猪源屎肠球菌tetM基因的检测

用微量肉汤倍比稀释法测定了猪源屎肠球菌对四环素等抗生素的敏感性,用PCR和DNA测序方法检测了屎肠球菌中四环素类耐药基因(tet基因),并分析了试验菌对四环素类的耐药机制。结果表明:14株猪源屎肠球菌对四环素、多西环素、环丙沙星、红霉素全部耐药,4株对头孢噻呋耐药;在14株屎肠球菌中,分别有13株和9株含tet L和tet M基因,其中有9株同时携带tet L和tet M基因;猪源屎肠球菌主要存在主动外排和核糖体保护两种耐药机制,其对四环素类的耐药性主要与携带tet M和tet L有关。     

猪源肠球菌两种致病基因和表型的检测

为调查53株猪源肠球菌2种致病基因和2种表型的分布,应用聚合酶链反应检测53株肠球菌的2种致病基因,用50ml/L兔血平板和30g/L明胶平板检测β溶血和明胶溶解表型。检测结果表明,溶血素激活基因(cylA)明胶酶基因(gelE)为猪源肠球菌的主要致病基因;粪肠球菌2种致病基因和2种表型的检出率高于屎肠球菌;来源于新鲜猪肉中的粪肠球菌存在一定的致病力,提示注意食品卫生安全;在新鲜猪肉中检测到2株鸟肠球菌,基因型和表型检测说明其存在较弱毒力。     

肠球菌属细菌感染耐药性研究

目的 探讨肠球菌属细菌感染患者的菌种分布和耐药性.方法 选择经细菌培养与鉴定确诊为肠球菌属细菌感染的687例患者,行多种常用抗菌药物药敏试验.对比各类菌株占比情况及所属样本分布情况,分析各类菌株对不同抗生素的耐药率.结果 687例患者共分离出964株肠球菌属细菌,其中粪肠球菌290株(30.08％),屎肠球菌674株(...     

新疆动物源粪肠球菌的耐药性分析与耐药基因检测

为了解新疆不同动物源粪肠球菌的耐药性和耐药基因携带情况,并指导临床针对不同动物合理用药,从新疆9个县区养殖场分别采集猪、牛、羊、骆驼、鸡和鸽的粪样共564份,进行粪肠球菌的分离鉴定.对分离得到的粪肠球菌采用CLSI推荐的琼脂稀释法进行11种抗菌药物最小抑菌浓度的测定,用PCR方法进行10种耐药基因的检测.结果显示:1)...     

人工瘤胃评价屎肠球菌对瘤胃发酵的影响

【目的】探讨屎肠球菌对瘤胃发酵的影响,以此评价屎肠球菌能否作为直接饲用微生物用于反刍动物的生产。【方法】利用持续动态人工瘤胃装置,采用完全随机试验设计,以不添加屎肠球菌发酵液为对照,研究了添加1.25×106和6.25×106mL-1屎肠球菌发酵液对瘤胃液pH、微生物蛋白(MCP)、氨态氮(NH3-N)、乙酸、丙酸、丁酸和总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度的影响。【结果】添加屎肠球菌对瘤胃pH值和MCP无显著影响(P>0.05),但能显著提高瘤胃NH3-N浓度(P<0.01);与对照组相比,1.25×106mL-1屎肠球菌液添加组显著提高了瘤胃液的乙酸与总挥发性脂肪酸浓度(P<0.05),而添加屎肠球菌对瘤胃丙酸和丁酸浓度及乙酸与丙酸的比例没有显著影响(P>0.05)。【结论】添加一定量的屎肠球菌,可在不改变瘤胃发酵类型的情况下促进饲料中碳水化合物的消化。     

