超临界CO2萃取灵芝子实体三萜工艺优化及其与醇提法比较研究

采用超临界CO2 (SFE-CO2)技术萃取灵芝(Ganoderma lucidum)子实体中的三萜成分,通过单因素试验和正交试验确定最佳条件为:子实体粒度10目、夹带剂95％乙醇、压力35 Mpa、温度40℃、时间2.5h、CO2流量35 g/min、夹带剂体积:子实体重6:1(mL/g),萃取物的得率为2.42％,总三萜的得率为0.98％,萃取物中三萜的含量为40.5％.与传统的醇提法相比,SFE-CO2法中粗提物和总三萜的萃取率略低,但粗提物中三萜的含量较高,且HPLC研究表明,SFE-CO2的粗提物中三萜的种类较多.     

38株灵芝子实体抗肿瘤质量的生物评价

针对38株灵芝子实体样品,开展醇提物抑制He La、SK-OV-3肿瘤细胞增殖活性和三萜含量测定研究,对其抗肿瘤质量进行评价,筛选具有开发抗肿瘤产品潜力的优质菌株。实验结果表明,33号、34号2株灵芝对He La细胞和SK-OV-3细胞均具有较强的杀伤作用,对2株细胞增殖抑制IC50分别为16.55μg·m L-1、10.2μg·m L-1和31.9μg·m L-1、30.64μg·m L-1,可作为优质资源进行进一步开发。各菌株灵芝子实体的三萜含量在1.372 mg·g-1~6.184 mg·g-1之间,不同菌株子实体间三萜含量差异较大,细胞增殖抑制活性与三萜含量间不具有相关性,提示灵芝抗肿瘤原料质量评价宜考虑补充生物质量评价方法。     

无苦灵芝子实体多糖的研究

本研究从灵芝子实体多糖提取前工艺开始,利用95％的乙醇溶液浸泡回流提取灵芝子实体两次,绝大部分苦味成分从灵芝子实体中分流出来。醇提后的灵芝子实体再按常规水提并浓缩多糖溶液。灵芝子实体多糖在浓缩的同时,苦味也被浓缩,因而。多糖浓缩液还需进一步脱苦。研究表明,在含1g生药/1mL的灵芝子体实多糖浓缩液中,添加0.8％的β-环状糊精(β-CD)和1.2％的羧甲基纤维素钠(CMC-Na),既能稳定灵芝子实体多糖浓缩液,又能把苦味降到最低程度,为灵芝子实体多糖保健产品的深度开发提供了优良的原料。     

三株坦桑尼亚野生灵芝菌株人工栽培子实体活性成分含量分析

以国内灵芝(Ganoderma)栽培菌株粤GL-YW( G.lucidum)和粤GL-YWZ(G.sinense)为对照,对3株采自坦桑尼亚的野生灵芝(Ganoderma)菌株的人工栽培子实体进行多糖和三萜含量测定.结果表明,3个野生菌株子实体中多糖和三萜含量均显著高于对照菌株,值得进一步开发和推广.     

金耳菌丝体醇提物体外抗肿瘤抗病毒活性研究

采用体外肿瘤细胞株(小鼠白血病细胞株L1210、人乳腺癌细胞株MCF-7和人肠腺癌细胞株SW620)的增殖抑制试验模型和抗病毒(流感甲型病毒和疱疹病毒)的筛选模型,对3个金耳(Tremella aurantialba)菌株菌丝体醇提物活性进行比较研究.抗肿瘤试验结果表明,3种提取物材料在高浓度(200 μg/mL)时,对3个供试肿瘤细胞株的细胞增殖均有明显的抑制作用,其中以YK的抑制活性最高(对L1210、SW620和MCF-7的抑制率分别为89.4%,75.0%和64.1%);在中浓度(50 μg/mL)时,均表现出一定的抑制作用;而在低浓度(10 μg/mL)时,则均无明显的抑制作用.抗流感甲型病毒和抗疱疹病毒试验结果表明,只有YK对流感甲型病毒表现有抗病毒活性,但此活性较弱.     

