猪肺炎支原体黏附蛋白的研究进展

猪肺炎支原体是导致猪慢性肺炎的致病因子,其致病过程主要由表面黏附蛋白介导完成。综述了肺炎支原体表面黏附蛋白（P36、P46、P65、P97、P102、P110、P159和P216）的研究进展,为猪慢性肺炎的治疗和诊断研究奠定了基础。     

不同MBL基因型绵羊感染绵羊肺炎支原体后的免疫相关因子表达规律分析

将32只2月龄中国美利奴羊人工感染绵羊肺炎支原体(MP),分别在攻毒前1 d(-1 d)、攻毒后1 d、7 d、14 d和21 d收集新鲜抗凝血,提取总RNA后应用Real-time PCR的方法定量检测细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ、TNF-α,补体C1、C3和甘露糖结合凝集素(MBL)。结果表明,不同MBL基因型绵羊攻毒感染后血清MBL浓度呈下降趋势,其中MBL浓度较高的C型和D型绵羊,其促炎因子IL-2、IFN-γ浓度较高,抗炎因子IL-4在攻毒后1d呈升高趋势,此后开始下降;MBL浓度较低的A型和B型绵羊,攻毒后其TNF-α浓度升高显著,随炎症的舒缓,逐渐降低;补体C1和C3在攻毒后表现出不同的变化,证实MP感染后,激活补体途径,可能与MBL的浓度变化有关。     

绵羊肺炎支原体p128基因序列分析及原核表达

为进一步探究绵羊肺炎支原体P128蛋白的相关功能,在进行生物信息学分析的基础上,对编码p128的部分基因片段进行了PCR扩增、克隆和原核表达,并采用Western-blot方法对其免疫原性进行了分析。结果显示,p128基因与猪肺炎支原体黏附素基因p146高度同源;克隆基因在大肠杆菌Rosetta(DE3)中成功获得表达,重组蛋白以包涵体的形式存在;经纯化的重组蛋白与抗绵羊肺炎支原体全菌血清发生结合反应,表明P128蛋白是良好的免疫原。研究结果为进一步分析其功能及绵羊肺炎支原体血清学诊断技术的建立提供了有用的信息。     

绵羊肺炎支原体P113蛋白N端原核表达及其抗原性分析

绵羊肺炎支原体可感染绵羊及山羊,并导致非典型肺炎的发生.P113蛋白是绵羊肺炎支原体推测的粘附素,为进一步研究P113蛋白的功能,本试验对其N端1～231位氨基酸的片段进行了原核表达,并采用Western b1ot方法对P113蛋白免疫原性进行了分析.结果显示,重组蛋白以包涵体的形式在Rosetta(DE3)工程菌中成功获得表达;经纯化的重组蛋白与抗绵羊肺炎支原体全菌血清发生特异性结合反应,表明P113蛋白是良好的免疫原.     

牛支原体GAPDH定点突变、原核表达及生物学特性初步分析

根据已发表的牛支原体GAPDH基因序列设计引物,从牛支原体湖北分离株扩增出GAPDH基因,亚克隆于载体pET-30a。设计定点突变引物,采用环状PCR法对载体上GAPDH基因进行两轮定点突变,原核表达突变成功的重组质粒,获得重组牛支原体GAPDH蛋白,经Western-blot证实该重组蛋白具有较好的反应原性,为其在牛支原体病防控中的应用奠定了基础。     

绵羊支原体肺炎的诊治

1　发病情况　 2 0 0 1年 1月 ,靖江市郊区一养羊户从浙江省某地调进湖羊 1 0 6只 (其中母羊 1 0 1只 ,多为怀孕绵羊 ) ,入场后第 5天发现一只公羊流浆液性鼻涕 ,咳嗽 ,体温升高 ,食欲减退 ,经常反复。到第 2 0天 ,部分母羊体温升高、不食 ,后经紧急治疗 ,疫病得到有效控制 ,共     

猪肺炎支原体SC株P46基因的定点突变

猪肺炎支原体P46基因中有3个密码子TGA用于编码Trp而非终止密码子,为了在原核表达系统中进行猪肺炎支原体P46基因的根表达,根据其序列设计了3对引物,采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)的方法将编码密码子TGA同义突变为TGG.将突变后的P46基因克隆至pEasy-T载体中,并进行测序.测序结果表明将P46基因中的TGA密码子突变为TGG很成功.     

