胡萝卜悬浮细胞系及高效再生系统的建立

以胡萝卜块根为材料诱导愈伤组织,并建立悬浮细胞系,然后将悬浮细胞和愈伤组织分别转入分化培养基进行分化培养。结果表明,胡萝卜块根形成层愈伤组织诱导率为100%,最佳激素种类和用量为2,4!D0.1mg/L;根据外观可将愈伤组织大致分为4种类型,I型是直接建立悬浮细胞系的良好来源,Ⅲ型经继代培养后可用于悬浮细胞系的建立;静止法是胡萝卜悬浮细胞系简单而有效的继代方法;胡萝卜愈伤组织分化的最佳培养基是MS或B5基本培养基,MS培养基上的再生苗可直接生根,而B5培养基上的再生苗在原培养基上很难生根,需要转移到MS培养基上才能生根。     

Expression and cell type--specific processing of human preproenkephalin with a vaccinia recombinant

The posttranslational maturation of a complex precursor polyprotein, human proenkephalin, was assessed by infection of a wide spectrum of cell types with a recombinant vaccinia virus that expressed human proenkephalin. The infected cells rapidly produced both cellular and secreted Met-enkephalin immunoreactivity. Although each cell line could secrete intact proenkephalin, only a mouse pituitary line was capable of processing proenkephalin to mature enkephalin peptides. The quantity of intact proenkephalin secreted from BSC-40 cells (derived from African Green monkey kidney) was sufficient to establish the value of vaccinia virus as a mammalian cell expression vector.     

全磷和缺磷条件下甘蔗叶悬浮细胞主要生长指标的比较

研究了以甘蔗基因型US66-56-9的心叶为材料，对甘蔗愈伤组织进行诱导和建立甘蔗叶片悬浮细胞系，并对悬浮细胞进行全磷和缺磷处理，然后对二者的生长曲线，细胞含水率及培养基pH等变化进行了比较，结果表明；与全磷条件相比，缺磷胁迫抑制细胞的生长，导致细胞含水率较高，使培养基的pH值在生长过程中基本保持酸性状态。     

Sequential establishment of stripe patterns in an expanding cell population

Periodic stripe patterns are ubiquitous in living organisms, yet the underlying developmental processes are complex and difficult to disentangle. We describe a synthetic genetic circuit that couples cell density and motility. This system enabled programmed Escherichia coli cells to form periodic stripes of high and low cell densities sequentially and autonomously. Theoretical and experimental analyses reveal that the spatial structure arises from a recurrent aggregation process at the front of the continuously expanding cell population. The number of stripes formed could be tuned by modulating the basal expression of a single gene. The results establish motility control as a simple route to establishing recurrent structures without requiring an extrinsic pacemaker.     

东北天南星体细胞胚胎发生及植株再生体系的优化

为建立东北天南星体细胞胚胎发生体系,以东北天南星幼叶为外植体,应用均匀设计法筛选其最适合的胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导、体细胞胚胎发育及植株再生的培养基。结果表明,东北天南星叶片胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导最适宜的培养基为MS+6-BA 2.5 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L,诱导率为98%;体细胞胚胎发育及植株再生最适宜的培养基为MS+6-BA 0.9 mg/L+NAA 0.1 mg/L+IAA 0.1 mg/L,体细胞胚萌发率为99.5%,萌发的胚20 d后全部发育成完整植株。     

Modulation of the metastatic capability in B16 melanoma by cell shape

The lung colonization of B16-F1 cells grown in flat and spherical configurations was studied. Cells cultivated in vitro as spheroids on a nonadhesive substrate expressed in a reversible fashion a marked increase in their propensity to establish metastases. The altered metastatic capability was accompanied by a reversible reduction in the accessibility of cell surface proteins to external iodination and by a dramatic decrease in the synthesis of vimentin.     

野大麦幼根和幼叶悬浮细胞系的原生质体培养

以野大麦（Ｈｏｒｄｅｕｍｂｒｅｖｉｓｕｂｕｌａｔｕｍ（Ｔｒｉｎ．）Ｌｉｎｋ）的幼根、幼叶为外植体,诱导愈伤组织,建立悬浮细胞系。利用胚性悬浮细胞系进行质壁分离处理再游离原生质体,在不同的光照条件下进行原生质体培养,并由原生质体再生出小细胞团。     

表达含前S的乙肝病毒表面抗原重组CHO细胞株的建立和特性检测

为建立表达含前S基因乙肝病毒表面抗原的细胞株,将笔者所在实验室构建的表达含前S基因乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的真核表达质粒共转染CHO/dhfr 细胞,通过筛选,获得可表达含前S基因乙肝病毒表面抗原的重组CHO细胞,然后进行亚克隆,用氨甲喋呤(MTX)加压选择,以 ELISA 法检测目的蛋白表达量,筛选获得稳定表达目的蛋白的细胞株,并对其进行特性鉴定.最终获得了ClO和A10两株稳定高表达含前S基因乙肝病毒表面抗原的细胞株.     

