金针菇异戊烯基焦磷酸异构酶基因的克隆及表达分析

PCR扩增了金针菇(Flammulina velutipes)异戊烯基焦磷酸异构酶基因(FvIDI)的DNA全长和开放阅读框序列.该基因的ORF全长753 bp,DNA全长923 bp,含有3个内含子和4个外显子,编码250个氨基酸,金针菇异戊烯基焦磷酸异构酶相对分子质量为28450,等电点为5.05.采用实时荧光定量PCR技术研究FvIDI基因在不同发育时期和不同温度下的表达量,结果显示,FvIDI基因在采收期菌盖中表达量最高,4℃诱导处理2～4 h和37℃诱导处理2～6 h的表达量明显高于常规温度21℃处理.     

金针菇转运蛋白基因fv-mfs1的序列与表达分析

通过分析金针菇(Flammulina velutipes)子实体原基期、伸长期、成熟期的转录组数据,得到一个差异表达基因fv-msf1。对其结构、序列特征及表达情况进行分析,结果显示该基因全长2709 bp,包含13个外显子,12个内含子,开放阅读框长1770 bp,编码589个氨基酸。结构域分析表明该基因编码的蛋白含主要协助转运蛋白超家族(major facilitator superfamily,MFS)保守结构域。通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative fluorescence PCR,q-PCR)对子实体不同发育阶段以及菌盖不同发育时期的表达量进行分析,结果显示该基因在金针菇伸长期的菌盖(尤其是0.3~0.9cm)中高表达,由此推断该基因在金针菇菌盖发育中发挥一定作用。     

金针菇假定蛋白E3泛素连接酶基因的鉴定与表达分析

以金针菇基因组与转录组数据为基础,通过本地BLAST方法鉴定金针菇假定蛋白E3泛素连接酶基因,命名为GENE5116,并对其结构、编码蛋白的基本性质与表达模式进行了分析,以期了解其在金针菇子实体生长发育过程中的作用。结果表明:该基因有9个外显子,8个内含子,基因总长为1998 bp,共编码438个氨基酸残基,相对分子质量为48987.36,等电点8.83;系统进化分析结果表明该基因与真菌E3泛素连接酶具有高度同源性,与陶兰柱担菌(Cylindrobasidium torrendii)亲缘关系最近;实时荧光定量PCR结果表明该基因在菌柄的表达量最高且菌柄上部基因表达量显著高于下部,在菌丝的表达量最低,所以推测该基因可能与子实体菌柄伸长有关。     

葡萄PP2C家族基因的鉴定与表达分析

参考拟南芥（Arabidopsis thaliana）的PP2C基因注册序列,从葡萄（Vitis vinifera）全基因组中鉴定得到PP2C家族基因27个,分为10个亚族A、C ~ I、K、L。编码氨基酸181 ~ 1 084个,理论等电点4.46 ~ 8.98。亚细胞定位分析表明,葡萄PP2C基因家族主要在细胞质、叶绿体和细胞核中表达。二级结构主要以α–螺旋和不规则卷曲为主。葡萄PP2C基因芯片表达谱分析发现,该家族成员在葡萄不同组织中响应不同的逆境胁迫。qRT-PCR分析表明,葡萄试管苗在100和50 mmol ? L-1 ABA、10% NaCl和10% PEG单独处理6 h后VvPP2C02的诱导表达量最高,分别是对照的11倍、8倍、14倍和13倍。     