猪肺炎支原体黏附因子基因R1R2区的克隆及表达

根据GenBank登录的猪肺炎支原体232株P97基因和J株黏附因子基因设计了1对引物，以我国猪肺炎支原体Z株(强毒株)基因组DNA为模板，通过PCR方法扩增了该株黏附因子基因的部分序列。经序列分析后，重新设计了1对带有EcoRI和HindⅢ酶切位点的引物，并经引物的定点突变，PCR扩增了Z株黏附因子的R1R2区。扩增产物经双酶切后克隆到表达载体pET-32(a) 中。该重组质粒经酶切鉴定后，将其具有正确阅读框架的重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，37℃下经IPTG诱导表达，得到相对分子质量约29000的融合蛋白，表达量约为11％。     

绵羊肺炎支原体的研究进展

文章介绍了绵羊肺炎支原体的病原特征、致病性及致病机理、疫苗研制情况,并提出加强研究的方向,为该病的防治及疫苗开发提供参考。     

绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

【目的】克隆绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)EF-Tu基因,原核表达获得EF-Tu蛋白,制备抗EF-Tu蛋白的兔源多克隆抗体,为研究肺炎支原体EF-Tu蛋白的结构和功能奠定基础。【方法】采用重叠延伸PCR方法将pET-28a-EF-Tu质粒中EF-Tu基因中间的TGA密码子突变为TGG,并对测序结果与其他支原体参考株进行相似性比对和遗传进化分析,利用在线软件对其推测的蛋白序列进行生物信息学分析。将突变后的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行原核表达,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定,利用镍柱亲和层析法纯化,以纯化的EF-Tu融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA和Western blotting检测多克隆抗体效价及免疫反应性。【结果】试验成功突变了EF-Tu基因中TGA位点,并构建了融合表达His标签pET-28a-EF-Tu′原核表达载体。生物信息学分析表明,克隆的EF-Tu基因与绵羊肺炎支原体MoGH3-3菌株相似性最高,亲缘关系最近;编码387个氨基酸,无N-糖基化位点和跨膜区域,存在10...     

绵羊肺炎支原体的培养与提纯

试验用改进的Ｈａｒｔｌｅｙ氏消化汤培养基,培养绵羊肺炎支原体效果较好,一般在菌体复苏后２４～４８ｈ即可使培养基ｐＨ值下降至６．９左右,同时建立了操作简单,省时,省力,染色效果良好的支原体复红染色法和提纯绵羊炎支原体抗原的具体方法。     

猪肺炎支原体P159蛋白的截短表达及黏附活性研究

为了解猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)P159蛋白的黏附活性,本实验利用PCR从Mhp NJ株扩增P159基因片段(3’端),克隆于pET-28a(+)进行表达,并用表达的截短蛋白进行黏附试验。结果表明,PCR扩增的目的基因片段约为450 bp;SDS-PAGE检测重组蛋白分子量为46 ku;western blot检测表明该重组蛋白能够与Mhp阳性血清发生特异性反应,表明该蛋白具有良好的免疫反应原性;表达的截短蛋白与Mhp的黏附试验结果表明,该重组蛋白可以粘附于猪肺上皮细胞(SJPL)表面,并部分抑制Mhp对SJPL的粘附作用。本研究结果为Mhp致病机制的进一步研究奠定了基础。     