临床分离粪肠球菌的毒力基因和耐药基因检测及其耐药性研究

分离女性阴道中的粪肠球菌（Enterococcus faecalis）,通过PCR和Kirby-Bauer(K-B)纸片扩散法探究其毒力基因、耐药基因及其耐药表型,为揭示粪肠球菌感染机制及其临床治疗提供科学依据。结果表明：从157个样品中共分离出22株粪肠球菌;在这些粪肠球菌中：毒力基因检出率为efa A (100%)、asa1 (90.9%)、cyl A (90.9%)、fsr (90.9%)、cpd (90.9%)、acm (86.4%)、gel E (81.8%)、esp (68.2%)、ace (54.5%)和hyl (0);耐药基因的检出率为van A (0)、van B (0)、van C (18.2%)、aac (40.9%)、ant(6)-1 (59.1%)、erm B (68.2%)、mef A(54.5%)、tet M (72.2%)和tem (81.8%);药敏结果显示粪肠球菌对万古霉素、呋喃妥因、利奈唑胺、替考拉宁敏感;对其他抗菌药物具不同程度的耐药。由此得出,阴道易受粪肠球菌感染,体外实验支持糖肽类抗菌药物可用于粪肠球菌感染的临床治疗。     

藏羊源屎肠球菌的分离、鉴定及体外益生特性

为了获得藏羊源益生菌,利用形态学、生化试验和分子生物学方法对屎肠球菌进行分离与鉴定,通过抑菌试验、耐受性试验、生长曲线与产酸能力试验以及药敏试验对屎肠球菌分离菌株的体外益生特性进行评价。结果显示,藏羊源屎肠球菌分离菌株EF1-mh在Pfizer肠球菌选择性琼脂上呈棕黑色菌落,胆汁七叶苷培养呈黑色等生理生化结果符合肠球菌特征,分离株16S rDNA序列分别与参考屎肠球菌序列相似性均达99%以上,PCR成功扩增出种特异性基因ddl和adk基因,明确分离菌株EF1-mh是屎肠球菌。分离株对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和产气荚膜梭菌分离株的抑菌圈直径均在8.64 mm以上;分离菌株具有一定耐受性,于60 ~ 80 ℃水浴30 min培养16 h后,活菌浓度基本恢复。 在pH 2.0培养16 h活菌浓度为3.4×10² CFU·mL^-1;在pH 3.0培养4 h,活菌浓度为9.5×10⁶ CFU·mL^-1;在0.3%胆盐的 MRS 培养液中培养8 h活菌浓度为1.37×10³ CFU·mL^-1,在1%和2%胆盐的培养液中培养16 h仍有存活;生长速度快,4 h后进入了对数期,且培养10 h后菌液pH在4.3左右,产酸能力强,对氨苄西林、克林霉素等抗生素表现敏感,对多粘菌素B、头孢氨苄等抗生素表现为耐药。研究表明藏羊源屎肠球菌分离菌株EF1-mh具有较好的体外益生特性,这将有利于为藏羊源屎肠球菌的研究。     

新疆伊犁昭苏不同动物源粪肠球菌耐药性及耐药基因检测

为掌握新疆伊犁昭苏地区不同动物源粪肠球菌的耐药性及耐药基因携带情况,在伊犁昭苏地区各散养户采集鸡的泄殖腔拭子及羊、牛的鼻拭子和肛拭子样品共1 120份,从中分离粪肠球菌,通过琼脂稀释法进行药敏试验,采用PCR方法检测其携带的相关耐药基因。结果表明,共分离鉴定出粪肠球菌263株,分离率23.5%,不同动物源粪肠球菌的耐药严重程度由高到低依次是羊源、鸡源和牛源。其中,羊源粪肠球菌对红霉素、四环素、氟苯尼考、多西环素的耐药率均大于75.0%,显著高于鸡源和牛源粪肠球菌（P<0.05）;鸡源粪肠球菌对抗菌药物的耐药率在0～50.0%之间;牛源粪肠球菌对抗菌药物耐药率均在21.1%以下;所有粪肠球菌对氨苄西林和万古霉素完全敏感。外排泵基因emeA在不同来源粪肠球菌中的检出率均高于80.0%;ermB、fexA、optrA、tet(M)和aph(3’)-Ⅲ基因在羊源粪肠球菌中的检出率高于70.0%,与耐药情况基本一致;未检出cfr、ermC和poxtA基因。不同动物源粪肠球菌对抗菌药物表现出不同程度的耐药性,且耐药基因型与耐药表型基本一致,建议当地加强动物源粪肠球菌耐药性和耐药基因的定期检测...     