猴头菌子实体醇提物的生物活性

通过对猴头菌(Hericium erinaceus)子实体的乙醇提取物进行萃取,得到了石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和剩余水分部共5个分部,通过定性鉴定分析了其中次生代谢物质的成分,并以保护PC12细胞损伤和抑制DPP-IV酶的活性为实验模型,寻找具有抗衰老、降血糖等生物活性组分。结果表明,猴头菌子实体的醇提取物中可能含有生物碱、酚类(或鞣质)、甾类(或萜类)、蒽醌等物质。5个分部对NaN3诱导所致的PC12细胞损伤均具有一定恢复作用,与对照(69.5%)比,剩余水分部活性最强(84.6%)。石油醚分部和剩余分部在浓度为1.0mg/mL时对DPP-IV酶的抑制率超过了阳性对照药(25.25%),而氯仿萃取分部在浓度为0.4mg/mL时活性已超过阳性对照药,说明氯仿分部具有较强的降血糖潜力。     

两株西藏白肉灵芝菌株特性初探

对西藏林芝地区的白肉灵芝(Ganoderma leucocontextum)菌株G-122和G-241进行鉴别分析,并对其栽培性状、有效成分含量和提取物功能等方面进行研究。基于形态学特性和ITS分析,2个菌株均鉴定为白肉灵芝。二者菌丝对峙培养产生明显拮抗线,菌丝体生物量差异显著(G-241高于G-122),子实体颜色不同(G-241和G-122分别为红褐色和黄褐色),G-241子实体单菇重高于G-122;有效成分含量差异也较大,G-122粗多糖含量高而G-241总三萜含量高;菌株G-122、G-241醇提物对乳腺癌MT-1细胞IC_(50)值分别为265.2和225.6μg/mL。实验结果表明菌株G-122和G-241为不同菌株。     

灵芝中性三萜类成分的抗肿瘤作用

从灵芝(Ganoderma lucidum)子实体中分离纯化得到中性三萜部分,经HPLC检测发现主要有8个峰,与灵芝三萜酸性部分的峰基本不重叠。灵芝中性三萜部分对多种肿瘤细胞的增殖有抑制作用,并观察到可诱导肠癌SW620细胞凋亡。     

不同生育期灵芝子实体水提物与其免疫活性

分析4个灵芝(Ganoderma)菌株不同生育期子实体水提物的提取得率、多糖含量、多糖分子量分布和其对巨噬细胞RAW 264.7 NO释放量的影响.结果表明,随着灵芝的生长发育,其子实体水提物得率呈逐渐降低的趋势,水提物中多糖含量差异显著.水提物经透析后其多糖的分子量分布主要集中在12 kDa至25 kDa之间,但不同生育期间的各分子量多糖的含量存在差异.芝蕾发育初期和成熟后期子实体水提物透析后的免疫活性较好.综合考量,认为成熟后期采收的灵芝子实体虽然多糖含量较低,但生物量较大,可获得较大量活性多糖,所以确定成熟后期为适宜采收期.     

三种因素对“沪农灵芝1号”子实体三萜的影响

以8种灵芝三萜标准品为对照,考察栽培生境、栽培方式、采收时期三种因素对我国灵芝主栽品种“沪农灵芝1号”子实体中三萜含量和指纹图谱的影响.结果表明,三种因素对灵芝子实体中的三萜含量具有显著影响,福建栽培所得灵芝子实体中三萜含量较高,代料栽培子实体三萜含量显著高于段木栽培,成熟期灵芝子实体的三萜含量较高;随着孢子粉采收时间的延长,子实体中三萜含量逐渐降低,但是各因素对灵芝子实体中三萜指纹图谱信息无显著影响,相似度均在0.93以上.     

