用间接免疫荧光技术检测水稻细菌性条斑病菌的研究

本文报道了用于检测Xanthomonas campestris pv.oryzicola的间接免疫荧光技术。用兔抗X.c.pv.oryzlcola IgG处理标本,用羊抗兔免疫球蛋白荧光抗体染色,在荧光显微镜下观察。来自四川7个有代表性的X.c.pv.oryzicola菌株均为阳性反应,检测灵敏度为103～10~4个/ml。供试的X.c.pv.oryzae和X.1eersiae为阴性反应。检测四川40份稻种,选14份用间接法酶联吸附试验进行验证,结果趋向一致,证明间接法免疫荧光技术可以快速准确地检测稻种中的X.c.pv.oryzicola。     

苹果叶面附生微生物区系及其有益菌的研究 Ⅰ.叶面附生微生物区系的初步研究

本文分析了同一生态条件下苹果褐斑病的抗感品种的叶面微生物类群，结果表明：①不同抗感品种的叶片、感病品种中已感病的叶片、未感病叶片的叶面附生微生物数量和组成不同；②苹果叶面附生微生物由真菌、细菌、酵母菌、放线菌及自生固氮菌组成；③在苹果的整个生育期里，真菌中的以Cladosporium、Alternaria、Penicillium等出现频率较高；细菌中Bacillius、Pseudomonas、Xanthomonas等的出现频率较高，放线菌有Streptomyces；酵母菌中Aureobasidium、Cryptoccaceae等的出现频率较高；④在苹果生育期中，苹果叶面微生物的数量在盛花期有所下降，以后逐渐上升，果实膨大期达到最大值。     

苹果褐斑病的研究 Ⅰ病原的侵入和生物学特性

苹果褐斑病菌(Marssonina coronaria(Ell·et Davis) Davis)以芽管或附着胞一侵染丝直接穿透表皮侵入,叶背与叶面的侵入比为7:3。分生孢子萌发与营养条件关系密切,在蒸馏水中萌发率低,1％葡萄糖、10％苹叶浸汁及1％琼脂有促进作用,尤以琼脂的效果显著;分生孢子荫发适温为18～25℃,最适pH为6～7;水滴为孢子萌发所必须;光照的影响不大。该病菌适合用单孢分离。在PDA培养基上培养,菌丝不发达,但能产生分生孢子盘及分生孢子。     

苹果潜隐病毒的研究——Ⅱ.苹果茎沟槽病毒对苹果生理生化的影响

用金冠、富士二品种幼苗接种茎沟槽病毒(SGV)后,分期测定蛋白质、核酸、DNA、总氮、氨基酸、可溶性糖、铁和锌含量。结果表明:受SGV侵染的植株,核酸、蛋白质含量下降;DNA、总氮、游离氨基酸含量增加;铁含量增加,锌含量减少,可溶性糖含量增加。     

苹果褪绿叶斑病毒一步法RT-PCR检测

RT-PCR技术在植物病毒检测方面有着快速、灵敏、特异性强等优点。然而传统的RT-PCR是在两个酶(逆转录酶和Taq酶)分别催化下在两个体系中的两步反应,即由RNA逆转录为cDNA,再以模板cDNA进行PCR扩增,操作步骤比较繁琐,而且很容易造成交叉污染。笔者建立的一步法RT-PCR是在逆转录酶(M-MLV)和Taq DNA聚合酶共同作用下,只需在一个反应管中就可以完成反转录和cDNA扩增的全过程,两个步骤一步完成,以达到对苹果褪绿叶斑病毒快速、简便、敏感的检测。     

苹果褪绿叶斑病毒的ELISA检测技术研究

比较了直接双抗体夹心法（DAS－ELISA）和间接双抗体夹心法（F（ab)2-ELSIA)检测CLSV的范围（不同株系）,并分析了在病毒提取介质中加入某些特殊成分后,对直接双抗体夹心法检测CLSV效果的影响。结果表明,间接法可以检测较宽的病毒株系;当常规病毒提取介质中加入尼古丁、氯化 镁和聚酰胺时,标准双抗体夹心法的检测范围也可以扩大。     

苹果褪绿叶斑病毒的分子杂交检测

[目的]探索检测苹果褪绿叶斑病毒的技术体系。[方法]利用CTAB法提取感病苹果叶片总RNA,以总RNA为模板,利用特异性引物,建立利用cDNA探针检测苹果褪绿叶斑病毒的技术体系。[结果]扩增出了预期片段,经克隆、测序证明该片段为苹果褪绿叶斑病毒的特异性片段。以带有特异片段的质粒为模板,利用PER技术制备出地高辛标记的cDNA探针。[结论]以质粒为模板可高效制备大量探针。地高辛标记探针为非放射性标记探针,安全性较好,灵敏度较高,具有重要的应用价值。     

苹果黄始叶螨消长动态的研究

苹果黄始叶螨以雌成螨在苹果根际土壤中群集成团结网越冬。翌年芽萌动到花序分离至初花期是雌螨出蛰盛期。田间种群数量消长是:一年中的4月中下旬～5月中旬;8月中下旬～9月下旬出现两次高峰期。实验种群生命表结果是:净生殖率(R_o)为9.9107,世代平均周期(T)为25.0961、周限增长率(入)为1.0956,内禀增长率(r_m)为0.09139。     

无病毒与带病毒苹果树的内含物及生长结果习性比较研究

本试验对无病毒和带病毒富士、金冠苹果树的内含物及生长、结果、产量等指标进行了测定。结果表明,无病毒树的内源激素、核酸、蛋白质含量均高于带病毒树的含量;无病毒树较带病毒树生长强,分枝多,成花易,早期产量高;但二者的果实营养成分含量无明显差异。     

