马褂木ISSR-PCR扩增体系的优化

【目的】建立稳定的马褂木ISSR-PCR扩增体系,为马褂木种群ISSR多样性分析提供技术支持。【方法】采用单因素试验对ISSR-PCR扩增体系中的MgCl2、dNTPs、引物浓度、TaqDNA聚合酶、DNA模板用量和退火温度等主要因素进行筛选优化。【结果】采用试剂盒方法提取马褂木叶片DNA的效果优于改良CTAB法,最优PCR反应体系为：总体积20.0μL中含有10×Buffer2.0μL、MgCl21.8mmol/L、dNTPs0.2mmol/L、引物0.5μmol/L、TaqDNA聚合酶1.00U、DNA模板60ng、退火温度59.1℃。【结论】优化后的马褂木ISSR-PCR扩增体系能够扩增获得清晰、稳定的条带,可满足马褂木种群ISSR多样性分析的要求。     

三七ISSR-PCR反应体系建立及优化

 为建立和优化三七 ISSR PCR反应体系,运用正交试验和单因子试验分析模板DNA,TaqDNA聚合酶、引物、Mg2+和dNTPs 5个因子对ISSR PCR反应影响。结果发现,三七 ISSR PCR 25μL反应体系中5个因子最佳水平：DNA模板为9.6ng,TaqDNA聚合酶为2.0u, Primer浓度为1.0mmol/L,dNTPs浓度为0.68mmol/L,Mg2+浓度为2.8mmol/L。研究结果为利用ISSR分子标记技术研究三七提供了理论支持。     

冬虫夏草ISSR-PCR反应体系的建立与优化

为进一步研究冬虫夏草的遗传多样性,试验采用改良的CTAB法提取高质量DNA模板,克服了冬虫夏草中富含多糖、蛋白、盐类和色素的影响。建立并优化了冬虫夏草ISSR-PCR最适反应体系,即在25μL体系中反应物的含量分别为:10×PCRBuffer 2.5μL,模板DNA20 ng,引物0.9μmol/L,dNTP 0.12 mmol/L,Mg2+1.5 mmol/L,Taq DNA聚合酶0.5 U,引物835号的最适退火温度为50.8℃。结果表明此反应体系标记位点清晰、稳定、重复性好。     

韭菜ISSR-PCR反应体系的优化

通过优化韭菜ISSR-PCR反应的主要参数,确定韭菜ISSR反应体系和扩增条件及引物适宜的退火温度。结果表明,10μL反应体积中,各主要成分的添加剂量分别为:10×Buffer1μL,20ng/μL的模板DNA1μL,0.6mmol/L引物3.3μL,10mmol/L的dNTP0.4μL,25mmol/L的MgCl20.5～0.6μL,2.5U/μL的Taq酶0.2μL,双蒸水3.5～3.6μL。引物适宜的退火温度均高于其Tm值2～4℃。     

麂角杜鹃ISSR-PCR反应体系的优化

采用改进的SDS法提取麂角杜鹃基因组DNA,利用单因素试验测试模板DNA、Mg^2＋、dNTP、BSA、引物、Taq酶等条件因子对麂角杜鹃ISSR—PCR扩增结果的影响。试验表明,麂角杜鹃ISSR分析的最适PCR反应条件为,10μl PCR反应体积中含：1×Taq酶配套缓冲液（10mmol／L Tris·HCl,pH值9．0,50mmol／L KCl,0．1％ Triton X-100）,5ng模板DNA,1．0mmoL／L MgCl2,0．4mmol／L 4×dNTP,1mg／ml BSA,5pmol引物,0．25U Taq酶。利用所建立的优化反应体系对浙江省大明山4个麂角杜鹃种群共84个个体进行遗传多样性分析,结果显示其总的多态位点百分率为88．07％,Nei指数为0．3099,Shannon信息指数为0．4640,表明麂角杜鹃种群遗传多样性处于较高水平。     

吴茱萸ISSR-PCR反应体系优化

[目的]建立吴茱萸ISSR-PCR最佳反应体系。[方法]采用改良的CTAB法提取吴茱萸基因组DNA,研究模板DNA、dNTPs、Mg^2＋、引物（U834）、Taq DNA聚合酶的浓度对ISSR-PCR扩增结果的影响。[结果]20μl反应体系中含2μl 10×PCR buffer,0.15 mmol/LdNTPs,1.6 mmol/L Mg^2＋,0.4 mmol/L引物,20 ng模板DNA,1.2 U Taq DNA聚合酶。[结论]为研究吴茱萸种质资源遗传多样性和分子鉴定奠定了技术基础。     