绵羊肺炎支原体

本文主要从绵羊肺炎支原体(MO)的特性、流行病学、致病机理、临床症状、病理变化、诊断及防治等方面进行简单的概述。     

绵羊气管上皮细胞的分离培养及绵羊肺炎支原体对其的吸附

为建立简便、高效、稳定的绵羊气管上皮细胞的体外培养及鉴定的方法,并在所培养的细胞上研究绵羊肺炎支原体侵染模型,本研究利用链蛋白酶冷消化法对绵羊气管上皮细胞进行体外分离,通过差速贴壁法纯化气管上皮细胞并进行传代后用液氮保存,细胞复苏后通过测定生长曲线、上皮细胞骨架蛋白角蛋白8和18以及对染色体与微生物的检测等对所培养细胞进行鉴定,并将鉴定纯化的气管上皮细胞用绵羊肺炎支原体进行侵染。结果显示,成功培养出绵羊气管上皮细胞,纯化的细胞在显微镜下排列紧密,形态均一,呈鹅卵石铺路样。细胞生长曲线呈S型,分子生物学手段和增菌试验未检测到气管上皮细胞中含有微生物污染,通过细胞免疫组化检测到了细胞角蛋白8、18,染色体核型数目为2n=54。绵羊肺炎支原体能黏附于分离纯化的绵羊支气管上皮细胞,为进一步研究支原体侵染细胞的机制等奠定了基础。     

绵羊肺炎支原体P110/LppT黏附素家族保守区的原核表达和免疫原性分析

绵羊肺炎支原体(Mo) NM2010株的P120蛋白与猪肺炎支原体(Mhp)的黏附素P110高度同源,同属于P110/LppT黏附素N端结构域家族。为了筛选用于研制广谱绵羊支原体肺炎疫苗的保护性抗原,本试验利用生物信息学方法对Mo NM2010株P120蛋白的保守区段、结构、B细胞抗原表位进行预测分析,并对P120基因的N端和C端2个保守区基因片段进行克隆、表达、可溶性分析和抗原特性分析;2个表达产物分别对兔进行免疫试验,用ELISA方法检测免疫兔血清抗体效价和IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ细胞因子浓度。结果显示,P120蛋白N端有信号肽和1个跨膜螺旋,亚细胞定位在外膜,可能是一种外膜蛋白,P120蛋白N端和C端2个保守区段均有较多B细胞线性抗原表位,具有较好的抗原性;经序列测定证实,合成的P120-N和P120-C 2个基因片段的基因序列完全正确,长度分别为1 509 bp和741 bp,表达的重组蛋白分子质量分别为58.1 kDa和29.5 kDa; P120蛋白N端以可溶和包涵体2种形式存在,C端以包涵体形式存在,均具有良好的抗原性;新西兰大白兔经4次免疫后,重组蛋白...     

绵羊肺炎支原体与猪肺炎支原体交叉抗原研究

为了研究绵羊肺炎支原体标准株Y98与猪肺炎支原体标准株232全菌蛋白免疫原性的异同,试验采用SDS-PAGE和免疫印迹分析技术对其进行了研究,结果表明:绵羊肺炎支原体标准株Y98同猪肺炎支原体标准株232免疫印迹结果基本一致,在70,50,40,25 ku蛋白带处存在共同抗原。     

绵羊肺炎支原体快速诊断抗原的制备及应用

绵羊支原体肺炎已成为规模化羊场中羊只发病率最高,死亡率最高的疾病之一。本试验制备出了绵羊支原体肺炎间接平板凝集诊断抗原,试验效果良好;通过实际应用,同支原体培养方法结果达100%。结果表明该诊断原可在临床上进行简单快速有效的疾病诊断。     

绵羊肺炎支原体分子致病机理研究进展

绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae,MO）引起的支原体肺炎（Mycoplasma pneumonia）是严重危害养羊业的重要呼吸道疫病。绵羊肺炎支原体感染具有隐蔽性、持续性,造成患病羊生产性能下降,严重影响养羊经济效益。综合近期国内外关于绵羊肺炎支原体分子致病机制的文献报道,从绵羊肺炎支原体与呼吸道上皮细胞黏附、致下呼吸道损伤和引起机体免疫抑制三方面进行综述,以期为后续深入研究绵羊肺炎支原体致病机理、开发新型防控技术奠定基础。     

绵羊肺炎支原体快速诊断抗原的制备及应用

绵羊支原体肺炎已成为规模化羊场中羊只发病率最高,死亡率最高的疾病之一.本试验制备出了绵羊支原体肺炎间接平板凝集诊断抗原,试验效果良好;通过实际应用,同支原体培养方法结果达100%.结果表明该诊断原可在临床上进行简单快速有效的疾病诊断.