猪源降胆固醇肠球菌的分离鉴定

为了筛选益生菌并评价其对血清胆固醇的降解作用,从健康猪胃肠道分离鉴定12株肠球菌,进行体外降胆固醇,对酸和胆盐的耐受性试验,结果表明：分离菌均具有体外降解血清胆固醇的作用,降解率为16．67～48．00％,对pH3．0和0．4％的胆盐具有抵抗力,综合评价E1和E7可以作为降胆固醇的备选益生菌株。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌磺胺类药物耐药基因的检测

为了解河南省及周边地区规模化猪场猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)对磺胺类药物的耐药情况,本研究从河南省及周边地区49个规模化猪场的肺脏和气管中分离出79株疑似APP菌株,血清型鉴定结果显示,分离菌株为1、2、3、5、7、8、9、10型APP,采用纸片扩散法对分离株进行了耐药表型鉴定,同时采用PCR方法对磺胺类药物耐药基因进行了检测。药敏试验结果显示,APP对磺胺类药物的耐药率为100%(79/79)。根据Gen Bank中登录的序列,设计了3对特异性引物,对磺胺类药物的耐药基因Sul1、Sul2、Sul3进行扩增检测。耐药基因检测结果显示,分离的79株细菌中,Sul2基因检出率为100%(79/79),Sul1基因的检出率为79.75%(63/79),Sul3基因的检出率为89.87%(71/79),Sul1和Sul2基因同时检出率为70.89%(56/79),Sul1和Sul3同时检出率为62.03%(49/79),Sul2和Sul3基因同时检出率为77.22%(61/79)。     

国内病猪中猪链球菌2型分离株溶血素基因的PCR检测及序列分析

以探明猪链球菌2型(SS2)国内病猪分离株的溶血素基因(sly)的分布情况及其序列为目的.通过聚合酶链反应(PCR)方法检测29株不同年代、不同地区SS2国内分离株的sly,并将其中的5株(SS2-1、HA9801、HA0507、JR0507和ZY05719)sly 进行克隆及序列分析.结果显示:29株菌都有sly,其中5株菌的sly的ORF的碱基数目都为1 494 bp、编码497个氨基酸,核苷酸序列的同源性为99.7%～100.O%,所推导的蛋白质序列的同源性为99.8%～100.O%,其中SS2-1、HA9801、HA0507、JR0507与国外参考株P1/7的序列完全一致.表明中国猪链球菌2型病猪分离株普遍具有sly,且基因序列极为保守.     

动物源大肠杆菌PMQR基因流行性检测

【目的】检测分离自广东省散养型养殖场的动物源大肠杆菌中oqxAB基因及其它质粒介导喹诺酮类耐药基因(PMQR)的流行情况。【方法】采用PCR方法检测oqxA、oqxB、qnr、qepA和aac（6′）-Ib-cr基因;琼脂平板稀释法对PMQR阳性菌株进行18种抗菌药物的最小抑菌浓度测定。【结果】qnrB 、qnrS、aac（6′）-Ib-cr、oqxA、oqxB的检出率依次为10.49%、18.88%、31.47%、44.8%和48.9%,但未检测到qnrA、qnrC、qnrD和qepA。oqxA与oqxB的检出率较高,且oqxA与oqxB常常同时存在。多数菌株同时携带两个或两个以上的PMQR基因。PMQR阳性菌对18种兽医临床常用抗生素耐药率较高。【结论】PMQR基因在广东省兽医临床传播广泛,广东省大肠杆菌对临床常用抗菌药物耐药较为严重,药敏谱呈多样化,多重耐药株比例较高。     

