滇杨叶芽总RNA提取方法比较研究

 采用改良CTAB法、硼砂/CTAB法、酚/SDS法、皂土法和2种总RNA提取试剂盒共6种方法提取滇杨叶芽总RNA,并通过紫外分光光度计测定RNA样品的纯度,琼脂糖凝胶电泳和cDNA AFLP检测总RNA样品的完整性和质量。结果表明,硼砂/CTAB法和皂土法不适合滇杨叶芽总RNA的提取。改良CTAB法、酚/SDS法和2种试剂盒均能得到清晰的28S和18S条带。其中,改良CTAB法提取的滇杨叶芽总RNA完整性最好,OD260/OD280值在1.8-2.0之间,OD260/OD230值>2.0,经过cDNA-AFLP扩增分析,获得了清晰的条带。结果证明,改良CTAB法提取的滇杨叶芽总RNA能够满足RT-PCR等分子生物学实验。     

不同方法提取狗脊蕨叶片总RNA的比较分析

[目的]为构建狗脊蕨叶cDNA文库,保存珍贵基因资源,克隆和研究与有效成分合成相关的基因等提供技术参考。[方法]以狗脊蕨叶片为材料,采用CTAB法、一步法、酚-SDS法和RNA试剂盒提取分离法提取总RNA,通过比较分析确定最优方法。[结果]这4种方法都能提取出182、8 S的RNA,但CTAB法和试剂盒提取分离法的总RNA质量较高,CTAB法还提取出清晰的5S RNA。一步法和SDS法带型模糊,有降解现象。CTAB法提取的狗脊蕨叶片总RNA质量较好,28S1、8S和5S条带清晰,且无明显降解。CTAB提取法OD260/OD280的值在1.93~2.06,试验中其OD260/OD280值为2.012,接近2.0,纯度较高。一步法和SDS法OD260/OD280>2.0,试剂盒法OD260/OD280<2.0。[结论]CTAB法适合提取的狗脊蕨叶片总RNA,质量较好,可用于cDNA合成、文库构建等后续分子生物学试验。     

适合软枣猕猴桃花蕾转录组测序的总RNA提取方法研究

为了得到符合转录组测序要求的软枣猕猴桃花蕾RNA,比较了Trizol法、十二烷基苯磺酸钠(SDS)法、天根植物总RNA提取试剂盒以及改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法的提取效果。结果表明,Trizol法、SDS法和天根植物总RNA提取试剂盒均不能有效提取到软枣猕猴桃花蕾总RNA,改良后的CTAB法提取的RNA 28S和18S条带清晰,通过RT-PCR方法扩增出软枣猕猴桃Actin基因片段。将纯化后的RNA送样至测序公司,经深度检测样品合格,可以上机进行转录测序。     

黄花石蒜花蕊和花葶组织中总RNA提取方法的比较

目的筛选适合黄花石蒜花蕊和花葶组织中总脱氧核糖核苷酸(RNA)的提取方法。方法采用CTAB法、SDS法和植物总RNA提取试剂盒法对黄花石蒜花蕊和花葶组织中总RNA进行提取并比较其效果。结果 CTAB法和SDS法均不能提取到完整的RNA;植物总RNA提取试剂盒能有效地去除蛋白质、多糖及DNA,28S条带的荧光亮度是18S条带的2倍左右,OD260/280值在1.8~2.0之间,花蕊和花葶的产率分别为304.1μg/g和255.8μg/g,并且试剂盒法提取的总RNA通过RT-PCR扩增能获得特异性条带。结论试剂盒法适合黄花石蒜花蕊和花葶组织总RNA的提取,提取的总RNA质量高、完整性好、产率高,符合后续实验的要求。     

小麦总RNA的小量快速提取

以小麦幼苗的叶、茎和根组织为材料,采用CTAB法和尿素法分别提取其总RNA。结果表明,CTAB法提取的总RNA经电泳检测,28S rRNA和18S rRNA带型完整;A260/A280的比值接近2,纯度较高;将提取的总RNA反转录合成cDNA,可用于RT-PCR分析。尿素法提取叶和茎组织的总RNA质量较好,但提取根组织的效果较差。说明CTAB法较适合小麦幼苗各组织总RNA的提取。同时,两种方法提取过程中均不使用液氮,可节约试验成本。     

狗牙根基因组DNA提取方法的比较

以狗牙根的嫩叶为材料,在传统CTAB法的基础上加以改良,建立了狗牙根基因组DNA的CTAB提取方法.得到的DNA经核酸蛋白质分析仪测得A_(260)/A_(280)值处于1.69～2.02之间、A_(260)/A_(230)集中处于1.82～2.08之间,经琼脂糖凝胶电泳检测各样品具有一条明亮主带并无拖尾现象,经ISSR-PCR检测出现清晰稳定的条带,说明改良CTAB法提取得到的DNA完整性好,纯度高,适用于分子标记等分子生物学的研究.     

富含多糖葡萄风信子花瓣总RNA提取方法研究

在普通CTAB法与SDS法提取RNA的基础上,从去除多糖和DNA污染两个方面进行优化,筛选出适于富含多糖类葡萄风信子花瓣RNA提取的方法,经检测OD260/280值在1.8～2.0之间,电泳28S条带和18SrRNA条带都很清亮,比值约1.5.对改进的CTAB法提取的总RNA进行RT-PCR能扩增出所需目的条带.有效去除多糖类物质污染对于富含多糖类花瓣组织RNA提取很重要.     

甜高粱总RNA提取方法的比较研究

以LTR102甜高粱为材料,比较改良TRIzol法、CTAB法和SDS法提取甜高粱总RNA的效果.利用普通琼脂糖凝胶分析3种不同方法所提取的RNA的完整性,并用紫外分光光度计分析RNA的纯度.结果表明:改良TRIzol法能有效去除多糖和蛋白,提取的RNA中28S rRNA亮度约为18S rRNA的2倍,D260 nm/D280 nm值介于1.8～2.0;CTAB法提取的RNA泳道模糊不清,杂质多,有污染现象;SDS法提取的RNA中28S rRNA有缺失现象,降解严重.改良的TRIzol法适合甜高粱总RNA的提取.     

濒危南药白木香愈伤组织总RNA提取方法研究

分别采用SDS-酸酚法、CTAB法、异硫氰酸胍法提取白木香愈伤组织总RNA,通过比较发现,异硫氰酸胍法提取白木香愈伤组织总RNA的效果比其他两种方法更好。利用异硫氰酸胍法提取的白木香愈伤组织总RNA具有较好的完整性,OD260/OD280介于1.8～2.0之间。成功建立了白木香愈伤组织总RNA快速提取方法,可为其他药用植物总RNA提取提供借鉴。     

核桃胚营养代谢盛期总RNA提取方法研究

核桃是21世纪的超级食品.对核桃胚总RNA的提取是开展核桃胚发育和代谢分子生物学研究的基础环节.本试验针对核桃营养代谢盛期胚的特点,通过对改进的CTAB法、常规的CTAB法、TRIZOL法和通用植物总RNA提取试剂盒(Bioteke)四种不同总RNA提取方法的比较与分析,表明采用改良CTAB法提取的总RNA完整性较其他方法好,28 S、18 S、5 S条带清晰无明显降解,OD260/OD280值为1.875,无蛋白质污染,易于进行RT-PCR和cDNA的合成,是核桃胚营养代谢盛期的总RNA提取的有效方法.