应用免疫电镜技术检测植物病毒

免疫电镜技术是将免疫学与超微结构形态学相结合的一种新的检验技术。为了把此项新技术迅速应用到植物病毒检疫上去,我们做了一些工作,简报如下:一、抗血清和抗原制备:烟草坏死病毒(TNV)、烟草花叶病毒(TMV)、番茄不孕病毒(TAV)、苜蓿花叶病毒(AMV)、红三叶草坏死花叶病毒(RCNMV)和白三叶草花叶病毒(WCMV)的抗血清由农牧渔业部植检所血清室提供;马铃薯 x 病毒(PVX)和马铃薯 y 病毒(PVY)的抗血清由中国科学院微生物所提供,抗血清效价     

用血清学特异电镜检测种传植物病毒

众所周知许多植物病毒能通过感病植物种子传播,已知的种传植物病毒总数逐年增加。Fullton 列举大约有36种病毒通过63种植物传播;Eennett 和 Shepherd 扩大到列举有50种种传病毒;Phatak 列举85种病毒通过一种或多种寄主种子传播。种子传毒可能是病毒在一种作物上由一个生长季传到下一个生长季的最重要的途径,也是病毒接种介体最初的毒源。某种作物种子将病毒带到一个地区,在该地区如有有效的介体,则会进一步     

乳胶溶液电镜法在检测植物病毒中的应用

一、介绍乳胶溶液电镜法是植物病毒制剂,特别是未经纯化的粗提液的电镜制样法,在制备电镜样品时,在铜网上加入乳胶稀释液,以提高沾取病毒的数目,提高电镜检测的灵敏度。目前广泛用于检测未纯化植物病毒的电镜制样方法主要是二类——直沾法和免疫电镜法。直沾法出现于五十年代,由于可以简便快速的检测被侵染的植物叶片和粗提液中的     

应用免疫电镜技术检测马铃薯病毒

用免疫电镜技术检测田间有病毒症状的马铃薯叶片证实带有马铃薯 Y 病毒,马铃薯 X 病毒,马铃薯 S 病毒和苜蓿花叶病毒。用免疫电镜技术检测田间健株和人工茎尖培养的脱毒苗证明健株和脱毒苗都有部分是带毒的,只是其含毒量很低。用免疫电镜技术检测马铃薯薯块证实,用此方法可检测已萌发的单个小芽以及未萌发的休眠芽。同时证明有病毒病症状的病株,其地下薯块多数是带毒的;另同一薯块,病毒在各个芽眼之间的分布也是不均一的。     

大麦黄矮病毒PAV血清型免疫电镜检测

用免疫电镜技术对大麦黄矮病毒PAV 血清型进行了检测。病毒粗提液经过抗体IgG 的诱捕、修饰后,在电镜下观察到病毒粒体。病毒在抗体的诱捕下,产生了明显的聚集效应。单个病毒粒体周围有抗体环,病毒二聚集体之间有抗体桥存在。病毒粒体表面结构清晰,而且能够清楚地看到抗体分子与病毒表面突起的结合     

胶体金免疫电镜技术检测和鉴定病汁液中不同形态的植物病毒

 本文报道胶体金免疫电镜技术的建立:铜网捕获病毒后,用其稀释约200倍的同源抗血清修饰处理3~5分钟,羊抗兔IgG-金复合物标记3~5分钟,经磷钨酸负染,电镜下可见病毒粒子周围金颗粒特异性吸附,而背景上非特异性吸附很少。用此技术成功地快速检测和鉴定了病汁液中线状病毒(大麦黄花叶病毒,大麦温和花叶病毒,小麦梭条斑花叶病毒,芜菁花叶病连和马铃薯Y病毒)、棒状病毒(烟草花叶病毒、长叶车前草花叶病毒和土传小麦花叶病毒)以及球状病毒(水稻矮缩病毒、黄瓜花叶病毒和大麦黄矮病毒)。用0.5M PBSpH7.0制备病汁液,可大幅度提高同源抗血清对黄瓜花叶病毒的捕获能力。     

免疫电镜法测定3种Potyvirus组病毒的研究

 对大豆花叶病毒(SMA),花生斑驳病毒(PMV)和豇豆蚜传花叶病毒(CAMV)3种Potyvirus病毒进行了免疫电镜(ISEM)的测定。ISEM法同样证实了这3种病毒在血清学关系上的不同。3种病毒抗血清对同源抗原都具有"捕获"大量病毒粒体的能力,"捕获"数量是异源关系或正常血清的20~50倍.ISEM方法的灵敏度和专化性受到包被抗血清的稀释度和在抗原上处理时间等因素的影响."捕获"病毒粒体最适的抗血清稀释度是10-3或10-4;抗原处理时间,在一定范围内随处理时间的延长而增加"捕获"病毒粒体的数量,处理时间超过10-20小时即不再增加"捕获"粒体数量.同源抗体抗-抗原反应对病毒粒体上有"装饰"作用,而异源关系没有"装饰"作用。"装饰"的免疫电镜法是鉴别同源病毒的重要标准。     