鸡源葡萄球菌携带cfr与tet(M)基因于同一质粒的检测

为了解鸡源葡萄球菌中多药耐药基因cfr的流行及耐药情况,采用提取细菌基因组DNA、PCR检测、药物敏感性检测、质粒提取、电转化试验、全质粒测序及分析等方法进行了研究。分离并鉴定出了1株多药耐药表型葡萄球菌,其含有cfr与tet(M)基因,且cfr与tet(M)耐药基因位于同一质粒上。     

鸡源葡萄球菌携带cfr与tet(M)基因于同一质粒的检测

为了解鸡源葡萄球菌中多药耐药基因cfr的流行及耐药情况,采用提取细菌基因组DNA、PCR检测、药物敏感性检测、质粒提取、电转化试验、全质粒测序及分析等方法进行了研究。分离并鉴定出了1株多药耐药表型葡萄球菌,其含有cfr与tet(M)基因,且cfr与tet(M)耐药基因位于同一质粒上。     

质粒介导的喹诺酮类耐药基因在猪源大肠杆菌中的检测

为了解河南地区质粒介导的喹诺酮类耐药基因(qnrA、qnrB、qnrS、qepA和aac(6′)-Ib-cr)在健康猪源大肠杆菌中的流行与分布,分别设计特异性引物对2009年在河南地区2个规模化猪场猪群的肛门拭子中分离保存的109株猪源大肠杆菌进行聚合酶链式反应扩增。检测结果显示,仅检测到qnrB、qnrS和aac(6′)-Ib-cr,检出率分别为2.8%、10.1%和24.8%。提示质粒介导的喹诺酮类耐药基因在河南地区健康猪源大肠杆菌中有一定的发生率,且以qnrS和aac(6′)-Ib-cr为主。质粒介导的喹诺酮类耐药基因的出现,可导致耐药基因的水平扩散,势必造成兽医临床用药的难度加大。     

益生屎肠球菌HDRsEf1抗氧化性能评估

采用过氧化氢耐受性实验、清除自由基(DPPH自由基、羟自由基、超氧自由基)实验、还原性实验,评价屎肠球菌HDRsEf1完整细胞、无细胞提取物、发酵液在体外的抗氧化性能;并通过构建D-半乳糖小鼠衰老模型评价屎肠球菌HDRsEf1在体内的抗氧化性能.结果显示:屎肠球菌HDRsEf1对过氧化氢溶液具有较好的耐受性;发酵液不仅对DPPH自由基具有很好的清除能力,而且也具有很好的还原能力;发酵液、无细胞提取物和菌悬液具有很强的羟自由基清除能力,但对超氧自由基清除能力较弱;屎肠球菌HDRsEf1菌株、发酵液均能显著提高小鼠血清、脑内超氧岐化酶(SOD)活力,降低脂肪质过氧化产物(MDA)含量.因此,屎肠球菌HDRsEf1在体外和体内都具有很好的抗氧化性.     

2株鸭源肠球菌的生物学特性的观察

对2株鸭源肠球菌临床分离株和1株粪肠球菌参考菌株的形态特征、培养特性、生理生化特性、对药物的敏感性等生物学特性进行了初步研究。结果表明,3个被检菌株在光学显微镜下呈球形、革兰氏阳性染色和链状排列方式,能在10℃、45℃和6.5%NaCl肉汤等条件下生长,能耐热60℃30min,其特性均符合肠球菌属的特征,各菌株生化反应特性均与粪肠球菌特性基本一致,3个菌株均可鉴定为粪肠球菌。药敏试验结果表明,3个菌株均对青霉素、万古霉素、庆大霉素、红霉素和氯霉素敏感而对四环素耐药。