不同日常食用加工方法对灵芝中活性成分利用的比较

为阐明日常的食用加工方法是否能充分利用灵芝(Ganoderma lingzhi)中的活性成分,用苯酚硫酸法和HPLC法分别检测龙芝二号子实体片经水煮、焖烧、水泡、酒浸四种加工处理的提取液中灵芝多糖和灵芝三萜含量,结果水煮、焖烧、水泡40min后多糖基本全部溶出,三萜溶出率分别为85.5%、83.1%、51.1%;50%的白酒浸泡7d后三萜溶出率为95.0%,而多糖溶出率仅为0.31%;用这些方法比较龙芝二号与菌草灵芝的处理结果,结果多糖和三萜溶出效果基本相同;通过比较,焖烧40min能使灵芝片中有效成分大部分溶出。     

紫芝子实体多糖的特征分析及其体外免疫活性

通过乙醇分步沉淀法从紫芝(Ganoderma sinensis)子实体水提取物中分离多糖,得到分步醇沉的粗多糖样品30E、50E和70E,比较了3个粗多糖样品的得率、多糖含量、单糖组成、重均分子量分布特征、刺激RAW 264.7细胞释放NO和促进小鼠脾淋巴细胞增殖的活性.结果表明:30E、50E和70E的多糖得率均较低,分别为0.04％、0.17％和0.49％;水解后的单糖种类基本相同,均有岩藻糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖,但是单糖比例差异较大,70E中还含有3.4％的木糖;紫芝多糖的重均分子量分布范围较广,从1.450×104到1.276×107,30E中有2个大分子量组分(重均分子量分别为8.867×106和1.276×107),50E和70E的重均分子量较小(＜2×104);分步醇沉的各粗多糖样品均具有体外刺激巨噬细胞释放NO和促进小鼠脾淋巴细胞增殖的活性,其中30E的活性最好.     

蛹虫草抗肿瘤和免疫活性部位的体外筛选

为筛选蛹虫草(Cordyceps militaris)子实体的抗肿瘤和免疫活性部位,采用系统溶剂法,分别用氯仿、乙酸乙酯、95%的无水乙醇、沸水(100℃)、3%草酸铵和5%NaOH依次提取并计算提取物得率,且测定了沸水提取物、草酸铵提取物、NaOH提取物1和2的多糖含量.采用体外抗肿瘤模型测定了氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和乙醇提取物对肿瘤细胞L1210和SW620的抑制活性;采用体外免疫增殖试验模型测定了沸水提取物、草酸铵提取物和NaOH提取物1和2的免疫活性.结果表明,乙酸乙酯提取物对肿瘤细胞L1210和SW620的抑制效果最好,当乙酸乙酯提取物浓度为200μg/mL时,抑制率分别为(85.2±2.5)%和(67.7±6.3)%;体外免疫活性测定结果表明,草酸铵提取物刺激小鼠脾淋巴细胞后的增殖活性最高,当浓度为500μg/mL时细胞增殖率为(312.0±7.2)%,与阳性对照PHA的细胞增殖率(329.3±3.0)%相当.     

樟芝子实体和菌丝体萃取物的抑菌及抗氧化活性

以樟芝(Taiwanofungus camphoratus)子实体、液体发酵菌丝体和固体培养菌丝体为研究对象,分别利用石油醚、氯仿和正丁醇有机溶剂进行萃取,获得相应的萃取物,测定其抑菌和抗氧化活性.结果表明:子实体氯仿和正丁醇萃取物以及固体发酵菌丝体氯仿萃取物对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)有较好的抑制效果;子实体石油醚、氯仿、正丁醇萃取物和固体发酵菌丝体氯仿萃取物对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)有较好的抑制效果,并且子实体氯仿萃取物对供试菌的抑菌效果均好于其它萃取物;子实体氯仿、正丁醇萃取物和固体发酵菌丝体氯仿萃取物具有超氧阴离子清除能力,清除超氧阴离子的IC50值分别为5.94、1.32和1.97 mg/mL;子实体石油醚、氯仿和正丁醇萃取物具有过氧化氢的清除能力,清除过氧化氢的IC5o值分别为0.13、0.11和0.18 mg/mL.     