葡萄PYL基因家族的鉴定与表达分析

【目的】通过分析葡萄(Vitis vinifera L.)PYL基因在非生物胁迫条件下的响应情况,丰富PYR/PYL/RCAR(Pyrabactin Resistance/Pyr1-Like/Regulatory Components of ABA Receptor)在ABA信号和启动信号转导中的功能。【方法】利用生物信息学方法,筛选葡萄中的PYL基因,并对其进行生物信息学及非生物胁迫下的响应分析。【结果】从葡萄基因组中共鉴定出6个PYL基因,Vv PYL家族无染色体偏好性,Vv PYL5无内含子结构;除Vv PYL4外均富含酸性氨基酸,该家族成员主要定位于细胞质中,并有多个保守位点。10%(ω)PEG和100μmol·L~(-1)ABA处理6 h后,Vv PYL1和Vv PYL2表达水平与对照相比差异显著,分别为对照的1.3~1.8倍。50μmol·L~(-1)ABA处理6 h后,Vv PYL1表达水平与对照差异显著,为对照的1.5倍;400 mmol·L~(-1)Na Cl、10%PEG、50μmol·L~(-1)ABA和100μmol·L~(-1)ABA处理24 h后,Vv PYL1和Vv PYL2的表达水平显著高于对照,为对照的1.2~2.2倍,400 mmol·L~(-1)Na Cl处理24 h后,Vv PYL6的表达水平显著高于对照,为对照的1.6倍。【结论】克隆得到葡萄的6个PYL基因,高度保守,分为3个亚组;能够响应不同非生物胁迫。本研究为葡萄PYL基因在逆境应答中的功能研究提供了基础。     

不同菌株与培养料对金针菇子实体氨基酸含量的影响

金针菇子实体的氨基酸含量,特别是人体必需的氨基酸含量直接影响其营养价值,所以不同培养料对金针菇子实体氨基酸含量有无影响及金针菇不同菌株的子实体氨基酸含量是否相同,是一个值得研究的问题。我们于1988年结合金针菇培养料筛选试验和品种评比试验进行了此项研究。结果证明金针菇不同品种子实体氨基酸含量不同,不同培养料对金针菇子实体氨基酸含量的影响也不同。现将研究结果报道如下。     

黑木耳Mn-SOD基因的分子克隆与表达分析

以黑木耳DL202为试材,采用RT-PCR技术克隆了Mn-SOD基因全长,并对其进行生物信息学分析和表达分析,以期为进一步研究Mn-SOD基因在黑木耳抗逆过程中的功能奠定基础。结果表明：Mn-SOD基因cDNA全长为609 bp,编码202个氨基酸,命名为Ah-MnSOD;蛋白具有锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)家族的保守结构域,不具有跨膜结构和信号肽;亚细胞定位主要位于过氧化物酶体中;系统进化分析表明Ah-MnSOD与Auricularia subglabra亲缘关系最近。此外,构建了Ah-MnSOD基因的原核表达载体并成功诱导出目的蛋白。荧光定量PCR结果显示Ah-MnSOD基因在不同发育阶段均有表达,且在原基中表达最高。     

葡萄SnRK2家族基因的鉴定与表达分析

以‘宝石无核’(Ruby Seedless)葡萄试管苗为材料,采用RT-PCR技术,克隆得到8个葡萄Sn RK2家族基因。序列分析发现,该家族基因蛋白结构在N端相对保守,而在C端极其特异;聚类结果表明葡萄Sn RK2基因家族可以分为3个亚家族;对这8个基因所编码的蛋白质进行分析发现,其富含酸性氨基酸,且均为亲水蛋白;基因组结构分析发现Vv Sn RK2.2和Vv Sn RK2.8含有10个外显子,其他6个均含9个外显子;对蛋白二级结构分析发现8个基因编码的蛋白主要以α–螺旋、β–转角和不规则卷曲为主;亚细胞定位预测,8个基因主要定位于细胞质中。顺式作用元件分析表明,除Vv Sn RK2.1、Vv Sn RK2.2、Vv Sn RK2.6外,其他基因顺式作用元件包含ABRE、DRE/CRT、LRTE中的一个或多个。定量PCR分析表明,Vv Sn RK2的表达存在组织差异性,Vv Sn RK2.7在根中表达水平最高,是叶片的3.8倍,Vv Sn RK2.8在茎中表达水平最高,是叶片的5.0倍。0~–4℃处理后,表达水平下调幅度最小的为Vv Sn RK2.2,Vv Sn RK2.7下调幅度较大,Vv Sn RK2.8的表达水平为0;30℃处理后Vv Sn RK2.2和Vv Sn RK2.5上调表达,分别为对照的3.8倍和3.6倍;Vv Sn RK2.1和Vv Sn RK2.2与盐胁迫调节紧密相关,Vv Sn RK2.5与干旱胁迫调节密切相关。     

