乙醇激活诱导小鼠孤雌胚的发育与核型分析

注射ｈＣＧ１８～１９ ｈ 后收集的小鼠卵母细胞, ８５ ％ 以上可为乙醇所激活, 产生均质单倍体、嵌合单倍体、１ 个原核的杂合二倍体和２ 个原核的杂合二倍体４ 种激活类型, 且它们的比率分别为８１－４ ％ 、１０－５ ％ 、４－６ ％ 和３－５ ％ 。单倍体胚胎体外培养后有少数可发育至囊胚期。单倍体孤雌胚在８ 细胞期开始出现二倍体核型, 从而形成单倍体胚胎、单倍体 二倍体嵌合胚和二倍体胚胎。孤雌胚的核型中还出现较高比率的非整倍体。     

山丹新麦草染色体加倍方法研究

本研究以山丹新麦草为材料,通过秋水仙素处理萌动种子、胚芽、二倍体植株幼苗染色体加倍研究,探讨了不同诱变材料的适宜处理浓度和时间,从而比较出最适宜的染色体加倍方法。结果显示：最好的加倍方法是用0．1％的秋水仙素溶液处理二倍体幼苗24h诱变率最高,为62．5％。     

山丹新麦草多倍体诱导的初步研究

用0．2％的秋水仙素分不同处理时间对二倍体新麦草萌动种子进行了染色体加倍，并对加倍后的植株在幼苗分蘖期进行了细胞学和形态的研究。结果表明：在室温用0．2％秋水仙素溶液处理3～5h，诱导加倍的成功率最高，加倍植株均为二倍体和四倍体的混倍体；混倍体植株叶片气孔保卫细胞的长度均高于未加倍的二倍体植株。     

四种动物传代细胞染色体遗传变异率分析

本文的目的分析制苗用传代细胞染色体的变异稳定性,以判定其质量,方法采用直接法制取传代细胞染色体标本,用常规Ｇｉｅｍｓａ染色,１０００倍光学显微镜下计数中期分裂相染色体数目,求出染色体变异率（％）,并进行核型分析。结果Ｆ８１为亚二倍体细胞系,染色体众数为３０;Ｖｅｒｏ是超二倍体细胞系,染色体众数为７３－７５;ＭＤＣＫ属于亚四倍体细胞系,染色体众数为１２５－１３５。ＢＨＫ２１为亚二倍体或亚四倍体细胞系     

二倍体鸭茅农艺性状的初步研究

采用横断山区野生的五份二倍体鸭茅与采自横断山和庐山的野生四倍体鸭茅进行农艺性状的对比研究。结果表明，二倍体鸭茅生育期比四倍体长２６天，拔节期延迟４５天，以后的生长速度高于四倍体。但种子质量，分蘖力，再生性，茎叶比，抗热力等均不如四倍体鸭茅；分蘖期刈割，年均干草产量３６５０ｋｇ／ｈａ，相当于四倍体的３０％，粗蛋白质年均产量５７３ｋｇ／ｈａ，相当于四倍体的２６．５％，二倍体孕期干物质年产为３９３０ｋｇ     

不同倍数体桑树花粉发芽试验

本试验以四类不同染色体倍数的七个桑树品种资源的花粉,采用悬滴培养法,进行发芽试验。试验结果发现二倍体桑发芽率最高,约90.0％;其次是六倍体桑,其发芽率为70.2％;再次为四倍体桑,发芽率为50.0％;三倍体桑均不发芽。     

人工三倍体桑品种圌桑13号选育成绩初报

以优质,高产,适应性强和大叶易探为育种目标,将塘10×伦109 F1杂交桑诱导为四倍体J-402,此为母本,与二倍体地方种四川花桑为父本杂交,经系统选择,优选育成三倍体桑品种圌桑13号.经实验园和田间品比试验,该品种与二倍体对照种湖32号相比,全年平均产叶量增产41.55％,养蚕的万头蚕茧层量提高6.84％,100kg桑产茧量提高8.35％;抗旱性强,抗黑枯细菌病;并表现发芽率高,枝叶生长旺盛,叶质优,叶片肥大,秋叶硬化迟,探叶效率高等优良的三倍体桑特性.     

