大鲵虹彩病毒的分离纯化及其MCP基因序列分

【目的】确定陕西省略阳县某大鲵养殖场高致死性疾病的病原,分析其主要衣壳蛋白(MCP)的基因特征。【方法】采集患病大鲵,观察其临床症状,取其脏器组织,处理后分别分离细菌和接种鲤鱼上皮瘤(EPC)细胞,观察细胞病变,分离病毒;对病原进行增殖,采用蔗糖密度梯度(20%,30%,40%,50%,60%)离心法进行纯化,电镜观察纯化样品。克隆分离病毒的MCP基因,测定其序列并进行系统进化树分析。【结果】患病大鲵背部有溃疡、头部胀大且有出血点,尾部有轻微的溃烂。取病鲵内脏组织样品分离病原,未分离到细菌;处理的内脏组织感染EPC细胞,出现细胞病变。电镜观察证实,在蔗糖密度梯度为50%~60%的样品中,病毒粒子的纯度最高,且结构较为完整;病毒粒子的直径约150nm,与虹彩病毒相似。MCPPCR扩增得到了预期长度(1 392bp)的特异性产物。NCBI BLAST结果显示,扩增的MCP序列与蛙病毒属的感染性造血器官坏死病毒(EHNV)、食用蛙病毒(RSV)、普通产婆蟾病毒(CMTV)以及梭鲈虹彩病毒(PPIV)的MCP全长的同源性最高,达到99%;与中华鳖虹彩病毒(STIV)、蛙病毒3型(FV3)、虎纹蛙虹彩病毒(RTV)等MCP全长的同源性为98%。系统发育分析结果显示,导致该例大鲵发病的病毒为蛙病毒属的虹彩病毒。【结论】造成陕西省略阳县某大鲵养殖场大鲵大量死亡的病原为蛙病毒属的虹彩病毒,将该株病毒命名为大鲵虹彩病毒略阳分离株(CGSIV-LY1112)。     

中华鳖市场分析及其养殖对策

中华鳖 ,俗称甲鱼、团鱼、水鱼、脚鱼 ,自古以来是我国传统的美味佳肴。随着人民生活的提高 ,对中华鳖的市场需求量直线上升。至 2 0世纪 90年代初期 ,工业化温室养鳖设施及养殖工艺的突破和推广 ,大大促进了工厂化温室养鳖业的发展。特别是在发展初期 ,鳖价猛增几倍 ,养鳖的丰厚收入 ,更进一步刺激了养鳖业的无序发展 ,形成全国性的“养鳖热”。然而 ,随着市场商品鳖数量急剧增加 ,以及境外“泰国鳖”、“越南鳖”等外来鳖种低价向国内倾销 ,中华鳖市场竞争激烈 ,鳖价大幅度下降。面对竞争 ,有些单位采用不适当的养殖工艺 ,致使商品鳖产生…     

中华鳖市场分析及其养殖对策

中华鳖 ,俗称甲鱼、团鱼、水鱼、脚鱼 ,自古以来是我国传统的美味佳肴。随着人民生活的提高 ,对中华鳖的市场需求量直线上升。至 2 0世纪 90年代初期 ,工业化温室养鳖设施及养殖工艺的突破和推广 ,大大促进了工厂化温室养鳖业的发展。特别是在发展初期 ,鳖价猛增几倍 ,养鳖的丰厚收入 ,更进一步刺激了养鳖业的无序发展 ,形成全国性的“养鳖热”。然而 ,随着市场商品鳖数量急剧增加 ,以及境外“泰国鳖”、“越南鳖”等外来鳖种低价向国内倾销 ,中华鳖市场竞争激烈 ,鳖价大幅度下降。面对竞争 ,有些单位采用不适当的养殖工艺 ,致使商品鳖产生…     

新加坡石斑鱼虹彩病毒ORF086蛋白的原核表达、纯化及抗体制备

新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)是导致石斑鱼养殖严重经济损失的主要病原体。本研究构建了含有新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)ORF086基因的重组表达质粒载体pET32a-ORF086,将其转化到大肠杆菌中进行融合表达,经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,证实重组大肠杆菌融合表达了SGIV ORF086蛋白。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isoprophl-thio-β-D-galactopyranoside,IPTG)浓度、诱导温度、诱导时间等诱导表达条件的优化,确定在0.7 mmol/L IPTG、16℃诱导14 h时可溶性SGIV ORF086重组蛋白占重组蛋白的60%。经镍琼脂糖凝胶柱纯化重组蛋白,纯化度达95%以上。用纯化的SGIV ORF086蛋白免疫小鼠,获得了高效特异的SGIV ORF086抗血清。     