免疫电镜技术在植物病毒研究中的应用和进展

早在1941年 Anderson 和 Stanley 曾在电镜下,观察到烟草花叶病毒(TMV)抗血清与抗原结合的络合物,然而免疫电镜技术直接应用于植物病毒诊断和研究,还是从本世纪六十年代开始,七十年代以来才发展较快。由于免疫电镜取样很省,     

用A蛋白免疫电镜快速检测几种蔬菜作物的两种杆状病毒

 应用A蛋白免疫电镜技术对几种蔬菜作物的长叶车前草花叶病毒(RMV)、烟草花叶病毒(TMV)的检测比常规的电镜负染技术至少要灵敏近10,000倍,比普通的免疫电镜技术要灵敏10~100倍,抗血清浓度稀释至400,000倍,病毒粗提液稀释到1,000,000倍或病毒提纯液浓度为2.5×10^-7 mg/ml时均能观察到病毒粒子。同时由于抗体分子能特异性地结合到病毒粒子表面,能够很容易地区分不同的病毒种类。
应用此项技术作者检测了杭州地区几种常见的蔬菜病毒病,对大白菜(Brassica campestris L.),蕃茄(Lycopersicum esculentum Mill),榨菜(Brassica juncea var.tsatsai Mao),雪里(Brassicajuncea var.multiceps Tsen et Lee)等作物发病期的叶或果的浸提液用A蛋白免疫电镜进行快速检测,结果在大白菜,番茄等病株上检测到较多的病毒粒子,且大多能被RMV抗血清修饰,同时在番茄病株检测到的少量病毒粒子亦能被TMV抗血清修饰,而榨菜及雪里等病株上检测到的病毒粒子很少能被RMV及TMV抗血清所修饰,另外,病毒粒子的含量以番茄病果中为最高,要比其它几种蔬菜作物叶子中高约10~30倍。     

用A蛋白免疫电镜快速检测几种蔬菜作物的两种杆状病毒

应用Ａ蛋白免疫电镜技术对几种蔬菜作物的长叶车前草花叶病毒（ＲＭＶ）、烟草花叶病毒（ＴＭＶ）的检测比常规的电镜负染技术至少要灵敏近１０，０００倍，比普通的免疫电镜技术要灵敏１０～１００倍，抗血清浓度稀释至４００，０００倍，病毒粗提液稀释到１，０００，０００倍或病毒提纯液浓度为２．５×１０－７ｍｇ／ｍｌ时均能观察到病毒粒子。同时由于抗体分子能特异性地结合到病毒粒子表面，能够很容易地区分不同的病毒种类。应用此项技术作者检测了杭州地区几种常见的蔬菜病毒病，对大白菜（ＢｒａｓｉｃａｃａｍｐｅｓｔｒｉｓＬ．），蕃茄（ＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍＭｉｌ），榨菜（Ｂｒａｓｉｃａｊｕｎｃｅａｖａｒ．ｔｓａｔｓａｉＭａｏ），雪里（Ｂｒａｓｉｃａｊｕｎｃｅａｖａｒ．ｍｕｌｔｉｃｅｐｓＴｓｅｎｅｔＬｅｅ）等作物发病期的叶或果的浸提液用Ａ蛋白免疫电镜进行快速检测，结果在大白菜，番茄等病株上检测到较多的病毒粒子，且大多能被ＲＭＶ抗血清修饰，同时在番茄病株检测到的少量病毒粒子亦能被ＴＭＶ抗血清修饰，而榨菜及雪里等病株上检测到的病毒粒子很少能被ＲＭＶ及ＴＭＶ抗血清所修饰，另外，病毒粒子的含量以番茄病果中为最高，要比     

几种电镜制样法中病毒在铜网上分布的确定

我们在改进病毒电镜制样方法时(注:请参见本刊本期中《乳胶溶液电镜法在检测植物病毒中的应用》一文)遇到这样的问题,即要将改进的乳胶溶液电镜法所制样品其铜网所捕获的病毒数与直沾法和免疫电镜法的相比较,以确定其灵敏度提高倍数。我们采用的是在使用相同规格铜网的前提下,将每种方法所制样品中各个网格所捕获病毒的平均数进行比较。各网格捕获病毒平均数按如下方法得来:依抽样原理,在适当而确定的     

应用斑点免疫法检测香石竹斑驳病毒

本文应用斑点免疫法(dotimmunobinding,简称DIB)检测了进口香石竹幼苗中的香石竹斑驳病毒。其中1990年从日本引进的材料检测了10个品种,全部呈阳性反应;1991年从荷兰引进材料检测的10个品种中有4个品种表现阴性反应,6个品种表现阳性反应。DIB检测结果与电镜观察结果高度一致,即DIB检测为阳性的材料在电镜下都可观测到病毒粒体,而DIB阴性反应的样品在电镜下检测不到粒体的存在。     