云南半细毛羊毛囊干细胞生物学特性分析

为研究云南半细毛羊毛囊干细胞（hair follicle stem cells,HFSCs）的生物学特性,采用组织块法分离培养云南半细毛羊HFSCs,并对其细胞形态、生长动力学、冷冻与复苏、染色体核型等生物学特性进行分析.结果表明：HFSCs为贴壁生长,体积小,核质比高,呈典型的铺路石状,在显微镜下折光性强、胞体透亮.细胞生长曲线为“S”型.冻存前细胞活率98.2％,复苏后细胞活率96.4％.染色体中正常二倍体数目2n=54,其中,长染色体中有3对为中着丝点染色体,23对为端着丝点染色体,X染色体为最大的近端着丝点染色体,Y染色体为最小的亚中着丝点染色体.所得细胞呈现典型的HFSCs特征,细胞活性好,细胞系为稳定的二倍体细胞系.     

四倍体桑与二倍体桑杂交后代的结实性和染色体的倍数调查初报

调查了人工四倍体桑与二倍体桑杂交F，代10个组合共100株雌性植株的结实性和细胞染色体倍数。结果表明：10个三倍体组合中，诱桑11号桑椹无种子，细胞染色体检查为100％的三倍体(3X)植株，另外9个组合每椹下沉种子数为O～22粒，三倍体植株占检查株数的40％～80％，说明人工四倍体与二倍体桑杂交后代并非全部是三倍体植株。认为要提高三倍体组合后代中三倍体桑的纯度，关键在于四倍体亲本的诱变、选择和防止制种过程中外来花粉的混杂。     

黄花苜蓿野生种群遗传多样性的初步研究

对来自我国不同地区的黄花苜蓿野生种群的种子千粒重、发芽率及贮藏蛋白进行了初步研究。结果表明，黄花苜蓿野生种群内和种群间均存在着较大的变异，种子千粒重在1．098－2．012g之间，其中二倍体黄花苜蓿种子千粒重最低，仅为1．098g，是四倍体黄花苜蓿种子平均千粒重的62．01％；种子发芽率也十分不整齐，种皮不经磨擦的自然发芽率十分低，从0－40％不等，平均发芽率仅为16．9％，二倍体种子的自然发芽率为0；种子贮藏蛋白SDS凝胶电泳亦显示出其具有多态性，平均多态位点百分比为37．9％，基因多样性为0．3066，种群分化系数为0．2257。     

猪瘟病毒石门株基因组cDNA片断的扩增与克隆测序

以猪瘟病毒（ＨＣＶ）中国石门株强毒的血毒、细胞毒及Ｃ系兔化弱毒的细胞毒中提取的总ＲＮＡ为模板，应用逆转录─聚合酶链式反应（ＲＴ一ＰＣＲ），在合成的两对ＨＣＶ特异引物引导下，扩增出与预计大小一致的４４１和３００ｂｐ两个核酸片断。寡核苷酸探针杂交证实确为ＨＣＶＰ_８０和ｇｐ４４／４８蛋白编码区特异性的ｃＤＮＡ片断。扩增片断克隆入ｐＵＣ_１９和ｐＢＳＫ（＋）中，并对ＨＣＶ石门株Ｐ_８０区ｃＤＮＡ片断进行测序分析，其与国外Ａｌｆｏｒｔ、Ｂｒｅｓｃｉａ株同源性分别为９０．６％和９４．６％。氨基酸水平上同源性高达９８．４％。为抗猪瘟病毒Ｐ_８０区核酶的设计和应用提供了依据。     

羊传染性脓疱病毒湖北分离株CBP二级结构及其细胞表位的预测

参照GenBank中羊传染性脓疱病毒（Orf virus,ORFV）的毒力因子趋化因子结合蛋白（chemokine-binding protein,CBP）基因的核苷酸序列设计合成1对特异性引物,以羊传染性脓疱病毒湖北分离毒株的DNA为模板,提取总DNA。采用PCR方法特异扩增该基因片段,得到CBP基因序列。通过网络平台的SOPMA服务器和DNAStar软件预测ORFV CBP蛋白的二级结构;综合利用DNAStar软件、二级结构预测及ABCpred方案预测羊ORFV CBP蛋白的B细胞表位;分别采用人工神经网络法（ANNA）和在线程序预测ORFV CBP蛋白的细胞毒性T细胞和辅助T细胞的抗原表位。结果显示,ORFV CBP蛋白的二级结构主要包括α-螺旋、β-转角、无规则卷曲和β-片层4种类型,分别为α-螺旋占24.64%、β-片层占22.14%、β-转角占3.39%、无规则卷曲占49.29%;有7个优势B细胞表位,7个细胞毒性T细胞表位和3个辅助T细胞表位。本研究为ORFV诊断方法的建立、单克隆抗体的制备及表位疫苗的研制提供了理论依据。     