新加坡石斑鱼虹彩病毒ORF086蛋白的原核表达、纯化及抗体制备

新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)是导致石斑鱼养殖严重经济损失的主要病原体。本研究构建了含有新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)ORF086基因的重组表达质粒载体pET32a-ORF086,将其转化到大肠杆菌中进行融合表达,经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,证实重组大肠杆菌融合表达了SGIV ORF086蛋白。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isoprophl-thio-β-D-galactopyranoside,IPTG)浓度、诱导温度、诱导时间等诱导表达条件的优化,确定在0.7 mmol/L IPTG、16℃诱导14 h时可溶性SGIV ORF086重组蛋白占重组蛋白的60%。经镍琼脂糖凝胶柱纯化重组蛋白,纯化度达95%以上。用纯化的SGIV ORF086蛋白免疫小鼠,获得了高效特异的SGIV ORF086抗血清。     

玻勒虹彩病毒单克隆抗体的制备及初步应用

为了制备抗玻勒虹彩病毒(Bohle virus,BIV)的单克隆抗体,应用杂交瘤细胞技术,制备了1株稳定分泌抗玻勒虹彩病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3A4),并对其单克隆抗体特性进行分析和初步应用。结果表明:单抗3A4腹水效价为105以上,属于Ig G3型,κ链;单抗3A4与大鲵虹彩病毒(ADIV)、流行性造血器官坏死病毒(EHNV)发生反应,与其他病毒株和细胞株不发生反应;单抗3A4可识别相对分子质量为50 000的蛋白;应用捕获ELISA方法对样品进行检测,建立的捕获ELISA方法能用于蛙病毒的检测。该单抗为BIV的快速诊断及流行病学监测提供了检测试剂。     

中华鳖的体重与形态特征的关联分析

为确定影响中华鳖体重的主要外部形态指标,对100日龄和300日龄中华鳖的背甲长、腹甲长、背甲宽及体高与体重进行了测量与分析。相关分析表明,中华鳖的背甲长、腹甲长、背甲宽及体高与其体重呈显著正相关(P<001),100日龄中华鳖腹甲长、背甲长、体高及背甲宽与体重的相关系数分别为0.891、0.651、0.907、0.671;300日龄中华鳖背甲长、腹甲长、背甲宽及体高与体重的相关系数分别为0.724、0.606、0.625、0.424。通径分析及决定系数分析表明,100日龄中华鳖腹甲长对体重的直接影响最大(R=0.541),其次为背甲长(R=0.469),腹甲长与背甲长对体重的决定程度为0.909;300日龄中华鳖体高对体重的直接影响最大(R=0.711),其次为背甲长(R=0.402),体高与背甲长对体重的决定程度为0.785。     

蛙携带虹彩病毒的分子流行病学研究

运用多重实时PCR对多地的养殖和野生蛙类携带虹彩病毒的本底展开调查,并进行病毒分型。结果表明,检测的样品平均阳性率为8.90%,养殖蛙的平均阳性率为4.57%,野生蛙的平均阳性率为16.82%。从蛙种类来看,养殖牛蛙和黑斑蛙带毒率较低,而养殖的棘胸蛙和野外捕捉的斑腿树蛙带毒率较高。不同蛙携带的蛙病毒的分子序列比较结果显示,不同来源的蛙病毒高度保守,缺乏明显的宿主与地域特异性,表明人工繁育场暴发虹彩病毒可能对其他野生蛙类资源产生了负面影响,建议在野生动物人工驯养繁殖体系中引入病害监测和疫病防控措施。     

中华鳖养殖池塘水质的昼夜变化研究

对中华鳖池塘夏季主要水质因子进行昼夜连续监测,通过相关性分析发现气温与水温、气温与pH、气温与溶解氧(DO)、气温与氨氮(NH_4~+-N)、水温与pH、水温与DO、水温与NH_4~+-N、透明度与pH、pH与DO、pH与NH_4~+-N、DO与NH_4~+-N在0.01水平上显著相关,气温与透明度、NH_4~+-N与亚硝酸氮(NO_2~--N)在0.05水平上显著相关。通过回归分析发现,气温(A)与DO(D)函数关系为D=0.649A-12.729(R~2=0.900,P<0.01),一元回归关系达到极显著水平;pH(H)与DO(D)函数关系为H=0.015D~2-0.021D+6.59(R~2=0.900,P<0.01),二元回归关系达到极显著水平,该研究结果可为指导中华鳖池塘养殖提供参考。     