青钱柳ISSR-PCR反应体系的优化

采用改进的SDS法提取青钱柳基因组DNA,测试青钱柳ISSR扩增的最适退火温度,并采用单因素试验,测试了模板DNA、Mg2+、dNTP、BSA、引物\Taq酶6个因素对青钱柳ISSR扩增的影响。结果表明:合适的退火温度为56.3℃;适宜的扩增体系为:10μlPCR反应体积中,1×Taq酶配套缓冲液浓度为(10 mmol/LTris.HCl,pH值9.0,浓度为50 mmol/LKCl,0.1%Triton X-100),12 ng模板DNA,浓度为1.5 mmol/LMgCl2,浓度为1.0 mmol/L4×dNTP,1mg/ml BSA,15 pmol引物,0.75 UTaq酶。     

春兰ISSR-PCR反应体系的建立和优化

[目的]为进一步从分子水平上研究春兰种群的遗传多样性奠定基础。[方法]以春兰基因组DNA为模板,通过单因子试验研究ISSR反应体系中主要成分对扩增结果的影响,以寻找适合春兰ISSR分析的反应体系。[结果]春兰的ISSR反应体系较适宜的扩增条件为:25lμPCR反应体积中,15.78μl双蒸水,2.5μl 1×CR buffer,1.1 UTaqDNA聚合酶,100 ng基因组DNA,2.0 mmol/L MgCl2,150μmol/LdNTPs,2μmol/L引物。最佳扩增程序为:94℃预变性5 min,然后进行40个循环;94℃变性45 s,复性温度比各引物的TM值略低1~2℃,45 s,72℃延伸75 s,循环结束后72℃延伸7 min,4℃保存。[结论]该优化系统的建立为进行春兰鉴定及种质遗传多样性分析提供了一个标准化程序。     

大花君子兰ISSR-PCR反应体系的建立与优化

以大花君子兰为材料研究了PCR反应体系的主要成分及退火温度对君子兰ISSR扩增结果的影响,并对影响PCR反应体系的主要成分及退火温度进行筛选和优化,确立了适合君子兰ISSR-PCR分析的最佳反应体系:在20μL的反应体系中,Mg2+为2.0 mmol/L,模板DNA用量为50 ng/μL,Taq酶0.4 U,dNTPs浓度为0.15 mmol/L,引物浓度为0.4 mmol/L。筛选出了13个适宜君子兰遗传分析的ISSR引物,确定最适宜退火温度为52~56℃。     

正交设计优化杂交油菜ISSR-PCR反应体系研究

采用正交设计法优化适合于杂交油菜的ISSR体系,对影响ISSR-PCR的多个因素,包括Mg2+、dNTP、TaqDNA聚合酶、引物用量等进行了比较、优化;对DNA模扳浓度,退火温度进行了筛选。结果确定了杂交油菜ISSR-PCR反应体系的最佳方案为:94℃预变性5分钟,1个循环;每个循环94℃变性20s;56.2℃退火1分钟,72℃延伸80s,38个循环;72℃完全延伸6分钟;4℃保存。20μl PCR反应体系包括10×Buffer 2.5μL、模板20ng 1μl、2.5mmol/L dNTP1μl、10μmol/L Primer 1.2μl、5U TaqE0.2μl、25mmol/L Mg2+1.4μl。     

HPLC法测定薏苡非种仁部位薏苡素的含量

[目的]建立薏苡非种仁部位中薏苡素的HPLC测定方法。[方法]采用高效液相色谱法。色谱柱为AgilentHC-C18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）;流动相为乙腈-0.1%磷酸水（V∶V=25∶75）;流速为1.0ml/min;柱温为25℃;检测波长为232nm。[结果]薏苡非种仁部位中薏苡素的含量：根〉皮〉茎。[结论]该方法准确、专属性强,可为薏苡非种仁部位的综合开发利用提供参考。     

RP-HPLC法测定薏苡中薏苡素的含量

采用HPLC法,以Diamonsil(R)C_(18)为色谱柱,乙睛-水(50∶50)为流动相,流速1 mL/min,柱温25℃,检测波长232 nm,建立了薏苡非种仁部位中薏苡素的高效液相含量测定方法.结果表明:薏苡素在0.096～1.92μg范围内呈良好的线性关系,该方法的平均回收率为99.12%(n=5),相对标准偏差(RSD)为0.89%,用此条件测得成都华西植物园中薏苡全草中薏苡素的含量为8.3078 mg/g.从成分薏苡素和资源综合利用的角度考虑,建议薏苡根、茎和叶可以入药.