5个日本枇杷品种植物学性状调查及果实品质比较

以大五星枇杷为对照,调查了引种四川的5个日本枇杷品种的植物学性状,测定果实维生素C、总酸、总糖及可溶性固形物等含量。结果表明,引进品种里见和有间综合性状表现最好,除可食率低于大五星外,单株产量与大五星无显著差异,单果重、维生素C、可溶性固形物含量等都高于大五星,适合在四川地区种植。     

赤芝子实体乙酸乙酯提取物的化学成分研究

用乙酸乙酯对赤芝(Ganoderma lucidum)子实体进行提取,并采用多种柱层析方法分离得到10个化合物,经质谱和核磁共振方法鉴定这10个化合物分别为拱状灵芝素A(1)、拱状灵芝素B(2)、对苯二甲酸正丁异丁二醇酯(3)、对苯二甲酸二丁酯(4)、α-羟基-24-烷酸(5)、棕榈酸(6)、硬脂酸(7)、N-苯乙基-苯甲酰胺(8)、原儿茶酸(9)和琥珀酸(10),其中化合物3、4、8、9和10是首次从赤芝子实体中分离得到的.     

利用大孔树脂制备灵芝活性三萜的研究

用D101大孔树脂作为填料,不同浓度乙醇梯度洗脱灵芝(Ganoderma lucidum)子实体提取物,利用HPLC对得到的不同洗脱物进行了分析对比,并利用体外抗肿瘤模型对洗脱物进行了活性研究.结果表明,90％和95％乙醇洗脱获得了灵芝中极性较弱的三萜组分,得率共计为6.7％.该三萜组分具有较强的抗肿瘤活性,其中,以95％乙醇洗脱获得的三萜组分活性最强,对肿瘤细胞K562、LNCaP增殖抑制的IC50值分别达到14.67 μg/mL和0.87 μg/mL.     

灵芝多糖提取物胶囊对小鼠免疫功能的影响

通过设3个浓度的药物组和空白对照组,分别进行脏器指数测定,ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验,绵羊红细胞诱导小鼠DTH试验,小鼠血清溶血素测定,抗体生成细胞检测,小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验,小鼠碳廓清试验,NK细胞活性测定试验。结果表明,灵芝多糖提取物胶囊能增加ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞的增殖能力和小鼠左后足跖部厚度差24 h测量值,提高小鼠血清溶血素抗体积数和溶血空斑数。表明灵芝多糖提取物胶囊具有较强的免疫调节作用。     

菊科植物蓬蒿提取物抑菌活性研究

以菊科蓬蒿属蓬蒿为试材,研究了水、50％乙醇和100％乙醇3种蓬蒿浸提物对灰葡萄孢菌、链格孢菌和黑根霉菌的孢子萌发和菌丝生长的影响.结果表明:蓬蒿提取物对灰葡萄孢菌和黑根霉菌的菌丝生长和孢子萌发具有较好的抑制作用,对链格孢菌的菌丝生长和孢子萌发的抑制作用不明显;对于灰葡萄孢菌,蓬蒿乙醇提取物对菌丝生长和孢子萌发的抑制作用大于水提物;黑根霉表现与其相反,水提取物比乙醇提取物对菌丝生长和孢子萌发的抑制作用更明显.     

柠檬黄蜡伞的抑菌活性及石油醚层成分分析

本实验对柠檬黄蜡伞子实体的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水相的抑菌活性进行了初步研究,并利用GC-MS对石油醚相成分进行了分析。结果表明,石油醚和乙酸乙酯相提取物对沙门氏菌、链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有抑制作用,乙酸乙酯提取物的抑菌作用大于石油醚提取物的抑菌作用。浓度为50 mg.mL-1时,乙酸乙酯层提取物抑菌率最高,针对以上4种细菌抑菌率分别为55.08%、42.97%、61.10%和50.08%,MIC值均为3.125 mg.mL-1。经GC-MS联用仪从石油醚萃取物中鉴定出5个化合物。