甲鱼对蛋白质的需求量及其消化利用

以酪蛋白为蛋白源，配合成蛋白含量分别为３５％，４０％，４５％，５０％和５５％的系列标准试验饲料，以稚鳖为试验对象，经６０天的饲育试验，观测到以４０％－５０％含量的区组增重效果较好，其中４５％含量组增重率最高，在以鱼粉和豆粕为蛋白质源，配合成的租蛋白质含量都为４５％的不同组合的饲育试验中，以５９％鱼粉与４５％豆粕的配合组饲料消化率与增重率为最高，饲料系数为最低。随着豆粕添加量的增加或减少，增重率也随之减低，这表明，甲鱼对豆粕蛋白的利用能力较低，在以鱼粉为主要蛋白源的饲料中，添加５％豆粕，能起蛋白质互补效应，但添加过量反而影响饲料蛋白质的利用率．     

养殖池种植凤眼莲对左江鳖幼鳖生产性能的影响试验

采用对比法,研究在池塘面积、养殖密度、养殖池底质和养殖饲料相同的条件下,养殖池水面种植一定面积的凤眼莲对左江鳖稚鳖培育养殖成活率、增重量、饲料系数的影响。结果表明,在左江鳖养殖的稚鳖培育阶段,在培育水体中种植风眼莲可以营造一个适合稚鳖健康生长的生态环境,能获得较高的养殖成活率、增重量和较低的饲料系数,收获的幼鳖体色光鲜,无疖疮、腐皮等现象,鳖体生猛活泼,攻击性强,应在稚鳖培育中推广应用。     

不同池塘环境和饲料条件对中华鳖生产性能及经济效益影响试验

研究不同的池塘养殖环境及饲料条件对中华鳖的养殖成活率、增重量、饲料系数、经济效益和成品鳖外观性状的影响。结果表明,选择软泥底的池塘底质、用木板或竹板制成晒背台和饵料台、池塘水面种植一定面积的水浮莲、投喂福寿螺肉和小杂鱼虾的池塘养殖的中华鳖生产性能最好、经济效益最高,成品鳖外观体色光鲜,裙边硬,体态生猛,在中华鳖的养殖生产中值得推广应用。     

甲鱼的营养价值与保健功效研究

阐述了国内外有关甲鱼营养成分和保健功效方面的研究成果,并对甲鱼的进一步开发利用提出了建议和意见.     

甲鱼的酶解液化及保健冲剂研究

对甲鱼的酶解液化技术和以甲鱼酶解液化液为主要原料制备甲鱼保健冲剂的生产工艺进行了研究。通过对比试验和正交试验 ,确定了甲鱼的最适水解酶是胰蛋白酶 ,最适酶解条件是甲鱼加 10倍水 ,经高压蒸煮15 m in,在酶浓度 (E/ S)为 6 .4 g/ kg,温度 4 5℃ ,p H7.5条件下水解 6 h,甲鱼水解液化较为彻底。甲鱼保健冲剂的优选配方为 :甲鱼酶解液 6 5份 ,糖 2 8份 ,奶粉 2 0份 ,固形物 12 5 g/ kg的药食同源提取物 2 2份 ,环麦芽糊精 6份 ,柠檬酸 1.5份 ,产品的冲调性、色泽、风味、口感都较好。采用该法生产的酶解甲鱼固体冲剂具有动植物营养成分和保健功能成分互补、利于人体吸收、保健性能优良、风味独特的特点。     

雷氏普罗威登菌引致中华鳖脏器脓肿

江苏省某养殖场饲养的中华鳖发生败血症，特征为肺脏、脾脏等内脏广泛形成干酪样结节。从病鳖内脏分离到一种革兰氏阴性杆菌，兼性厌氧，丙氨酸脱羧酶阳性，利用柠檬酸盐、吲哚和甲基红反应均为阳性，发酵甘露醇、肌醇、甘露糖，产酸。经经鉴定为雷氏普罗威登菌（Providencia rettgeri)。药敏试验表明，该菌对羧苄青霉素、先锋霉素、SMZ＋TMP、氟哌酸、恩诺沙星敏感。以分离菌腹腔注射感染健康中华鳖，接种鳖1周后陆续发病死亡，并从其体内分离到同种细菌。     