一株牛蛙源虹彩病毒的分离及鉴定

用鲤鱼表皮瘤细胞系(epithelioma papulosum cyprini cell line,EPC)从福建省某美洲牛蛙养殖场分离到一株病毒FJ049。感染病毒的EPC呈现细胞圆缩、颗粒增多、脱落等特征性病变。间接免疫荧光检测结果表明,感染FJ049的EPC细胞与虹彩病毒单克隆抗体反应并出现特异性的胞浆荧光。采用PCR对虹彩病毒主衣壳蛋白(major capsid protein,MCP)基因保守区域进行扩增,扩增出531 bp的特异性基因片段。MCP基因同源性和遗传进化分析结果表明分离株FJ049与沼泽绿牛蛙虹彩病毒RGV9808的核苷酸同源性最高,为99.8%,属于虹彩病毒科蛙病毒属。     

EFFECTIVENESS OF BROAD SPECTRUM ANTHELMINTICS AGAINST SELECTED STRAINS OF TRICHOSTRONGYLUS COLUBRIFORMIS

SUMMARY A field population of Trichostrongylus colubriformis was divided into 4 lines for exposure to selection in the laboratory. The first line was selected with 50 mg/kg thiabendazole, the second with 4 mg/kg morantel tartrate, the third with 50 mg/kg thiabendazole followed by 4 mg/kg morantel tartrate and the fourth line was not selected for drug resistance. Following at least 9 generations of selection there was no difference in LD₅₀ or LD₉₅ between the unselected and single selected strains of worms. The strain selected by⁵⁰both thiabendazole and morantel tartrate had a significantly higher LD₅₀ against thiabendazole, morantel tartrate and levamisole than did the other three strains. The single selected strains had LD₉₅'s of 172, 21.5 and 2.3 mg/kg for thiabendazole, morantel tartrate and levamisole respectively, compared with corresponding values of 111, 17.3 and 2.4 in the unselected strain and 124, 15.5 and 3.0 in the double selected strain. The estimated efficiency of the recommended dose of each anthelmintic against the unselected field strain was:—thiabendazole (44 mg/kg) 50% efficient, morantel tartrate (8.8 mg/kg) 76% efficient and levamisole (7.0 mg/kg) 99.9% efficient.     

猪流行性腹泻病毒ORF3和M基因的克隆与序列分析

为了解福建省猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)毒株ORF3和M基因变异情况,本研究从4个不同规模猪场发生仔猪“顽固性腹泻”疾病的病料中扩增到4株PEDV的ORF3和M基因,并进行了序列分析.结果表明:4株PEDV ORF3基因均含有675个碱基,编码224个氨基酸,与GenBank中登录的代表性PEDV核苷酸的同源性为89.7％～100.0％,氨基酸的同源性为94.7％～99.6％,其中FJPT毒株核苷酸的同源性与CV777 truncated毒株最低,仅为89.7％,FJNP毒株核苷酸的同源性与中国北方流行的CH ZKFG 11毒株最高,达100.0％.M基因含有681个碱基,编码226个氨基酸,与GenBank中登录的代表性PEDV核苷酸的同源性为94.8％～100.0％,氨基酸的同源性为94.8％～99.6％,其中FJPT毒株核苷酸的同源性与日本D89752毒株最低,仅为94.8％,FJNP毒株核苷酸的同源性与韩国CPF193、泰国毒株最高,达100.0％.4株PEDV毒株均与国内外流行强毒株的亲缘关系较近,与attenuate DR13弱毒株的亲缘关系较远.     