温度和处理时段对西瓜四倍体诱导的影响及其倍性鉴定

以3个不同熟性两瓜为诱导材料,幼苗两叶一心时摘心后,用秋水仙素滴苗,以不同温度及不同时间段进行处理研究对四倍体的诱导.结果发现,西瓜幼苗的成活率和诱导率因不同品种、处理温度和处理时间而异.幼苗摘心后处理的温度越低,成活率越高,随之诱导率也越高,在29℃时幼苗的成活率和诱导率高于32℃和35℃.不同时间处理对不同基因型的成活率和诱导率虽不同,但均是在每天的17:00-18:00处理时最高.四倍体西瓜的叶片和花器官比二倍体的大,颜色较深.叶片的保卫细胞的长度和叶绿体数目随倍性的增加而增加.采用改良品红压片法能够清楚地鉴定花粉母细胞染色体数目,是可靠的鉴定方法.     

Initiating and cancer-propagating cells in TEL-AML1-associated childhood leukemia

Understanding cancer pathogenesis requires knowledge of not only the specific contributory genetic mutations but also the cellular framework in which they arise and function. Here we explore the clonal evolution of a form of childhood precursor-B cell acute lymphoblastic leukemia that is characterized by a chromosomal translocation generating a TEL-AML1 fusion gene. We identify a cell compartment in leukemic children that can propagate leukemia when transplanted in mice. By studying a monochorionic twin pair, one preleukemic and one with frank leukemia, we establish the lineal relationship between these "cancer-propagating" cells and the preleukemic cell in which the TEL-AML1 fusion first arises or has functional impact. Analysis of TEL-AML1-transduced cord blood cells suggests that TEL-AML1 functions as a first-hit mutation by endowing this preleukemic cell with altered self-renewal and survival properties.     

伏马毒素B1单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA方法的建立

采用戊二醛法将半抗原伏马毒素B1分别与载体蛋白钥孔血蓝蛋白（KLH）和蛋白卵清白蛋白（OVA）偶联成为完全抗原KLH-FB1和OVA-FB1。OVA-FB1作为包被抗原建立ELISA方法;KLH-FB1作为免疫原免疫8周龄Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞融合技术制备单克隆抗体。经三次亚克隆后,筛选出两株（6H3,6H11）能特异、稳定分泌抗FB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。选择其中一株杂交瘤细胞通过体内诱生腹水的方法制备单克隆抗体,经检测表明单克隆抗体的亚型为IgG1,轻链为κ型。采用间接ELISA测得腹水纯化后效价达l∶16 000,抗体对伏马毒素的半数阻断浓度（IC50）为8.26 ng/mL,对玉米赤霉烯酮、黄曲霉素B1等结构类似物几乎不存在交叉反应,与其他结构的氯丙嗪、链霉素等无交叉反应。利用获得的抗FB1单克隆抗体,建立了间接竞争ELISA检测方法,检测灵敏度为0.44 ng/mL,检测线性范围为0.93~73.06 ng/mL,加标回收率在线性范围内达到回收率可达78.4%~102%。     

版纳微型猪近交系新生猪成纤维细胞的体外培养及其生物学特征研究

 试验以版纳微型猪近交系新生猪耳部皮肤组织为材料,采用胰蛋白酶消化法培养成纤维细胞,并对其进行细胞形态观察、细胞冻存前和复苏后存活率测定、生长曲线绘制和染色体核型分析等生物学特征检测。结果表明：版纳微型猪近交系新生猪成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态;细胞冻存前和复苏后存活率分别为980%和9407%;生长曲线呈“S”型,倍增时间为33h;对所制备的染色体核型分析显示2n=38（XY）,并在体外培养14代后仍能保持正常核型。本研究建立了稳定的版纳微型猪近交系新生猪成纤维细胞的培养方法,将为体细胞克隆、转基因和异种器官移植等相关的研究提供技术基础     

低浓度紫杉醇诱导A549细胞凋亡研究

采用0、1．5、3、6nmol／L紫杉醇处理A549细胞,建立低浓度紫杉醇诱导非小细胞肺癌凋亡模型．分别采用流式细胞术、细胞计数和免疫印迹法分析细胞凋亡、细胞增殖和Bcl-2家族凋亡相关分子的表达。结果表明,低浓度紫杉醇以浓度和时间依赖的方式诱导细胞凋亡并上调Bim分子表达,而对Bcl-2家族其他凋亡相关分子无显著影响。     

Cortical flow in animal cells

A concerted flow of actin filaments associated with the inner face of the plasma membrane may provide the basis for many animal cell movements. The flow is driven by gradients of tension in the cell cortex, which pull cortical components from regions of relaxation to regions of contraction. In some cases cortical components return through the cytoplasm to establish a continuous cycle. This cortically located motor may drive cell locomotion, growth cone migration, the capping of antigens on a lymphocyte surface, and cytokinesis.     