海洋捕捞误捕海龟问题及其管理研究

海龟是海洋生态系统的重要组成部分,世界现存海龟仅有2科6属7种,且都处于濒危状态,国际上十分重视海龟保护工作。在海洋渔业捕捞活动中,经常误捕到海龟,捕虾拖网、刺网、延绳钓渔业对海龟资源的误捕和伤害性最大。目前,国际上已形成了以联合国粮农组织(FAO)为主导,各区域性渔业组织及捕鱼国政府部门为管理主体的法律政策框架,制定通过了一系列有关海龟养护、减少海龟误捕及伤害的决议性文件。主要的管理手段有:渔民培训、渔具渔法优化设计、信息收集与交流、港口检查措施、观察员制度、规范渔捞日志等。在技术措施方面,拖网捕捞中的"海龟逃生装置"、刺网捕捞中的"窄网"和提高拉杆长度、延绳钓渔业中采用的圆形钓钩和鲐鱼饵料,都产生了积极的效应。我国的渔业管理制度对减少渔业活动中的海龟误捕伤害涉及不多,研究很少,缺乏具体的法律法规来指导,亟需完善。建议:(1)普及基于生态系统的渔业管理方法和理念;(2)不断加强信息交流与合作;(3)制定可行的管理标准,并使用市场机制;(4)相应的控制手段要适当,并与其他措施相结合;(5)渔民培训与保育观念的宣传。我国已经开始重视发展可持续性渔业,为进一步规范海洋捕捞、减少对海龟等珍稀物种的伤害误捕提供了契机,如何与国际社会的管理"接轨",实现海洋生物多样性与渔民生计的"双赢",都是需要管理部门着重考虑的。     

中华鳖肉脂品质的研究

测定了中华鳖肌肉和油脂块的水分、蛋白质和脂肪含量、肌肉的矿物质和氨基酸含量、肌肉和油脂块的脂肪酸组成。结果表明：肌肉的蛋白质和脂肪含量分别为18.21%和1.23%,油脂块的脂肪含量为86.72%;肌肉中微量元素含量丰富,其中铁和铬含量分别为380.13 mg/kg和1.08 mg/kg;肌肉的必需氨基酸和鲜味氨基酸含量分别占氨基酸总量的46.94%和45.45%,其中鲜味谷氨酸和天门冬氨酸含量最高,分别为11.90%和7.94%;肌肉和油脂块中高度不饱和脂肪酸含量分别占脂肪酸总量的30.18%和24.96%,其中肌肉的EPA和DHA含量分别高达9.93%和9.12%。在上述研究结果的基础上,评价了中华鳖的营养价值和保健价值。     

马尾藻褐藻多糖硫酸酯的分离纯化及结构研究

为研究马尾藻Sargassum褐藻多糖硫酸酯的组成及结构,以马尾藻褐藻多糖硫酸酯粗品为原料,利用DEAE-Sepharose Fast Flow弱阴离子交换层析对粗品进行分离纯化,采用高效液相色谱法(HPLC)对粗品(F)及纯化后的两个组分(F0、F1)进行了单糖组成分析,同时利用红外光谱法、核磁共振波谱法研究了F0及F1的多糖结构。结果表明:用高效液相色谱法对单糖衍生物的分离效果良好,F、F0、F1均含有甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、岩藻糖;红外光谱分析显示,F和F0的硫酸基主要连接于岩藻糖的C2和C3位置。本研究结果可为马尾藻褐藻多糖硫酸酯的生物活性研究奠定基础。     

桑葚花色素甙的提纯和分析

为了探讨用于分析有色植物的花色素甙成分的简易迅捷方法,采用酸性乙醇浸提桑葚中的花色素甙,以黑米的花色素甙提取物为参照标准,选用聚酰胺薄膜圆盘层析对提取物进行定性定量分析.桑葚花色素甙的主要成分为矢车菊花色素-3-O-葡萄糖甙.聚酰胺薄膜圆盘层析测定有色植物中的花色素甙含量简便、快捷、准确、可靠,适用于花色素甙的初步鉴定,并可用于野外分析.