金针菇不同生育阶段基质组成元素的变化及其转化率研究

本文探讨了棉籽壳栽培金针菇(Flammulina velutipes)不同生育阶段基质组成元素的变化及其转化的情况。结果表明,金针菇对基质中C、N、P、K的转化率较高,分别为7.54％、17.82％、85.93％和21.04％,而对Na、Ca、Mg、Zn、Cu、Fe等微量元素的转化率较低。金针菇对基质中矿质元素的吸收利用具有选择性,与基质中元素含量没有线性关系。     

不同培养料栽培金针菇试验

以醋槽、麦秸、高梁秸和玉米秸为主料，搭配少量棉籽壳，采用袋栽法试栽金针菇。试验设５个配方，其中配方５为对照。结果表明，配方１、２、３、４菌丝生长速度、鲜菇产量及质量均高于对照，生物学效率分别比对照高４３．４％、７３．６％、５２．８％和１１３．２％。     

不同包装材料自发气调对冷藏金针菇活性氧代谢的影响

以金针菇为试验材料,分别采用纳米材料和普通聚乙烯（PE）材料包装后置于（2 ± 1）℃冷库贮藏,通过观察外观变化并定期测定包装袋内气体成分、相对湿度（RH）和自由基清除剂相关酶等指标,探索适于金针菇冷藏的气体条件。结果表明,纳米材料包装袋内气体为CO211.5%,O2 1.6%,RH 89.2%,而PE材料包装袋为CO2 9.7%,O2 2.4%,RH 87.9%,纳米材料显著提高了包装袋内CO2,降低了O2（P < 0.05）,同时发现此环境可以显著提高和保持超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）和抗坏血酸过氧化物酶（APX）的活性;抑制超氧阴离子、过氧化氢（H2O2）的累积,延缓丙二醛（MDA）含量的升高（P < 0.05）;保持金针菇外观品质,贮藏期从12 d延长至20 d。     

金针菇产量效应探讨

影响袋栽金针菇高产优质的七大因子：栽培季节、品系、种级、栽培袋规格、培养料配方、水分管理、催蕾技术。作者阐述了如何协调该七大因子而使金针菇生产达到预期目的的具体看法。     

金针菇果冻的研制

以金针菇子实体或深层培养所获得的菌丝体为原料，以普通果冻加工工艺为基础，将金针菇与果冻有机结合，所制得的产品不仅色、香、味、形俱佳。而且营养丰富，健康性强，成本低廉，方便食用，是一种新型营养性果冻，消费市场广阔。该生产工艺同样适用于其它食用菌的加工。     

套袋包装对采后金针菇耐藏性的影响

研究了不同气密性薄膜袋包装对金针菇保鲜效果的影响。结果表明：套袋包装能有效地抑制金针菇的呼吸代谢和蒸腾作用，减少营养成分的损失，延长保鲜寿命；不同气密性包装袋对金针菇的保鲜效果不尽相同，微孔包装袋的保鲜效果最好，密封包装袋次之，大孔包装袋最差，与对照差异不大；采用微孔袋包装的金针菇．10℃低温下贮藏15d，菇体变化不大，褐变极少，无异味，营养品质保持较好.     

金针菇菌株的酯酶同工酶分析

本文应用垂直平板聚丙烯酰胺不连续电泳,对金针菇(Flammulina velutipes)12个栽培菌株的菌丝体和其中9个菌株的子实体进行酯酶同工酶比较;并对金针菇子实体发育不同时期和不同部位酯酶同工酶的变化进行分析.结果表明,金针菇菌株间酯酶同工酶谱变化较大,且在子实体阶段比菌丝体阶段表现更为明显;同一菌株在于实体不同发育时期和不同部位酶带数量稳定,但显色强弱有明显的变化.子实体伸长期和成熟阶段的菌盖部位酶带显色最深.