A 蛋白酶联法检测植物病毒的研究

用一种动物的特异抗体,与市售 A 蛋白(SPA)、A 蛋白酶标记物(HRP-SPA)组合成 A 蛋白酶联免疫吸附试验(SPA-ELISA)检测南方菜豆花叶病毒(SBMV)、烟草花叶病毒(TMV)纯化抗原和病株粗澄清液,灵敏度分别为0.128μg/ml 和1:10000。使用的 A 蛋白包被的适宜工作浓度为2.5μg/ml,兔抗 SBMV 血清作第一抗体适宜工作浓度为1:100000,作第二抗体适宜工作浓度为1:1000。检测 TMV 也得到相似的结果。该法的灵敏度是 ELISA-异种动物抗体双夹心法的1～25倍;是 ELISA 间接法的10～125倍;是免疫双扩散法的3000～6000倍。应用这种酶联法既不需要纯化抗体、也不要自己制备酶标记抗体,又不需要制备第二种动物特异抗体就可以得到酶联双抗体夹心法和异种动物抗体双夹心法相似或更好的结果,使 ELISA 更适于在植物检疫上推广应用。     

种传植物病毒及新检测技术

一、研究种传植物病毒的意义 较早以前,人们认为病毒的种传问题远不及真菌、细菌等病原的种传普遍和重要,在植物病毒病的流行过程中不是主要因素。但隧着植物病毒学和种子病理学发展,及各种检测技术的改进和提高,已报道的种子传带病毒数量,和由种子带毒的植物种类和数量越来越大(见表)。种子传毒逐渐引起了植病、     

10种植物病毒的基因芯片检测技术研究

 本研究设计了10种植物病毒和各种对照的探针, 将探针固定在醛基化玻璃片基上制备基因芯片。用常规的Trizol法提取植物总RNA, 根据病毒的外壳蛋白基因或复制酶基因设计特异性引物, 经RT-PCR扩增相应区段并用Cy3-dCTP进行标记。将标记的PCR产物与芯片杂交, 扫描仪对杂交结果扫描, GenePix Pro 4.0软件对杂交图像进行分析。结果表明, 该芯片可以从病毒感染样本中检测到特异性识别信号, 检测灵敏度比RT-PCR高10~100倍, 所以, 基因芯片能对植物病毒作出快速、准确的检测。     

胶体金免疫电镜技术用于烟草花叶病毒的检测

 本文报道了以改良的鞣酸法制备颗粒大小适于植物病毒标记的胶体金方法,以及以胶体金免疫电镜技术检测、鉴定植物病毒的方法,并以此法检测了烟草花叶病毒TMV。     

生物素抗生物素酶联法检测植物病毒的研究

生物素抗生物素引入酶联免疫吸咐试验(ELISA)检测南方菜豆花叶病毒(SBMV)、烟草花叶病毒(TMV)抗原和抗体,可使灵敏度提高10倍以上,非特异反应弱,尤其是检测周期由8小时缩短为3小时,在植物检疫、单克隆抗体阳性杂交瘤细胞检测筛选中应用,是一个快速、准确的好方法。     

检测植物病毒的三种血清学方法敏感性的比较

 以芋花叶病毒和豇豆花叶病毒为试验材料,进行了酶联免疫吸附试验,免疫吸附电子显微术和点免疫结合试验检测植物病毒的敏感性的研究。无论是检测感染组织粗汁液还是纯化的病毒,点免疫结合试验均优于酶联免疫吸附试验和免疫吸附电子显微术。在使用羟基吲(口乃木)磷酸盐和氮蓝四唑为碱性磷酸酶的底物时,点免疫结合试验检测纯化的豇豆花叶病毒的可测感度为0.35ng,芋花叶病毒为0.83ng。对三种检测植物病毒的血清学方法进行了比较,并讨论了点免疫结合试验的优点。     

应用细菌磁颗粒RT-PCR检测3种植物病毒

根据细菌磁颗粒对植物病毒颗粒的非特异性吸附作用,建立了一种新的提取植物病毒RNA的方法。利用细菌磁颗粒收集黄瓜绿斑驳花叶病毒、黄瓜花叶病毒和百合无症病毒等3种病毒颗粒,富集分离后,通过高温使其裂解释放出病毒RNA,进行RT-PCR检测。与利用Trizol试剂提取这3种植物病毒的RNA相比,具有操作简单、无毒性,能够显著缩短提取时间。对黄瓜绿斑驳花叶病毒的检测灵敏度验证表明:BMPs-RT-PCR与Trizol-RT-PCR的检测灵敏度相同,均为105倍的植物叶片组织稀释液。