应用分析双链RNA技术诊断苹果潜隐性病毒病

本文报导一种以分析病毒双链RNA为依据,检测苹果潜隐性病毒的新方法。这种方法能快速、准确地从苹果组织中分离和分析病毒的双链RNA(ds RNA),因此能直接、有效地从病毒侵染的组织诊断苹果潜隐性病毒。双链RNA是从自然侵染的苹果叶片或花瓣用酚萃取,经CF-11纤维素层析纯化,再用6％聚丙烯酰胺凝胶电泳和溴乙锭或银盐染色分析ds RNA电泳图谱。经脱毒的苹果树叶片,未发现有病毒的ds RNA存在。文中还报导了使用这一技术诊断苹果潜隐性病毒的有关技术条件。     

苹果潜隐病毒的研究——Ⅰ 苹果感染茎沟槽病毒后过氧化物酶的活性及其同工酶的变化

对金冠、富士幼树接种茎沟槽病毒(SGV),分期测定其叶片的过氧化物酶活性及过氧化物酶同工酶,结果表明:苹果植物接种SGV后过氧化物酶活性增高,增酶高峰出现于接种后20—35天;过氧化物酶同工酶也发生变化,在接种后20—30天,富士、金冠两个品种先后各出现了两条健株所没有的G、I带和I、K带。     

苹果潜隐病毒的研究——Ⅲ.茎沟槽病毒对苹果内源激素的影响

用LC—6A高效液相色谱仪测试富士二年生苹果苗的三种内源激素。结果表明:受茎沟槽病毒侵染植株GA_3、CTK及IAA,三种内源激素的含量均较对照(无毒植株)低。GA_3降低最显著,比无毒植株低111.18％,CTK比无毒株低19.66％,IAA比无毒株低17.69％。     

侵染马铃薯的烟草坏死病毒的鉴定、提纯及抗血清制备

自马铃著植株上分离得到了烟草坏死病毒(TNV)。在测试的13科53种植物中,能侵染8科34种,但人工接种仅在接种叶上引起局部侵染,未发现其系统侵染寄主。该病毒的钝化温度为78～80℃,稀释限点10~(-5)～10~(-6),体外保毒期27～28天。提纯病毒经紫外吸收测定,最高吸收峰为260 nm,最低吸收峰为245 nm,提纯得毒率为7.8 mg/kg接种叶。病毒粒体球状,直径约28 nm。经免疫琼脂双扩散测定,该病毒与TNV标准抗血清产生明显的反应沉淀线。人工接种该病毒不能侵染马铃薯植株的地上部分。块茎病斑为ABC病的C型症状。感病植株所结块茎仅部分带毒。受侵染块茎下一年可产生病苗。     

苹果霉心病Alternaria spp在芽中越冬的研究

用红星(starking delicious)、金冠(Golden delicious)、秦冠(Qin delicious)三个品种的短果枝顶芽(花芽)、中长枝顶芽及中长枝侧芽(叶芽)等三种芽的鳞片分层剥取后,采用组织分离法和洗涤离心法分析研究,发现这三个品种芽的鳞片均带有AIternaria spp。三个品种中红星的带菌率及所带孢子量最高,三种芽中短果枝顶芽的带菌率及带孢子量最高,同时鳞片上所带的孢子于次年春均能荫发,可作为初次侵染源。三个品种中,红星田间果实发病率最高,这与芽内带A.spp及其孢子量成正相关。以上结果表明了A.spp能以菌丝和分生孢子在芽中越冬,所以芽是霉心病的一个重要越冬场所。     

实时定量PCR快速检测对虾白斑综合症病毒

根据对虾白斑综合症病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的保守序列,利用Primer Express2.0软件设计引物和Taqman探针,建立了WSSV的实时定量PCR检测体系.构建含有WSSV目的扩增片段的质粒为标准品,进行定量PCR扩增,结果表明标准品浓度在1.5×107～1.5×101个拷贝之间有"S"型扩增曲线,检测限为15个拷贝.标准曲线中模板浓度(X)与Ct值的关系为:Ct=-3.77 lgX+43.73,相关系数R2=0.9967.该检测方法特异性强,对传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)、斑节对虾杆状病毒(MBV)、肝胰腺细小病毒(HPV)以及对虾基因组DNA没有扩增反应.运用该方法对100尾对虾样品进行检测,14个对虾样品为阳性.而运用巢式PCR检测只有4个对虾样品为阳性.实时定量PCR方法检测WSSV,快速、特异、灵敏,在虾病的临床检测上具有重要意义.     

钙对苹果品种褐斑病的抗病性的作用研究

苹果品种幼苗叶片接种褐斑病菌后,钙含量的变化是苹果—褐斑病菌相互作用的结果。苹果不同品种叶片感染病原菌后,钙含量普遍增加,表现为被动的病理生理变化,品种感病程度愈高,增加量愈大。进一步提出了钙在苹果品种对褐斑病的抗病性中可能的作用。     

小麦叶片Rubisco抗体的制备及其应用

利用DEAE TOYOPEARL 650M快流速阴离子交换层析技术,1d内可收集高纯度的Rubisco。以纯化的Rubisco为抗原,免疫新西兰白兔,得Rubisco抗体。以Rubisco抗体建立单向免疫扩散法,定量测定Rubisco含量,研究小麦叶片光合作用日变化过程中Rubisco含量及其活力的变化。结果表明:单向免疫扩散法可用于小麦叶片Rubisco含量的测定。