瘤胃蛋氨酸(RPMet)、过瘤胃赖氨酸(RPLys)对荷斯坦奶公牛生长性能和胴体化学成分的影响,探讨用RPMet和RPLys替代部分饲粮粗蛋白质的可行性。试验采用完全随机设计,选择12月龄左右,体重、体尺相近的健康奶公牛25头,随机分为5组,每组5头。对照组饲喂基础饲粮,4个试验组M15、L30、M15+L30、LCP组分别在基础饲粮中添加RPMet 15 g/d、RPLys 30 g/d、RPMet 15 g/d+RPLys 30 g/d、RPMet 15 g/d+RPLys 30 g/d(同时降低饲粮粗蛋白质2.20%)。预试期10 d,正试期150 d。结果表明,与对照组相比:1)基础饲粮中添加RPMet和RPLys对奶公牛干物质采食量无显著影响(P0.05);L30、M 15+L30、LCP组末重和平均日增重显著增加(P0.05),且均以M 15+L30组最高,但M 15+L30组与LCP组无显著差异(P0.05);M 15+L30和LCP组料重比显著降低(P0.05),以M 15+L30组最低,这2组间差异不显著(P0.05)。2)M 15+L30和LCP组奶公牛胸围和胴体中粗蛋白质含量显著提高(P0.05),这2组间差异不显著(P0.05)。3)M15+L30和LCP组奶公牛胴体中必需氨基酸苏氨酸、亮氨酸、精氨酸的含量显著提高(P0.05),这2组间差异不显著(P0.05),M15+L30组异亮氨酸含量显著提高(P0.05);M15+L30和LCP组奶公牛胴体中非必需氨基酸中天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、脯氨酸以及总氨基酸含量显著提高(P0.05),L30和M15+L30组酪氨酸含量显著提高(P0.05),这2组间均无显著差异(P0.05)。由此可见,饲粮中添加RPMet和RPLys在一定程度上提高了奶公牛的生长性能,增加了胴体中蛋白质的合成和氨基酸沉积,且添加RPMet 15 g/d+RPLys30 g/d能够在一定程度上替代部分饲粮粗蛋白质(2.20%)。     

家蚕浓核病毒DNA的研究

<正> 家蚕浓核病毒(DNV)属于细小病毒科(Parvoviridae)浓核病毒属(Denso-virus)。我们对该病毒进行过一些工作。本文进一步报告其DNA分子量和限制性酶切试验。 DNA感染的家蚕中肠20克,-20℃冷冻。取出融化后,加0.05M磷酸钠缓冲液(pH7.5)100毫升,组织捣碎机匀浆后,经6,000g离心8分钟。上清液用等体积冷氯仿     

高效液相-质谱法测定饲料中硝基呋喃代谢物

采用高效液相色谱/串联质谱(LC/MS/MS)法同时测定饲料中4种硝基呋喃类代谢产物3-氨基-2-恶唑酮(AOZ)、5-马啉代甲基-3-氨基-2-恶唑酮(AMOZ)、氨基脲(SEM)和1-氨基-乙内酰胺(AHD)。盐酸水解饲料中蛋白结合的代谢物,同时加入2-硝基苯甲醛(2-NBA),37℃过夜衍生化。加入醋酸锌,调pH至7后,再加入亚铁氰化钾去除蛋白。后用乙酸乙酯提取,正己烷净化,分析物采用电喷雾电离正离子(ESI+)和多反应监测(MRM)模式检测,内标法定量。在添加质量浓度1~4μg/kg范围内,内标法回收率为85%~110%;相对标准偏差(RSD)小于15%;方法检出限AMOZ和AOZ为0.5μg/kg,SEM和AHD为1μg/kg。