牛乳腺炎金黄色葡萄球菌肠毒素A基因的克隆及序列分析

根据GenBank上公布的金黄色葡萄球菌肠毒素A（staphylococcus enterotoxin A,SEA）基因的全序列,设计一对特异性引物扩增内蒙古分离株的SEA基因序列。经基因克隆和序列测定,表明扩增的基因片段长度为582 bp,与标准菌株ATCC13565的SEA基因片段序列相似性为100%,与GenBank上公布的金黄色葡萄球菌菌株（EF520720.1）SEA基因相似性达到99.14%。本研究结果为进一步研究建立牛乳中SEA分子检测技术奠定了实验基础。     

杜洛克猪新品系肉质特性的初步研究

对杜洛克猪新品系1-4世代同胞测定猪各项肉质性状的测定研究表明,其PH值为6.4,系水力为89％,肌内脂肪含量为3.96％,色值为15％。各项肉质指标均在育种目标规定的正常范围内,且肌内脂肪含量较高,说明该品系具有良好的肉质;世代选育未导致肉质下降,还相应改善了肉质;性别对肉质无明显影响;肉质性状间的相关与聚类分析结果表明,肌肉PH值、系水力和色值是衡量肌肉品质优劣的主要指标,而水份与脂肪含量是反映肉质风味的重要指标;随着胴体品质提高呈现肉质下降的趋势。     

牛乳腺炎无乳链球菌Pgk基因抗原优势区原核表达产物的抗原性分析

为了探索牛乳腺炎无乳链球菌磷酸甘油酸激酶（Phosphoglycerate kinase,Pgk）基因编码蛋白的抗原性,根据GenBank公布的牛源无乳链球菌Pgk基因序列,设计并合成一对引物,通过PCR扩增出Pgk蛋白抗原优势区的编码序列,并对其进行克隆、测序、转化、诱导表达及抗原性鉴定。结果显示克隆的Pgk基因序列含有984 bp,编码328个氨基酸残基。临床分离株与GenBank上公布的B群无乳链球菌菌株Pgk基因（AE009948）核苷酸序列同源性为99.09%,氨基酸序列同源性为99.69%。将扩增的Pgk基因片段克隆至原核表达载体pET30a（＋）中,构建重组表达载体Pgk-pET30a（＋）,再将筛选的阳性重组质粒转化至BL21工程菌,经IPTG诱导获得部分可溶性表达Pgk重组蛋白。经Ni2＋亲和层析柱纯化得到纯度在90%以上的蛋白,经Western blot分析结果表明,重组蛋白具有良好的抗原性,为进一步探索其对奶牛的免疫原性研究奠定了良好的实验基础。     

猪δ冠状病毒西安株M基因序列的信息分析

为研究猪δ冠状病毒(PDCoV)西安株M基因的遗传特征,以分离并鉴定的PDCoV西安株(CHN-XA18-35株)为材料,根据GenBank中已发表的PDCoV M基因保守序列设计引物,经RT-PCR扩增PDCoV西安株M全基因序列并测序,应用生物信息学方法对M基因进行分析。结果显示,CHN-XA18-35株M基因序列与其他地区PDCoV参考株的核苷酸同源性为98.47%~99.54%,推导的氨基酸序列同源性为97.24%~99.08%;CHN-XA18-35株与其他地区PDCoV参考株相比,M蛋白第189位氨基酸由异亮氨酸(IIe)突变为精氨酸(Arg);CHN-XA18-35株M蛋白的10-27、34-56、66-87位氨基酸属于跨膜区;跨膜区氨基酸多为疏水性氨基酸,且存在α-螺旋;潜在的B细胞抗原表位位于M蛋白的102-107 aa(LSPESR)、149-158 aa(NGISVRNPPQ)、200-209 aa(LHTITTSKAG)。结果表明,CHN-XA18-35株M蛋白第189位氨基酸发生了突变,其B细胞抗原表位与其他PDCoV株相比未发生改变。     

异源抗原在建立ELISA检测传染性法氏囊病毒抗体中的应用

本文报告采用ｖｅｒｏ细胞增殖的ＩＢＤＶ抗原建立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），用于定量检测鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）抗体。该法快速、敏感性高、特异性强、重复性好。同时，通过３０份血清样品ＥＬＩＳＡ效价（ＥＴ）的对数值（ｌｏｇＥＴ）与血清Ｐ／Ｎ值（待检血清ＯＤ值与阴性血清ＯＤ值之比）的线性回归分析，得直线方程ｙ＝３．０５８９＋０．０７３９ｘ（ｒ＝０．９１７４），从而血清样品的ＥＴ可通过血清单一稀释度的Ｐ／Ｎ值来计算。用不同来源抗原作ＥＬＩＳＡ表明，从ｖｅｒｏ细胞增殖的抗原比从鸡胚成纤维（ＣＥＦ）细胞增殖的抗原可提高检测血清ＯＤ值近２０％，表现出异源抗原具有更高的特异性