动物细胞培养物中支原体污染的检测

[目的]建立检测细胞培养物中支原体快速有效的方法。[方法]从6种常见污染细胞的支原体16sRNA中选择2段高度保守的核酸序列作为引物,用PCR和DNA荧光染色法来检测实验室中25种动物细胞株。[结果]用DNA荧光染色法检测实验室中25种动物细胞株阳性率为24％,可疑阳性为16％;而用PCR法检测阳性率为36％。[结论]PCR法较DNA荧光染色法灵敏度更高、特异性更强,将2种方法结合应用效果更好。     

改良溶血性贫血动物模型的建立

[目的]建立一种改良的小鼠急性溶血性贫血模型,为临床药物试验提供依据。[方法]采用连续用药方式对昆明小鼠皮下注射盐酸苯肼来制备动物模型,每日检测网织红细胞的比例、红细胞数量、白细胞数量、血红蛋白含量。[结果]血液检测显示,用药2～3 d后小鼠开始出现贫血现象,第7天左右红细胞数量降低60.0%以上,网织红细胞比值最高达19.5%,同时血红蛋白含量降低约67.0%。[结论]改良的小鼠急性溶血性贫血模型制备方法可行,符合血液学检测标准。     

猪白介素18基因在BHK细胞中的表达

将猪白介素18(Porcine interleukin18,PIL-18)基因亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,构建了重组表达质粒pEGFP-PIL-18,利用脂质体法转染BHK细胞,采用荧光显微镜实时观察和RT-PCR检测技术确定目的蛋白的表达情况.结果在转染重组质粒24 h4、8 h后的BHK细胞中均观察到绿色荧光,转染的BHK细胞经G418筛选14 d后,用RT-PCR法检测目的基因,并扩增到长576 bpd的目的cDNA片段。表明在BHK细胞中成功地表达了PIL-18与EGFP的融合蛋白,这为下一步建立稳定表达PIL-18的细胞系奠定了基础.     

比较两种免疫缺陷动物人肝癌模型的肿瘤生物学特性

为探讨裸小鼠和裸大鼠(rnu/rnu)两种免疫缺陷动物人肝癌皮下移植与原位移植后肿瘤生长和转移等生物学特性的差异,将Huh-7细胞株接种至裸小鼠皮下成瘤后采用组织学完整的组织块移植于裸小鼠和裸大鼠皮下和肝脏,建立皮下和原位移植模型,观察所建立模型的皮下和原位成瘤率、移植瘤生长、侵袭和转移情况,同时进行了病理组织学、超微结构、细胞增殖周期和异倍体的观察.裸大鼠皮下移植瘤模型肿瘤的生长速度远远大于裸小鼠.原位移植瘤模型裸大鼠成瘤率高达95.0%,其肺转移率形成率为50.0%,均高于裸小鼠.此实验证明应用裸大鼠较裸小鼠更适用于建立肝癌的皮下和原位移植模型,为探讨肝癌转移的生物学机制和抗转移治疗提供了理想的动物模型.     

简易压片法观察水稻有丝分裂和减数分裂行为

[目的]建立一套简单易行的染色体压片技术,获得水稻染色体资料。[方法]以水稻根尖和花药为材料,采用改进后的压片法进行制片,对水稻有丝分裂和减数分裂过程进行显微观察取像。[结果]水稻有丝分裂包括间期、前期、中期、后期、末期5个时期,中期的染色体缩至最短,是观察与研究染色体的好时期。水稻减数分裂包括减数分裂Ⅰ、减数分裂Ⅱ 2个过程,其中在减数分裂I 过程中发生了染色体复制,减数分裂Ⅱ过程中仅发生了细胞分裂。[结论]改进后的水稻染色体压片技术能够获得准确的染色体资料,可为育种和遗传操作提供依据。     

大鼠大脑皮质神经元体外分离培养和纯化研究

为建立动物中枢神经疾病的细胞作用模型,根据大鼠大脑皮质神经元的生存特性。按照抑制筛选的原理,对大鼠大脑皮质神经元进行了体外培养、纯化和鉴定。结果表明:培养的大脑皮质神经元在体外发育良好,经神经元特异性的烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色证明其纯度较高,可以用于进一步细胞作用模型的建立。