Abstract：

To establish an RP-HPLC procedure for determining the content of coixol in the root,stem and leaf of Coixlacryma-jobi L.var.mayuen(Roman.) Stapf. Methods The Diamonsil(R)C_(18) col-umn was used with the mobile phase of acetonitrile-water (50: 50), a flow rate of 1 mL/min, a tempera-ture of 25℃and a wavelength of 232 nm. Results The linear range of coixol was 0.096-1.92μg. The av-erage recovery was 99.12% (n=5, RSD is 0.89 %). Coixol in the herbal of C. Lacryma-jobi L. Var. Mayue in the Botanical Garden of West China was 8.3078 mg/g. Conclusion This method proved to be simple, accurate,well replicable, and suitable for the determination of C.lacryma-jobi L.var.mayuen(Roman.) Stapf.     

8种中药提取物对薏苡灰霉病菌的抑制作用

采用生长速率法和倍比稀释法测定了8种中药提取物对薏苡(Coix lacroyma-jobi L.var.ma-yuen ( Roman.))灰霉病菌(Botrytis cinerea)的生物活性.结果表明,在浓度为1.0 g/mL时,丁香(Eugenia aromatica Baill)、辛夷(Magnoliab iondii Pamp.)、商陆(Phytolacca acinosa Roxb.)提取物对薏苡灰霉病菌抑菌率达100％;北豆根(Menispermum dahuricmn DC.)、萝藦[Metaplexis japonica (Thunb.) Mark.]、甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)、艾蒿(Artemisia argyi Levl.et Van.)提取物的抑菌率分别为76.3％、76.3％、69.7％、33.8％;天南星(A ris ae ma amurense Maxim.)提取物对薏苡灰霉病菌没有抑制作用;丁香、辛夷、商陆的最小抑制浓度依次为0.062 5、0.125 0、0.500 0 g/mL.     

薏仁的生态生物学特性及盐土栽培技术

阐述了薏仁的用途、植物学形态特征、资源分布、生态效应等,从选种及种子处理、播种、田间管理、病虫害防治等方面总结了薏仁在盐土上的栽培技术,以供参考。     

薏苡的生育特点与高产栽培技术

通过对薏苡（ＣｏｉｘＬａｃｒｙｍａ－ｊｏｂｉＬ．ｖａｒ．ｆｒｉｕｍｅｎｔｅａｃｅＭａｋｉｎｏ）的植物学特征、生物学特性和高产栽培技术进行研究，提出亩产４００～５００ｋｇ，需选用矮秆小粒品种和肥水条件良好的地块，每亩留苗５５００～１１０００株，亩施纯Ｎ１８．７～２３．５ｋｇ，Ｐ２Ｏ５１２．４～１４．６ｋｇ，Ｋ２Ｏ２２．２～２４．７ｋｇ。     

丝瓜ISSR-PCR反应体系的优化

以丝瓜为研究材料,通过单因素试验结合正交设计研究ISSR-PCR反应的影响因素,建立反应体系.结果表明;在20 μL的反应体系中,含2.0 μL 10×buffer,1.5 U TaqDNA聚合酶,0.25 mmol·L-1dNTPs,0.35 μmol·L-1引物,30 ng模板DNA,为丝瓜ISSR-PCR分析的最...     

薏苡遗传育种研究进展

我国现有薏苡品种普遍存在产量低、易倒伏、晚熟、抗病虫性弱等问题,缺乏优质薏苡新品种,严重制约了薏苡生产的发展。因此,从薏苡种质资源、杂交育种、组织培养及倍性育种、人工诱变育种4个方面,综述了近年来薏苡遗传育种的研究现状和进展。针对当前育种存在的问题,应以种质资源为基础,结合常规育种、现代生物技术育种,建立一套完整的选育体系。     

薏苡分子生物学研究进展

目前关于薏苡分子生物学方面的研究虽然相对其他作物起步较晚,但也取得了一些重要进展。从分子标记、功能基因和基因组测序3个方面综述了国内外关于薏苡的分子生物学研究,讨论了薏苡分子水平研究的现状和发展方向,为其分子生物学进一步研究提供参考。     

薏苡花粉母细胞减数分裂过程的观察

薏苡在主茎第１．２片完全叶露尖时花粉母细胞减数分裂开始，最后一片叶露尖时四分体形成。雄穗中部最先开始减数分裂，然后依次向上、向下开始；每小穗的第２朵小花比第豆朵小花先开始减数分裂；同一花药内的花粉母细胞减数分裂不同步。四分体多为左右对称型，少数为Ｔ型、直列式、交叉式。成熟花粉粒为三细胞花粉，具有１个萌发孔。     

福建野生薏苡与栽培薏苡的种子发芽比较研究

利用福建省野生与栽培薏苡进行不同机械处理、不同温度、不同芽床、不同药剂下发芽率试验,结果表明,薏苡脱壳后可以显著提高发芽率,在25℃下发芽率最高,药剂以HNO3处理最佳,芽床因不同薏苡而表现一定差异.